丙酮酸钠液相检测方法

1. 天冬氨酸氨基转移酶（AST）赖氏法试剂盒说明书

天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒
（赖氏法）使用说明书

用途
本品适用于血清或血浆中天门冬氨酸氨基转移酶的体外测定。
原理
血清或血浆中的天门冬氨酸氨基转移酶能使 α-酮戊二酸和门冬氨酸转移氨基和
酮基，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸在反应过程中可自行脱羧成丙酮酸。丙酮酸
与 2.4-二硝基苯肼反应生成 2.4-二硝基苯腙，在碱性溶液中显红棕色。比色后，查
标准曲线，即可求得酶的活力单位。

试剂成分
R1： 天门冬氨酸氨基转移酶基质液： K2HPO4•3H2O 100mmol/L， KH2PO4 100mmol/L
DL-门冬氨酸 200mmol/L，α-酮戊二酸 2.0mmol/L，NaN3 0.1％；
R2：2.4-二硝基苯肼溶液：浓 HCL 100mmol/L， 2.4-二硝基苯肼 1.0mmol/L；
R3：NaOH 4.0 mol/L
样本
血清或血浆。

操作步骤
1．在测定前将天门冬氨酸氨基转移酶基质液在 37℃水浴 5 分钟后，按下表进行操作：
测定管 对照管
血清或血浆（ml） 0.10 0.10
天门冬氨酸氨基转移酶基质液（ml） 0.50
混匀后，37℃水浴 60 分钟

2.4-二硝基苯肼（ml） 0.50 0.50
天门冬氨酸氨基转移酶基质液（ml） 0.50

2． 混匀37℃水浴 20 分钟后， 再分别加入0.40 M 氢氧化钠溶液 5.0ml 置室温 10 分钟；
3．以对照管校正“零”点，读取在波长505nm处吸光度（A）值；
4．从标准曲线表查得天门冬氨酸氨基转移酶活力单位。
标准曲线绘制
1．按下表进行操作：
管 号 0 1 2 3 4
生理盐水（ml） 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10
2.0mmol/L丙酮酸钠校准液（ml） 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20
天门冬氨酸氨基转移酶基质液（ml） 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30
相当于酶活力单位 0 24 61 114 190

2．各管加入 2.4-二硝基苯肼 0.50ml 混匀，37℃水浴 20 分钟后，再分别加入 0.40 M
氢氧化钠溶液 5.0ml，置室温10分钟；
3．以“0”号管校正“零”点，读取各管在波长505nm处吸光度（A）值；
4．以吸光度（A）值为纵坐标，酶活力单位为横坐标绘制标准曲线。
参考值范围
赖氏单位：8－28（卡门氏单位）
注意事项
本产品在岛金－UV1601 PC 型仪器上通过第三方检测， 用于其他仪器需进行验证。
本公司备有多种仪器上机参数供参考。
储存及效期
试剂盒自生产日起避光储存于 2-8℃可稳定十二个月。

2. 丙酮酸钠与丙酮酸

因为丙酮酸极不稳定，极易被氧化，弱氧化剂Fe与H2O2能把丙酮酸氧化成乙酸并放出二氧化碳，因此一般用丙酮酸的盐

3. 做实验丙酮酸钠为什么要现配现用

晚上好，丙酮酸钠在常温下容易受微生物影响变质以及不耐氧化，做生化实验试剂你可以把它和抗坏血酸当作是同一类高敏试剂需要避光避氧和防潮保存。用去离子水现配现用是为了防止在水中降解影响实验数据有偏差，请酌情参考。

4. 在红外光谱测定中固体样品有哪几种制样方法

(1)压片法
将1~2mg试样与200mg纯KBr研细均匀，置于模具中，用(5~10)x107Pa压力在油压机上压成透明薄片，即可用语测定。试样和KBr都应经干燥处理，研磨到粒度小于2微米，以免散射光影响。
(2)石蜡糊法
将干燥处理后的试样研细，与液体石蜡或全氟代烃混合，调成糊状，夹在盐片中测定。
(3)薄膜法
主要用于高分子化合物的测定。可将它们直接加热熔融制或压制成膜。也可将试样溶解在低沸点的易挥发溶剂中，涂在盐片上，待溶剂挥发后成膜测定。

5. 丙酮酸的检验方法是什么

在这里有，有地址，你看看吧！你可以在网络上找工标网到工标网搜索后下载以下的详细资料！
标准编号:HG 3-1166-1984
标准名称:化学试剂 丙酮酸钠
标准状态:作废
替代情况:替代HG 3-1166-1978
实施日期:1993-1-1

6. 高效液相色谱常用什么色谱法

高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
1．液固色谱法 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异构体。
2．液液色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。
涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。
正相色谱法 采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法 一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。

正相色谱法与反相色谱法比较表

正相色谱法 反相色谱法
固定相极性 高～中 中～低
流动相极性 低～中 中～高
组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出

从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。
3．离子交换色谱法 固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的pH值和离子强度影响。pH值可改变化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用。流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。
离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。
4．离子对色谱法 又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。
分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。
分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。
离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。
5．排阻色谱法 固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。

色谱法的基本原理
利用样品混合物中各组分理、化性质的差异，各组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物得到分离。
两相中，固定不动的一相称固定相；移动的一相称流动相。
分类：
根据流动相分—以气体作流动相—气相色谱——固定相为液体 气-液色谱
固定相为固体 气-固色谱
—以液体作流动相—液相色谱——固定相为液体 液-液色谱
固定相为固体 液-固色谱
—当流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体时——超临界色谱

