1. 实验室核酸污染去除自然降解需要多长时间
实验室核酸污染去除自然降解需要2小时以上。
实验室核酸污染去除自然降解是在实验室每次检测完毕后,可采用房间固定或可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上才可以完全去除。
实验室核酸在目前国内所有二级以上综合医院都具备了核酸检测能力,大部分医院也设立了PCR实验室,高强度的核酸检测任务已然成为了我们检验人的工作常态,但是,如果一旦出现实验室污染,可能会造成假阳性结果,导致结果不可信,甚至可能会危及实验室工作人员安全。
2. PCR污染问题怎么监测和预防
这两天正好看到一个“2012年全国公安司法及血液中心标准DNA实验室装备展览会”的宣传文章说这个问题,复制来给你看看吧。
PCR室污染监测及防御
2012年全国司法及血液中心国际标准DNA实验室观摩会将在明年6月于青岛国际会展中心举行,这次观摩会秉着打造全球顶尖展会的理念,将展示具有世界一流水平,符合国际标准的DNA实验室样板间。并将在展示过程中向参会人员免费发放实验室解决方案,本文就是日前由组委会展示的该系列方案中的一部分。
PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度,但易污染一直是困扰各实验室的大问题,极微量的污染就可能造成假阳性反应,破坏试验结果。如何监测与防止PCR污染,是现在各实验室的重要课题。
一、污染监测
一个好的PCR实验室,必须要时刻注意污染的监测,考虑是否受到污染,如有污染,是何原因造成的。通过有效地监测,采取正确的相应措施,防止或消除污染。
对照试验是监测PCR污染的重要手段。
1、阴性对照:阴性对照是每次PCR实验都必须做的。它包括了标本对照与试剂对照,通过对照确认样本和试剂是否受到感染。
2、阳性对照:它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好、经鉴定是该产物的标本。但阳性对照其对检测或扩增样品污染的可能性很大。因而当某一PCR试剂已经使用稳定,检验人员完全掌握时,在之后的实验中应尽可能免设阳性对照。来减小污染概率。
3、选择不同区域的引物进行PCR扩增。
4、重复性试验。
二、防止污染的方法
1、合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增以及PCR产物的鉴定等步骤进行分区或者分室,尤其要将样本处理和PCR产物的鉴定与其它步骤严格分开。 理想的分区为,标本处理区、PCR反应液制备区、PCR循环扩增区、PCR产物鉴定区。
2、PCR试剂要做好预混和分装:所有的PCR试剂都应进行小量分装,PCR反应液应尽可能预先配制好,然后再小量分装,在-20℃下保存,以减少重复加样次数,从而避免污染机会。另外,PCR试剂、PCR反应液应当与样品及PCR产物分开保存,不可放于同一冰盒或冰箱。
3、吸样枪污染防护:吸样枪是一个非常容易发生污染的设备。如操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘在枪头上,将会成为一个严重的污染源,因而使用吸样枪时要格外小心,吸样要慢,并尽量一次性完成,忌多次抽吸,避免发生交叉污染或气溶胶污染。
4、减少PCR循环次数:以PCR产物达到检测水平为宜。
5、防止操作人员污染:使用一次性手套、吸头、小离心管。
3. 如何除实验室核酸污染
把灭菌水、buffer、taq酶、引物全换掉,有段时间我们实验室PCR总出现负对照扩出条带,很难说哪个污染了,还不如全部换掉。其实普通PCR也不用像你说的那样夸张吧,一般还是比较难污染的。
(1) Tris 吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.戴好手套和护目镜.
(2) 氨基乙酸:吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.戴好手套和护目镜.避免吸入尘埃.
(3) X-半乳糖 (X-gal):对眼睛和皮肤有毒性.使用粉剂时遵循常规注意事项.应注意的是,X-gal 溶液是在一种有机溶剂(DMF)中制备的.
(4)β-半乳糖苷酶:有刺激性,可产生过敏反应.吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.戴好手套和护目镜.
(5)苯二胺 :吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.戴好手套和护目镜.在通风橱内操作.
(6)苯酚:有剧毒性和高度腐蚀性,可致严重烧伤.吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.戴好合适的手套和护目镜,穿好防护服,在通风橱内操作.若有皮肤接触药物,可用大量清水冲洗,并用肥皂和水清洗,不要用乙醇洗.
(7)苯甲基磺酰氟化物(PMSF):为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂.对上呼吸道的黏膜、眼睛和皮肤有极大损害.戴好合适的手套和护目镜,在通风橱内操作.万一眼睛或皮肤接触到此药品,立即用大量的水冲洗,丢弃被污染的衣物.
(8)苯甲酸:有刺激性.吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.戴好手套和护目镜,不要吸入.
(9)苯甲酸苄酯:有刺激性.吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.避免接触眼睛.戴好合适的手套和护目镜.
