㈠ 測定等電點的方法有哪些
交錯分配法。
對一種特定的蛋白質，在不同鹽系統中，pH和其分配系數之間的關系應不同，而在等電點時，得到的均為不帶電時分子的分配系數。對不同的鹽系統，其等電點時的分配系數應相等，兩條pH和分配系數關系的曲線必交於一點，該點所對應的pH值即為該特定蛋白質的等電點。根據這一原則測定蛋白質等電點的方法，稱為交錯分配法
㈡ 蛋白質等電點的測算方法
等電點：如果調節溶液的PH值使得其中的氨基酸呈電中性，我們把這個PH值稱為氨基酸的等電點：PI。PI是氨基酸的重要常數之一，它的意義在於，物質在PI處的溶解度最小，是分離純化物質的重要手段。等電點的計算：對於所有的R基團不解離的氨基酸而言（即解離只發生在α-羧基和α-氨基上），計算起來非常簡單：PI＝（PK1』+PK2』）/2若是碰到R基團也解離的，氨基酸就有了多級解離，這個公式就不好用了，比如Lys、Glu、Cys等。aa Cys Asp Glu Lys His ArgPK』α-羧基 1.71 2.69 2.19 2.18 1.82 2.19PK』α-氨基 8.33 9.82 9.67 8.95 9.17 9.04PK』-R-基團 10.78（-SH） 3.86（β-COOH） 4.25（γ- COOH） 10.53（ε-NH2） 6（咪唑基） 12.48（胍基）在這種情況下可以按下面的步驟來計算：<1> 由PK』值判斷解離順序，總是PK1』< PK2』< PK3』< …，即誰的PK』值小，誰就先解離。<2> 按照解離順序正確寫出解離方程式：簡式，注意解離基團的正確寫法。<3> 找出呈電中性的物質，其左右PK』值的平均值就是氨基酸的等電點：PI＝（PK左』+PK右』）/2以Lys為例：在黑板上用簡式演示<3>
等電點的測定：等電聚焦法：這是一種特殊的電泳，其載體上鋪有連續的PH梯度的緩沖液，然後將氨基酸點樣，只要該處的PH與氨基酸的PI不同，則氨基酸就會帶電，PH值>PI時，aa帶-電；PH值<PI時，aa帶+電。通電後，氨基酸就會移動，直到某處的PH＝PI，氨基酸才呈電中性，不再移動，因此，可以測出PI。
等電點沉澱
所有的氨基酸均為兩性物質，亦即它們至少含有一個酸性基（carboxyl）及一個鹼性基（α-amino）。這些可游離的團基在pH變化時，因釋出或接受質子而可充當弱酸或弱鹼，其離子化特性與其它物質一樣遵守Henderson-Hasselbalch方程式：
pH = pKa + log10 [未質子化的形式（鹼）] / [已質子化的形式（酸）]
即
pH = pKa + log [A-] / [HA]
氨基酸可以三種形式存在，即正電荷（cation）、兩性離子（zwitterion）或雙極性離子（dipolar ion）及負電荷（anion）等三種，若在酸性溶液中帶正電荷，則在鹼性溶液中帶負電荷。若氨基酸在某一pH值下其凈電荷為0，且在電場中不移動時，稱此pH值為它的pI值（等電點）。因為凈電荷為零，凈電斥力不存在的緣故，大部份蛋白質於等電點的pH值下，其溶解度最小。相反的，當溶液的pH值低於或高於pI，所有蛋白質分子所帶凈電荷必為同號，彼此之間有相斥力，不會凝結。所以，將pH調到等電點的大小，則大部份的蛋白質將會沉澱，這種現象可以應用於估算某蛋白質的等電點.
