布局氏菌病不同檢測方法的比較

❶ 如何區別布氏桿菌病、細小病毒病、偽狂犬病、藍耳病等幾種豬繁殖障礙病

豬繁殖障礙病在臨床上都共同表現為母豬流產、產死胎、木乃伊，公豬發生睾丸炎，但是各種病的病原體與傳播方式不一樣，所以病豬在臨床表現上各有其典型的發病特徵。

（1）布氏桿菌病 是由布氏桿菌引起的一種傳染病。主要症狀是第一胎母豬發生流產，妊娠1～3個月流產者多見，最早2～3周，最晚接近分娩流產。公豬發生睾丸炎，兩側或單側睾丸明顯腫大，後期睾丸萎縮，甚至陽痿。有的出現關節炎、後肢跛行或者麻痹。

（2）細小病毒病 其病原體為細小病毒。該病毒主要侵害初產母豬。母豬表現不孕、流產、產死胎或木乃伊，即使胎兒不死，仔豬產下後，也很難成活。公豬沒有特殊的臨床症狀。此病與布氏桿菌病不同的是，公豬睾丸不發生炎症、不腫大，不發生關節炎與後肢跛行，體溫正常。

（3）偽狂犬病 其病毒屬於皰疹病毒。主要侵害20日齡以內的哺乳仔豬。突然發病，體溫升高至41～42℃，喘氣，精神沉鬱，厭食，呼吸加快，有的嘔吐和腹瀉，部分豬有瘙癢感，頸部、前後肢尾根等處毛完全脫落，裸露污穢的紅色創面。有的豬有神經症狀，初期紊亂為主，後期以麻痹為特徵。成年豬一般為隱性感染，妊娠母豬感染後有的出現流產、死胎、木乃伊，公豬發生睾丸炎。本病與布氏桿菌病、細小病毒病的區別要點是，上述兩種病體溫不高，無神經症狀，無嘔吐、瘙癢感，前後肢及尾部無脫毛等臨床症狀。

（4）豬藍耳病 主要表現妊娠母豬流產，產死胎、木乃伊或弱仔增多，大批仔豬死於哺乳期和斷奶後，即使不死也造成生長發育遲緩，很難長到成豬。斷奶後母豬不發情，難以配種，公豬性慾下降，精液質量嚴重下降，精液減少，畸形精子增多，病豬的耳尖或後軀出現大小不等的紅紫斑，過後又消失。仔豬出現衰弱、精神委頓、腹瀉、消瘦，在耳部、肛門周圍、小母豬外陰部、小公豬的包皮附近有出血點或紫斑。死亡率高達30%～80%，有的可達100%。成年豬出現呼吸困難，體溫升高，厭食與腹瀉等，耳及全身各處出現藍紫斑，死亡率可達30%以上。此病與布氏桿菌病、細小病毒病、偽狂犬病的區別要點是上述三種病在臨床上不出現皮膚紫斑。不表現呼吸困難，死亡率也沒有藍耳病高。

以上四種繁殖障礙病雖然可以通過臨床的特殊表現進行鑒別診斷，但最後確診還要通過實驗室診斷。

❷ 實驗室檢測家畜布氏桿菌病的方法主要有哪些

1．血象白細胞半數正常或輕度減少，淋巴細胞相對或絕對增多，分類可達60%以上。血沉在各期均增速。久病者有輕或中度貧血。 2．細菌學檢查患者血液、骨髓、乳汁、子宮分泌物均可做細菌培養。因牛種菌初分離困難。要求嚴格的環境，故各種標本最好採集兩份，一份用含肝浸液的肉湯做培基，在CO2孵箱中培養；另一份放一般環境中孵育，培養時間不得短於2周。急性期陽性率高，慢性期低。骨髓標本較血液標本陽性率高。有人建議慢性布魯氏菌病患者的血液接種到雞胚卵黃中可獲較高陽性率。 3．免疫學檢查 （1）血清凝集試驗（Wright試驗）試管法較靈敏。患者多在第二周出現陽性反應，1：100以上有診斷價值。病程中效價遞增4倍及以上意義更大。正常人可有低滴度的凝集素；某些傳染病的假陽性率可達30%以上，如兔熱病該凝集效價升高；注射霍亂疫苗的人90%可呈假陽性；接種布魯氏菌活菌苗者，凝集效價也增高。診斷時要注意分析。另外由於抗體IgA、IgG、IgM量的比例不同，如IgA含量高則可出現患者血清低稀釋度為陰性，高稀釋度反為陽性的所謂前帶現象。因此做該實驗時應增大患者血清稀釋范圍。 （2）補體結合試驗補體結合抗體主要為IgG，出現較遲，持續較久，一般1：16以上即為陽性。對慢性患者有較高特異性。 （3）抗人球蛋白試驗（Coombs』tist）用於測定血清中的不完全抗體。不全抗體可阻斷完全抗體與抗原的凝集反應，使凝集試驗呈假陰性。Coombs試驗是使不完全抗體與不可見抗原結合的復合物通過抗人球蛋白血清結合成塊，直接可見。故凝集試驗陰性者可作此檢查。

❸ 大腸桿菌、大腸埃氏菌檢測方法的不同他們的區別，英文的表達方式

大腸桿菌和大腸埃希氏菌應該是一種菌...埃希氏菌是屬名，大腸埃希氏菌是種名，大腸埃希氏菌又稱大腸埃希氏桿菌或大腸桿菌，是埃希氏菌這一屬當中的一個種，埃希氏菌是Escherichia，為屬名，大腸桿菌（大腸埃希氏菌）是Escherichia coli，也就是平常說的E-coli，是種名。據我的了解應該是這樣的......