(10)苯乙醇:有刺激性.吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害.戴好手套和护目镜,远离火源、火花和明火.
4. 去除pcr污染的措施有哪些
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5. PCR实验室污染了怎么处理
A. 实验室进行通风处理,至少2 周的时间;
通风可加速扩增产物的消散的速度
B. 使用清水对实验台面、实验室进行清洗;
DNA不溶于酒精,使用清水多次擦拭后可消除附在实验台面等的核酸DNA;
C. 使用紫外灯进行房间的照射;
紫外线及产生的臭氧都有破坏DNA结构的作用
D. 之前使用的灭菌锅使用清水清洗多次,不要和耗材等在一起灭菌;
E. 可用1mol/L 的盐酸对可疑器具或者实验台面进行浸泡或擦拭。
盐酸可使DNA脱嘌呤,破坏DNA的结构。
F. 若有条件,选择一个新的实验环境进行检测实验最好。
6. 实验室核酸检测最常用的方法是
你好朋友,核酸检测,现在的方法就是在鼻腔里取样品和在咽喉当中取样品,这都是非常简单的,谢谢。
7. 怎么防止PCR实验室污染
PCR实验室污染
标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。
PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。
还有一种容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。
实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室,这个问题也比较常见,因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力,其污染可能性也很大。
污染监测
一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。
对照试验
1、阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。
2、阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照。它包括①标本对照:被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照。②试剂对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以监测试剂是否污染。
3、重复性试验
4、选择不同区域的引物进行PCR扩增
防止污染的方法
进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。
划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域内进行,PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行:
1. 试剂准备区。
2.标本制备区。
3. PCR扩增区及分析区。
切记:任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
分装试剂:PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中,不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA:
1.PCR用水应为高压的双蒸水;
2.引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制;
3.引物和dNTP应分装储存,分装时应标明时间,以备发生污染时查找原因。
实验操作注意事项
尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
1. 戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
2. 使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
3. 避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
4. 操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;
5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管;
6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
8. 重复实验,验证结果,慎下结论
8. PCR实验室污染如何预防
还能有啥办法,画个XX贴纸条吓吓他们呗。
害,做分子试验好多年了,这是个倒霉差事。经常有实习生来,搞得很危险。
我觉得只要不打扫就行了吧,灰蒙蒙的一层,没人碰就安全了。随时备着些碱液,及时擦洗溴化乙锭。多屯些口罩,手套。
9. 如何除实验室核酸污染
实验室去除核酸污染推荐采纳欧菲姆OXY-30000的过氧化氢干雾消毒方案,它巧妙地利用了特殊的干雾灭菌设备+诺福过氧化氢杀孢子剂(高纯低浓度)的完美配合,组成无懈可击的空间清洁消毒方案。
而过氧化氢消毒技术当中,据大数据得知,采用全球领先干雾技术打造的欧菲姆OXY-30000消毒机,是行业专业消毒去除PCR核酸污染的佼佼领航者。OXY-30000精妙之处在于其专业的解决方案,避免了过氧化氢蒸汽的腐蚀性以及解决了扩散性问题。其特点为:1、灭菌效果好,生物指示剂挑战降低6lg对数值,能彻底杀灭环境中的MRSA、VRE、结核分枝杆菌、芽孢、病毒和多重耐药的革兰阴性菌(鲍曼不动杆菌);2、活性氢氧基团能氧化DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物质,而诺福过氧化氢杀孢子剂中的活性银离子,可以抑制DNA聚合酶等有害病菌的生长,从而更有效的防止外源DNA的干扰;
3、1.5小时完成灭菌,人员可进入。预防核酸实验室环境空气污染及核酸片气溶胶污染,及快速高效去除实验室核酸污染源;4、小于3微米干雾气体,扩散性优越,能扩散到每一个角落,空气中做布朗运动,消毒干雾无孔不入,专门对付小分子核酸污染源物质;
具备国际化的CNAS检测报告和消毒产品备案,可以提供完善的符合欧盟GMP要求的验证文件和报告。
10. 核酸检测方法有哪些
核酸检测主要是鼻拭子或咽拭子法,经由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分泌物标本后送实验室检测。核酸检测主要是指目前对于新型冠状病毒肺炎的一种确诊的实验手段,核酸检测一般分为鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液,通过呼吸道的标本,我们在实验室里可以检测2019新型冠状病毒的核酸,从而作为临床诊断的重要的依据。那临床上目前最常采用的检测方法是鼻拭子或者是咽拭子,操作的时候由医护人员采用特制的长柄取样的棉签,经由鼻孔或者经由口腔插入到鼻腔及咽腔中,在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上进行涂抹,取得上呼吸道分泌物标本,这个标本取出之后再送到实验室进行相关的核酸检测。在做的过程中患者不用紧张,可能会有轻微的不适例如恶心,相信配合好医护人员的话,能够很快完成这个检查,不会给您带来很大的影响。