㈢ 測定蛋白質等電點的方法的原理是什麼
蛋白質是兩性電解質，蛋白質在鹼性溶液中成陰離子，在酸性溶液中成陽離子；蛋白質分子所帶凈電荷為零時的ph值稱為蛋白質的等電點（pi）。在等電點時，蛋白質分子在電場中不向任何一極移動，而且分子與分子間因碰撞而引起聚沉的傾向增加，所以這時可以使蛋白質溶液的粘度、滲透壓均減到最低，且溶液變混濁。若再加入一定量的溶劑如乙醇、丙酮，它們與蛋白質分子爭奪水分子，竭力減低蛋白質水化層的厚度而使混濁更加明顯。
各種蛋白質的等電點都不相同，但偏酸性的較多，如牛乳中的酪蛋白的等電點是4.7~4.8，血紅蛋白等電點為6.7~6.8，胰島素是5.3~5.4，魚精蛋白是一個典型的鹼性蛋白，其等電點在ph12.0~12.4。近年來蛋白質的等電點可以採用等電聚焦技術加以准確測定，但需一定的實驗條件。本實驗採用蛋白質在不同ph溶液中形成的混濁度來確定，即混濁度最大時的ph值即為該種蛋白質的等電點值，這個方法雖然不很准確，但在一般實驗條件下都能進行，操作也簡便。
㈣ 解釋如何蛋白質等電點的測定
一、目的：
了解等電點的意義及其與蛋白質分子聚沉能力的關系。
二、原理：
蛋白質的分子量很大，它能形成穩定均一的溶液，主要是由於蛋白質分子都帶有相同符號的電荷，同時蛋白質分子周圍有一層溶劑化的水膜，避免蛋白質分子之間聚集而沉降。
蛋白質分子所帶的電荷與溶液的pH值有很大關系，蛋白質是兩性電解質，蛋白質在鹼性溶液中成陰離子，在酸性溶液中成陽離子：
蛋白質分子所帶凈電荷為零時的pH值稱為蛋白質的等電點（PI）。在等電點時，蛋白質分子在電場中不向任何一極移動，而且分子與分子間因碰撞而引起聚沉的傾向增加，所以這時可以使蛋白質溶液的粘度、滲透壓均減到最低，且溶液變混濁。若再加入一定量的溶劑如乙醇、丙酮，它們與蛋白質分子爭奪水分子，竭力減低蛋白質水化層的厚度而使混濁更加明顯。
各種蛋白質的等電點都不相同，但偏酸性的較多，如牛乳中的酪蛋白的等電點是4.7~4.8，血紅蛋白等電點為6.7~6.8，胰島素是5.3~5.4，魚精蛋白是一個典型的鹼性蛋白，其等電點在pH12.0~12.4。近年來蛋白質的等電點可以採用等電聚焦技術加以准確測定，但需一定的實驗條件。本實驗採用蛋白質在不同pH溶液中形成的混濁度來確定，即混濁度最大時的pH值即為該種蛋白質的等電點值，這個方法雖然不很准確，但在一般實驗條件下都能進行，操作也簡便。
四、操作步驟：
1．制備蛋白質膠液
（1）稱取酪蛋白3克，放在燒杯中，加入40℃的蒸餾水。
（2）加入50毫升1 mol·L-1氫氧化鈉溶液，微熱攪拌直到蛋白質完全溶解為止。將溶解好的蛋白溶液轉移到500毫升容量瓶中，並用少量蒸餾水洗凈燒杯，一並倒入容量瓶。
（3）在容量瓶中再加入1 mol·L-1醋酸溶液50毫升，搖勻。
（4）加入蒸餾水定容至500毫升，得到略現渾濁的，在0.1mol·L-1 NaAC溶液中的酪蛋白膠體。
2．等電點測定
按下表順序在各管中加入蛋白質膠液，並准確地加入蒸餾水和各種濃度的醋酸溶液，加入後立即搖勻。
觀察各管產生的混濁並根據混濁度來判斷酪蛋白的等電點。觀察時可用+，++，+++，表示渾濁度。
㈤ 還可以用什麼方法測蛋白質的等電點
●方法：平板等電聚焦
●原理：蛋白質分子在含有載體兩性電介質形成的連續而穩定的線性pH梯度中進行電泳。但不自是按照等電點不同被分離。
●儀器：Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell
●樣品要求：
●液體：濃度>3mg/ml；體積>200ul；固體：質量>200ug
●樣品純度>90%；含鹽量<3 0mM；分子量：一般要求大於1000Da
●常見影響測試情況:
1、蛋白質純度不足
2、含鹽量過高
3、蛋白質分子量太小，導致無法固定染色
㈥ 等電點的測定方法
你配置水溶液，PH調到10，滴加稀鹽酸，同時測PH和電導率，作圖能求出來
㈦ 哪些試劑和現象判斷蛋白質的等電點
掌握通過聚沉測定蛋白質等電點的方法。可利用性質的變化測定各種蛋白質的等電點。常用方法觀察蛋白溶液在不同pH值下的溶解度。
㈧ 採用電泳技術如何測蛋白質等電點
等電點聚焦的方法可以測定蛋白質的等電點，前提是你要對pH梯度做的足夠精細。
等電點聚焦就是從正極到負極的電泳液配製成pH連續變化的液體，然後進行電泳，我們知道等電點的時候蛋白質靜電荷為零，所以他就不動了。也就是說蛋白質最終都會停在等電點的pH的區域里。
㈨ 等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點時應注意哪些
等電點是蛋白質的一個重要性質，測定等電點的方法是在不同pH條件下測量蛋白質的電泳遷移率，然後用遷移率對pH作圖，對應於遷移率為零的pH就是蛋白質的等電點。按照蛋白質等電點不同而進行分離的電泳方法稱為蛋白質等電聚焦電泳。由於其解析度可達到0.01pH單位，故特別適用於分離分子量相近而等電點不同的蛋白質組分。