抗体的分析方法

1. 免疫学的检测方法

免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。

2. 抗体的制备有哪些

（1）多克隆抗体的制备。

①免疫方法：对多克隆抗体，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮内免疫法、淋巴结免疫法和混合法等。一般来说，皮下或肌肉免疫法产生的抗体比较多；皮内免疫法所需的抗原量少，在抗原宝贵时特别适用，但与之相对的，它产生的抗体量也不多。混合免疫法的优点是抗原用量小，产生抗体速度快。

②多克隆抗体的制备：将抗原免疫动物（常用的动物为兔、羊、狗等），分离出抗血清并纯化抗体。多克隆抗体的均一性较差，其特异性相对较低，因此，多克隆抗体在农药残留速测技术中的应用受到一定的限制。但近年来有学者恰恰利用了多抗的交叉反应高的特点，通过制备出具有某类（或某几种）农药的“共性结构”的半抗原或者通过制备出含多个抗原决定簇的人工抗原来制备“宽谱特异性”抗体，进行农药多残留分析研究。

（2）单克隆抗体的制备。单克隆抗体制备技术最初是由K鰄ler和Milstein（1975）利用B淋巴细胞杂交瘤技术创立的。目前该技术已广泛应用于疾病诊断及生物、医学研究、环境和食品安全检测（监测）等方面。单抗均一性高，只和抗原某一决定簇结合，有更高的特异性，而且，产生抗体的单克隆细胞可在体外传代繁殖，不受动物免疫时间限制生产抗体。只要管理和培养技术正确，抗体就可无限量的产生。基本过程是动物免疫、细胞融合、克隆筛选、单克隆抗体性质鉴定、腹水诱发、收集和纯化等。

（3）重组抗体的制备。近年来，随着蛋白质技术及DNA重组技术的发展，人们通过对抗体产生的基因本质、基因重组抗体筛选技术和直接定位诱导基因操纵技术的研究，获得用于指定空间位置并具有各种特异性、亲和性，能忍受一定温度、pH和有机溶剂的人工重组抗体。一般是将抗原免疫小鼠，一定时间后无菌条件下取出小鼠脾脏，提取脾细胞总RNA，以RNA逆转录合成的cDNA为模板，PCR扩增抗体，将抗体中的轻链、重链连接成ScFv（single-chainvariablefragment）。酶切经PCR扩增的ScFv片段，并与噬菌体载体连接，然后以常规方法转化入大肠杆菌或其他生物体中。人工培养带有噬菌体抗体的大肠杆菌，即得到重组抗体。该方法生产抗体速度快，可通过诱变改变抗体特性，使抗体的特异性更强，而且，利用这项技术获得的噬菌体抗体库，能同时识别多种农药，可用于农药多残留免疫速测技术的研究。

3. 群体反应性抗体的检测方法

PRA的常用方法：①ELISA-PRA：酶标板用纯化的包括当地人种绝大部分的HLA特异性抗原预先包被，检测时将待检血清加入并孵育一定时间后，加入酶标记的抗人IgG或IgM的人单克隆抗体，再加入酶作用的底物显色，根据颜色的深浅，可测定出HLA抗体的特异性和滴度。②CDC-PRA：在预先用淋巴细胞（含当地人种绝大部分的HLA特异性抗原）包被的微孔板中加入受者血清和补体，反应一定时间后用染料染色，计数死细胞（被染色的细胞）百分率，并由此判断PRA阳性或阴性。

4. 酶联免疫检测的几种方法及其原理

（1）酶联免疫吸附试验（enzyme
linked
immunosorbent
assay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。
（2）夹心法（sandwich
assay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度，可定量测定抗原。
间接法（indirecr
ELISA）常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本（可能含有相应抗体），再加入酶标抗Ig的抗全（即第二抗体），经加底物显色后，根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。
（3）BAS-ELISA：近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂，组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素（avidin）分子可以结合4个生物素分子（biotin）。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合，而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子，通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统（biotinavidin
system-
ELISA,BAS-ELISA），它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。

5. 抗原抗体反应分为那四种类型各自有哪些常见的检测方法

根据抗原和抗体性质的不同和反应条件的差别,抗原抗体反应表现为不同的形式.颗粒性抗原表现为凝集反应；可溶性抗原表现为沉淀反应；补体参与下细菌抗原表现为溶菌反应,红细胞抗原表现为溶血反应；毒素抗原表现为中和反应等.

6. 抗体效价的检测方法

多采免疫双向扩散法
【基本原理】
*指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。
-将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
*优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。
免疫双向扩散法的操作步骤
*将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。
*将1%agar 融化后，置56℃水浴。
*在玻璃板上铺胶，约1.5mm 厚，凝固后打孔(直径 3rnm)，孔间距10mm。
l 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即ml 抗原样品，周围孔内每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。
*观察结果。
凝聚胺法测定孕妇血清IgG抗-A（抗-B）效价的方法待检血清与0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在试管内等量混合，放入37℃水浴1 h以破坏血清中的IgM抗体，吸取处理后的血清用生理盐水倍比稀释，稀释度分别为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然后每管加入相应的3%～5%红细胞悬液，置37℃水浴30 min，观察是否凝集，不凝集者用生理盐水洗涤3次，然后加入低离子盐水介质(LIM液)，混匀，滴入2滴凝聚胺，混匀后3 000 r/min离心30 s，扣摇肉眼可见明显的凝集(无凝集者须重做)，再加入2滴重悬液，轻摇，观察凝集是否消失，凝集1 min内不消失者表示受检者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗体效价检测的其它方法
*环状沉淀试验，需较多的抗血清，现已很少用；
*对流免疫电泳，比琼脂免疫双扩散法敏感，较简便、实用；
*酶联免疫吸附试验 (ELISA)。
通常抗体效价低于1：128是没有问题的，有些孕妇高达1：256以上，而且抗体效价最好1个月查上一次，有时候会有所变化。

7. ELISA实验检测抗体的实验步骤

操作步骤：
（1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。
（2）加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
（3）加酶标抗抗体,主要根据你的一抗来确定二抗用什么。可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
（4）加底物显色

间接法由于采用的酶标二抗是针对一类免疫球蛋白分子(如抗人IgG),因此该法只需要换固相抗原，即可用一种酶标二抗检测各种与抗原相应的抗体，具有更广泛的通用性。

本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。

如果有其他问题，可以联系我，呵呵！

8. 自身抗体的检测方法有哪些

1、抗核抗体检测

抗核抗体是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称，主要是IgG，其次是IgM和IgA，无器官和种属特异性。ANA在大多数自身免疫性疾病中均可呈阳性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA检测在临床自身免疫病诊断与鉴别诊断中是一个重要的筛查试验。

2、类风湿因子

类风湿因子是变性lgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液内。主要为lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒细胞胞浆抗体

抗中性粒细胞胞浆抗体是指与中性粒细胞及单核细胞胞浆成分发生反应的抗体。当中性粒细胞受抗原刺激后，胞浆中的α-颗粒释放蛋白酶-3、髓过氧化物酶等物质，刺激机体而产生ANCA。

(8)抗体的分析方法扩展阅读

自身抗体的产生原因：

人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，正常的免疫反应有保护性防御作用，即对自身组织、成分不发生反应。—旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、成分为“异物”，而发生自身免疫反应，产生自身抗体。

正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体，但不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某—水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。自身免疫性疾病中有许多自身抗体，其中最重要的是抗核抗体。

9. ABO血型抗体有哪两种它们的检测方法分别是什么

ABO血型抗体
一般分为二类；"天然"抗体和免疫抗体，都是通过免疫产生的。

一般天然抗体是IgM,免疫抗体是IgG

ABO血型抗体为天然的IgM，不能通过胎盘。而O型血的妈妈有可能由于食物或外来物质在体内产生了抗A或B的抗体，而这个抗体是IgG，可以通过胎盘。
ABO血型鉴定
ABO
blood
groups
取静脉血少许，放入生理盐水中混匀，配成2%红细胞原液
【正常参考值】
根据红细胞膜上的A、B凝集原和血清内抗A、抗B凝集素的不同，将红细胞血型分为O、A、B、AB四型。
【异常结果分析】
用标准血清及标准红细胞鉴定ABO血型结果
AB型
ABO血型交叉配合试验
ABO
blood
groups
cross-matching
静脉血3ml
【正常参考值】
同型交叉配血主侧和次侧均无凝集、无溶血。
【异常结果分析】
同型配血，主侧和次侧均无凝集、无溶血，表示无输血禁忌，可以输血。否则会导致严重或致命的输血反应。在此系统中还有若干种亚型，在定血型和交叉配血时应予注意。
Rh血型鉴定
Rh
blood
group
取静脉血少许，放入生理盐水中混匀，配成2%红细胞原液
【正常参考值】
我国人Rh阳性>99％、Rh阴性＜l％。
【异常结果分析】
Rh血型是一个比较复杂的血型系统，人类红细胞表面的Rh抗原主要有D、C、E、c、e等，其中D抗原性最强。因此一般临床上只做D抗原的鉴定。受检红细胞与抗D血清发生凝集者为阳性，反之为阴性。测定Rh血型对于溶血性输血反应和新生儿Rh溶血症极有价值。
溶血性输血反应：Rh阴性者接受Rh阳性者血液，则Rh阳性血液中的抗原将刺激Rh阴性人体产生Rh抗体。如果再次输入Rh阳性血液，即可导致溶血性输血反应。
新生儿溶血症：Rh阴性母亲怀Rh阳性胎儿，第一胎时，母体受胎儿抗原致敏产生抗体，但抗体效价较低一般不易发生溶血；若怀第二胎时仍为Rh阳性胎儿，则抗体通过胎盘进入胎儿体内可导致新生儿溶血病发生。Rh阴性母亲在孕前曾接受Rh阳性者血液，则第一胎时即可引起Rh阳性胎儿的新生儿溶血病。
ABO血型鉴定的原理
ABO血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正（血清试验）反（细胞试验）定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原，所谓反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。