血细胞分析中最常用到的染色方法

㈠ 吉姆萨染色

吉姆萨（Giemsa）染色法 ：吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色 偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

原文连接如下
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一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加快皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。
第二节 血涂片的制备和细胞染色
血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边缘，细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。因皮制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍。
1．瑞特（Wright）染色法 ：为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。目前常用瑞特染色法。
（1）瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。伊红通常为钠盐。即伊红和伊混合后，产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀，即瑞特染料。
（2）细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
（3）PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色 偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。
新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待染料成熟，主要是美蓝逐渐转变为天青B后才能使用，贮存时愈久，染色效果愈好。EAM GILLILAND等采用吸光度比值作为顼特染液的质量规格。rA测定方法如下：取瑞特染液15-25μl（视染液浓度而定），加甲醇10ml稀释，混匀后以甲醇为空折管，分别以波长650nm和25nm比色。Ra=a650/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm，伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半。所以新配染料rA接近2，随着美蓝逐渐氧化为天青B，RA也相应下降。RA下降到1.3±0.1时即可使用。瑞特染液贮存过程中，必须塞严，以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸。有人主张在配方中加入甘油30ml，防止甲醇挥发，关可合细胞染色清晰。甲醇必须纯净，如甲醇中丙酮含量过多，染色偏酸，使白细胞着色不良。
2．吉姆萨（Giemsa）染色法 ：吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。

㈡ 瑞氏染色步骤

操作步骤：
1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；
2.
再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）
3.水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。
注意事项：
1.
染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定；通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟；气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。
2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。
3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。
4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。
5.染料放置时间越长，染色效果越好。
6.
本试剂应由专业人员使用。
拓展资料
Wrfeht和Giemsa都于1902年报告了各自的新的血液学染色剂，其主要特点是在制备多色性亚甲蓝（主要指天青B）方面做了改进，使血细胞和疟原虫着色较好，操作简便。
上述染色法均是含伊红和亚甲基蓝衍生物的复合染料。在临床检验工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物和排泄物涂片中各种细胞的染色，有利于在显微镜下观察细胞形态及对细胞进行分类检查。
【染色原理】
瑞氏染色分两相进行，第一相是酸性染料伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质（chro－matin）、特异中性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合。第二相是天青B和伊红在适宜条件下形成紫色的天青B一伊红复合物（azure
B－eosin
complex），这种复合物是形成Romanowsky－Giemsa效应的基础。
Romanowsky－Giemsa效应包括：①白细胞核染色质染成紫色，疟原虫的染色质染成红色；②中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区染成紫色；③产生本效应必须有两种染料参与，一种是天青B，另一种是伊红。
Wittekind（1985）指出，天青B与DNA分子中的磷酸基结合，而伊红既与DNA分子中的阳离子部位结合，又与天青B结合，与天青B的结合力来源于电子供一受体的电子转移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）与伊红分子中的叛基（－COOH）间形成氢键。因此，天青B是噻嗪类染料中能与伊红形成复合物的最佳选择，因为拥有四个甲基侧链的亚甲蓝不能以氢键与伊红结合。
甲醇除作为染料的溶剂，能将瑞氏染料解离成带正电荷的天青B和带负电荷伊红外，因其具有脱水力，还可将细胞固定为一定形态，并使蛋白沉淀为颗粒状、网状结构，增加细胞与染料的接触表面，增强染色效果。
细胞中的各种有机物质（特别是蛋白质）、染料等对环境的州值非常敏感。如环境偏酸，氢离子增多，降低对碱性染料的亲和力；增强伊红着色，出现异常红染；相反，则可出现异常蓝染。最佳环境应维持在PH值6
4～6、8.因此，必须使用缓冲溶液。
参考资料：
搜狗网络_瑞氏染色
瑞氏染色原理及方法_医学教育网

㈢ 全国临床检验操作规程推荐的血细胞染色法是什么

《全国临床检验操作规程》推荐的血细胞染色法
瑞-吉复合染色

㈣ 血细胞染色方法是怎么建立的

19世纪德国的化学工业、染料工业、制药工业的发展十分迅速。1856年，英国化学家W.H.帕金首先发明了染料的人工合成方法。不久，德国化学家A.W.霍夫曼相继合成了染料碱性品红和苯胺蓝。人们在应用染料过程中发现，其不仅可以染色布料、毛皮，而且还可以染色布料、毛皮，而且还可以使动物组织着色。更有趣的是，有些染料能使某些特定的细胞而不是所有的细胞着色，还有一些染料能使一种细胞的某一部分而不是整个细胞着色。于是，染料成了科学家观察有机体结构的一种非常有用的工具。起初，能应用于有机体染色的染料为数不多，19世纪末，随着德国染料工业的迅速发展，生产出了各种染料，极大地拓展了科学家观察研究的范围。医学家开始用特殊染料使有机体的组织和细胞染色，在显微镜下进行观察研究。

德国医学家艾利希正是在这种背景下发明血细胞染色方法的。艾利希的叔父魏格特是德国着名的病理学家和组织学家，也是细菌和组织染色方法的创立者。他发明的许多人体组织和细胞的染色方法，有些一直尚用至今。艾利希在魏格特的影响下，自幼爱好动物学和化学。在大学学习阶段，他就对化学染料与有机体组织细胞染色的关系产生了极大的兴趣，并开拓研究某些化学物质对动物组织的作用。他不仅对机体的化学过程充满兴趣，而且也十分关注机体中更小的成分——细胞的构造和成分。当时还很少有医生将化学与医学结合起来研究的，值得庆幸的是，斯特拉斯堡大学教授、艾利希的老师沃尔德耶尔恰好持有这种观点。沃尔德耶尔赞同艾利希的研究计划，并鼓励这个青年人在科学研究上走自己的路。在斯特拉斯堡大学学习期间，艾利希就发表了莱于化学物质在体内的分布及其与药物作用关系的论文。

虽然艾利希对用化学方法研究生命现象充满兴趣，但他对当时大学里死板的教学方法十分厌恶，所以艾利希经常逃课，尤其是化学课。结果是艾利希不能通过课程考试，不得不留级一年。然而，他并不懊恼，而是继续将时间都倾注在捣弄各种染料上。由于专心研究，不修边幅，以致于染料弄得到处都是。数年后，一位教授指着艾利希曾使用过的工作台说：“艾利希工作的痕迹实际上是不可摧毁的。”德国着名科学家罗伯特·科赫也时常提及一个有关艾利希的小故事：他去布雷斯劳大学鉴定白喉杆菌时，被邀请参观实验室。实验室的负责人指着艾利希的办公桌告诉他：这是艾利希的工作台。艾利希是一个非常出色的染料师，但考试却经常不极格。

当时，德国学生为了获得学位，经常在几所大学学习。艾利希曾在布雷斯劳大学、斯特拉斯堡大学、布赖斯高地大学、弗莱堡大学和莱比锡大学等多所学校学习过。在布雷斯劳大学时，他对实验室的工作十分感兴趣，他发明的染色技术揭示了许多细胞的基本构造。刚发现炭疽杆菌的科赫在布雷斯劳大学访问时曾与艾利希探讨了染色问题，从此，艾利希和科赫结下了深厚的友谊。

艾利希不仅热衷于实验观察，而且善于独立思考。在大学学习期间，一次在观察铅中毒死者的组织变化时，他发现凡是生前诊断为严重铅中毒病人的身体组织，在作尸体病理检查时，把组织浸入含铅溶液中，这些组织的细胞也最容易吸收和积蓄铅。艾利希敏锐地意识到人体的不同组织和器官对特定的化学物质可能存在着不同的“亲和力”。于是，他开始用各种染料对人体组织标本进行染色，以确定能使特定组织和细胞染色的染料及其之间的相互关系。

1878年，艾利希在莱比锡大学毕业并获医学博士学位。他的博士论文是关于染料应用于显微镜观察的理论和实践问题，主要内容是关于如何应用各种苯胺染料进行动物组织染色的理论和技术。这一问题包含了艾利希关于染料和染色方法的许多设想：实际上已经奠定了他今后为医学做出巨大贡献的思想基础。1891年，艾利希在一本关于有机体组织对染料的不同反应的着作中，介绍了血细胞的染色方法。1898年，他与同事又合作出版了一本论贫血的着作，总结了正常和病理情况下对血液的观察，内容包括血液观察的方法学、正常和病理情况下的红细胞、各种白细胞、淋巴细胞以及白血病的细胞特点等。

在研究过程中，艾利希发现染料分为酸性、碱性和中性三类，不同的染料对于白细胞内的颗粒染色结果不同，由此他第寻次提出了白细胞的分类方法。艾利希因为这些着名的观察和方法学的建立，被誉为现代血液学的奠基人。

㈤ 血细胞化学染色中，MPO染色和POX染色有什么区别

急性白血病分为急性淋巴细胞白血病（简称急淋，ALL）和急性髓细胞白血病（包括M0、M1、M2a、M2b、M3、M4、M5、M6、M7）。由于急性白血病骨髓中是以原始和/或幼稚细胞增生为主，仅仅根据瑞氏染色下的细胞形态，容易做出错误的判断，因此不论急性白血病细胞形态学表现是否典型，均应做细胞化学染色。建议急性白血病应至少做：过氧化物酶染色POX、特异性酯酶染色、非特异性酯酶染色及过碘酸-雪夫反应PAS。根据细胞形态学和细胞化学染色并不能对所有急性白血病的细胞类型做出正确的判断，还需要结合染色体检查、细胞免疫学检查及分子生物学检查等进行全面分析。

㈥ 五分类血细胞分析指的是什么

将血液中的白细胞分成五个类别：中性杆状核粒细胞、中性分叶核粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞，通过一些仪器的检测对红细胞、白细胞等进行分析的技术。

而其发展离不开库尔特兄弟的库尔特原理，因此大量血细胞分析仪在各国的实验室里发挥着作用。常用的设备为半自动或全自动生化检测仪。

(6)血细胞分析中最常用到的染色方法扩展阅读

检测方法

1、阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法

直流电阻抗法（DC）用于测量细胞体积大小。这种技术主要应用在Sysmex研制和开发的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中，中仪康辉（北京）国际贸易有限公司为该系列产品国内部分区域分销商。

2、电阻抗和射频电导联合检测法

这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞：淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统、幼稚细胞检测系统。

3、多角度激光偏振光散射检测法

采用这种技术的仪器使用鞘流液将标本血稀释，稀释后白细胞的内部结构近似于自然状态，只有嗜碱性细胞由于其吸湿的特性而使细胞结构有轻微改变。

4、采用图像分析的单纯细胞检测法

该技术采用图像分析法，将血片染色，用含有扫描镜头的显微镜扫描每个视野，将获取的细胞图像与仪器内存储的标准图像进行对照分析，判断该细胞的类型。

㈦ 实验室常用的染色方法有哪几种

印染行业的化验室一般的都是浸染法，就是拿染液通过染色工艺把布浸染到上色，还有扎染，卷染，

㈧ 血细胞分析仪使用的荧光染料一般有哪些

这个么…染色一般用新亚甲蓝枸橼酸钠，全血涂片可用瑞氏染液或新亚甲枸橼酸钠，

㈨ 细胞染色最常见的方法是什么

细胞染色常用方法主要包括以下几个即：1.简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;2.革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程;3.瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;4.吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;6.细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。