根据固定相的附着方式
—固定相装在圆柱管中—柱色谱
—固定相涂敷在玻璃或金属板上—薄膜色谱（平板色谱）
—液体固定相涂在纸上—纸色谱（平板色谱）

根据分离机理
—分配色谱—样品组分的分配系数不同
—吸附色谱— 样品组分对固定相表面吸附力不同
—体积排阻色谱—利用固定相孔径不同，把样品组分按分子大小分开
—离子交换色谱—不同离子与固定相商相反电荷间的作用力大小不同

根据极性
—流动相极性＞固定相极性-反相色谱
—流动相极性＜固定相极性-正相色谱

气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。所以，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱。

一、吸附色谱（adsorption chromatography）
又叫液固色谱法：流动相是液体，固定相是固体。

分离原理：固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中 心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。

固定相： 固定相通常是强极性的硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂。活性硅胶最常用。

流动相： 弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲 烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。
应用： 对于极性，结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的 分离。 缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。

二、分配色谱
原理： 固定液机械的吸附在惰性载体上，样品分子依据他们在流动相和固定相间的溶解度不同，分别进入两相分配而实现分离。
固定相：将一种极性或非极性固定液吸附在惰性固相载体上。如全多孔微粒硅胶吸附剂。
根据极性不同分类：正相分配色谱—固定相载体上涂布的是极性固定液；
流动相是非极性溶剂；
可分立极性较强的水溶性样品；
弱极性组分先洗脱出来。

反相分配色谱—固定相载体上涂布的是非极性或弱极性固定液；
流动相是极性溶剂；
强极性组分先洗脱出来。
液-液分配色谱固定相中的固定液体往往容易溶解到流动相中去，所以重现性很差，且不能进行梯度洗脱，已经不大为人们所采用。

三、键合相色谱

考虑分配色谱法中固定液的缺点，因此将各种不同的有机关能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上，固定相就不会溶解到流动相中去了。
键合固定相优点：○ 对极性有机溶剂有良好的化学稳定性
○使色谱柱的柱效高、寿命长
○实验重现性好
○几乎适于各种类相的有机化合物的分离，尤其是k’宽范围的样品
○可以梯度洗脱
根据极性不同分类：正相键合相色谱—固定相极性＞流动相极性
固定相：二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。
适于分离脂荣、水溶性的极性、强极性化合物

反相键合相色谱—固定相极性＜流动相极性
固定相：烷基、苯基等非极性有机分子。如最常用的ODS柱或C18柱就 是最典型的代表，其极性很小。
适于分离非机性、弱极性离子型样品，
是当今液相色谱的最主要分离模式。
正相HPLC（normal phase HPLC）：
是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。

反相HPLC（reversed phase HPLC）：
由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱，Octa Decyltrichloro Silane)，代表性的流动相是甲醇和乙腈。

四、体积排阻色谱（SEC，size exclusion chromatograghy）
（又称凝胶色谱和分子筛色谱）
原理： 以多孔凝胶（如葡萄糖，琼脂糖，硅胶，聚丙烯酰胺等）作固定相，依据样品分子量大小达到分离目 的。大分子不进入凝胶孔洞，沿多孔凝胶胶粒间隙流出，先被洗脱；小分子进入大部分凝胶孔洞， 在柱中被强滞留，后被洗脱。

根据样品性质分类：凝胶过滤（GFC）—用于分析水溶性样品，如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核 苷酸、多糖。
凝胶渗透（GPC）—用于分析脂溶性样品，如测定高聚物的分子量。

SEC主要依据分子量大小进行分离，因此与样品、流动相间的相互作用无关。因此不采用改变流动相的组成来改善分离度。

五、离子交换色谱
（ion exchange chromatography, IEC）
分离原理：使用表面有离子交换基团的离子交换剂作为固定相。带负电荷的交换基团（如磺酸基和羧酸基）可以用于阳离子的分离；带正电荷的交换基团（如季胺盐）可以用于阴离子的分离。不同离子与交换基的作用力大小不同，在树脂中的保留时间长短不同，从而被相互分离

7. 丙酮酸钠标准曲线制作的意义

意义：丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

因为丙酮酸极不稳定，极易被氧化，弱氧化剂Fe与H2O2能把丙酮酸氧化成乙酸并放出二氧化碳，因此一般用丙酮酸的盐。

抗炎

S.K.GUPTA等探索丙酮酸钠对急性和慢性炎症大鼠模型的抗炎活性，以剂量依赖的方式口服3种不同剂量水平125,250 和500 mg/kg丙酮酸钠，丙酮酸钠能够显着抑制大鼠角叉菜胶性急性足肿胀，500 mg/kg剂量水平的丙酮酸钠的效果与一个标准的12.5 mg/kg双氯芬酸钠相同，表现出显着地抗炎活性。

以上内容参考：网络-丙酮酸钠

8. 培养基中丙酮酸钠的作用是什么

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

9. 还原酶活性测定方法

实验方法
预先将丙酮酸钠溶液及NADH溶液放在25℃水浴中预热。
取2支石英比色杯，在2支比色杯中加入0.1mol/L pH7.5磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液3ml，置于紫外分光光度计中，在340nm处将光吸收调节至零；另一支比色杯用于测定LDH活力依次加入丙酮酸钠溶液2.9ml、NADH溶液0.1ml，加盖摇匀后，测定340nm光吸收比值。
取出比色杯，加入稀释后的酶溶液10μl，立即即时，摇匀后，每隔0.5分钟测A340，连续测定3分钟。
以A对时间作图，取反应最初线性部分，计算没分钟A340减少值。
注意事项
实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即用，则应储存在-20℃冰箱。
酶液的稀释度及加入量应控制每分钟A340下降值在0.1~0.2之间，以减少实验误差。
NADH溶液应在临用前配制。

10. 细胞培养基中加丙酮酸钠对细胞有影响么

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠.