革兰染色的原理和方法步骤

‘壹’ 革兰氏染色的步骤和原理

原理：革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。

步骤：

(一)涂片固定

在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。

(二)染色

在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。

(三)水洗

染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。

(四)媒染

加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。

(五)水洗，用吸水纸吸去水分

用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

(六)脱色

加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。

(七)复染

蕃红染色液染色10 s后， 自来水冲洗。

(八)干燥，镜检

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

(1)革兰染色的原理和方法步骤扩展阅读

标本干燥后即进行固定，固定的目的有三个：

(1)杀死微生物，固定细胞结构。

(2)保证菌体能更牢固的粘附在载玻片上，防止标本水洗时被水冲洗掉。

(3)改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。

‘贰’ 革兰染色的实验步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1、涂片固定。

2、草酸铵结晶紫染1分钟。

3、蒸馏水冲洗。

4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5、水洗，用吸水纸吸去水分。

6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7、蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

(2)革兰染色的原理和方法步骤扩展阅读：

革兰染色反应的原理：

革兰染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。

革兰染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。

细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色。

革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。