❹ 牛布病的檢測方法都有哪些（至少四種）

吃沒熟透的肉可能染上
布魯氏菌
，這種細菌可能會導致持續性高熱、
不規則熱
或長期低熱，同時伴有關節肌肉疼痛、乏力、多汗等。在溫度高到70℃以上這種細菌就不能存活，因此建議吃肉時務必熟透後再吃。

❺ 怎樣檢測狗布氏桿菌病

布魯氏桿菌會引起布魯氏桿菌病，簡稱布病，它是一種人畜共患的慢性傳染性疾病，危害較大。用BIOG檢測試劑盒做PCR，能在寵物患病早期未表現出明顯症狀時及時進行判斷，有效杜絕漏檢、誤診的風險，幫助寵物醫生對寵物疾病實現早發現、早診斷、早治療、早康復。
布氏桿菌是一種細胞內寄生菌，葯物治療比較困難，因此本病目前尚無特效葯物。可以試用四環素、鏈黴素、卡那黴素、合黴素、慶大黴素、丁胺卡那黴素等，同時給予維生素C和維生素B1，有一定緩解和減輕菌血症的作用。其中以四環素和鏈黴素聯合應用效果較好。對於流產並伴發子宮內膜炎的母犬，可以用0.1％高錳酸鉀溶液進行沖洗子宮和陰道，每天1～2次，直至無分泌物流出為止。對其他有症狀的病犬，可做對症治療。也有人適用中葯秦芄巴戟散治療睾丸炎和關節炎，收到一定的療效。

❻ 布氏桿菌病怎樣檢測

到醫院傳染科找大夫告訴他你要做布病檢測，他開單子你去化驗室抽血，三天出結果

❼ 布魯氏菌病檢測的新方法，新技術有哪些

（1）血清凝集試驗 試管法乃直接檢測脂多糖抗原的抗體，效價≥1:160為陽性，但注射需亂菌苗後也可呈陽性，故應檢查雙份血清，若效價有4倍或以上增長，乃提示近期布氏桿菌感染。
（2）酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 該法的陽性率高於凝集試驗，且檢測IgM及IgG的敏感性相似。因慢性患者的抗體屬IgG型，故本法可同時用於急、慢性病人的診斷。近來有採用親和素酶聯試驗，較ELISA更敏感。
（3）2-巰基乙醇（2-ME）試驗 本法可檢測IgG，用於鑒別自然感染與菌菌免疫。自然感染達1個月後，體內凝集即以IgG型為主（初為IgM型），該IgG對2-ME有耐受性；而菌菌免疫後3個月內的凝集素均以IgM為主，可為2-ME所破壞。
（4）補結試驗 補結抗體亦屬IgG，病程第3周的效介可超過1:16。本試驗的陽性率高於凝集試驗，特異性亦高，但出現時間晚於凝集試驗。
（5）人球蛋白試驗 病人尚可產生一種不完全抗體，後者雖可與抗原結合，但肉眼不可見。當將抗人球蛋白免疫血清加入抗原-不完全抗體復合物中，即出現直接可見的反應。不完全抗體出現早而消失晚，故可用於急、慢性期病人的診斷。鑒於本法操作復雜，只適用凝集試驗陰性的可疑病人，效價>1:80為陽性。
（6）皮內試驗 布魯菌素皮試乃為一種延遲超敏反應，24～48小時觀察結果。僅有局部紅暈而無腫塊者為陰性，局部紅腫和硬快的直徑達2～6cm者為陽性。皮試在病程6個月內的陽性率很低，慢性期患者幾近100%呈陽性或強陽性反應。
（7）其他免疫試驗 有反向被動血凝試驗、放射免疫、間接免疫熒光試驗等，因操作復雜，不適於普遍採用。

❽ 腸道致病菌的分類及常用檢測方法

根據可培養細菌的數量分類在腸道菌群中，可以培養到的細菌有400餘種，依據其數量多少可以分為主要(優勢)菌群(predominant microflora)和次要菌群(sub—dominant microflora)。

①主要(優勢)菌群：指腸道菌群中數量大或種群密集度大的細菌，一般在10～10cfu/g以上，包括類桿菌屬、優桿菌屬、雙歧桿菌屬、瘤胃球菌屬和梭菌屬等專性厭氧菌，通常屬於原籍菌群。優勢菌群是對宿主發揮生理功能的菌群，在很大程度上影響著整個菌群的功能，決定著菌群對宿主的生理病理意義。

②次要菌群：數量在10～10cfu/g以下，主要為需氧菌或兼性厭氧菌，如大腸桿菌和鏈球菌等，流動性大，有潛在致病性，大部分屬於外籍菌群或過路菌群。

檢測方法：

1、采樣及稀釋

（1）按無菌操作法將檢樣25g（或25mL）放於含有225mL無菌水的三角瓶中（瓶內預置適當數量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用無菌均質器，以8000～10000r/min的速度離心1min，做成1：10的稀釋液。

（2）用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1Ml，注入含有9mL無菌水的試管內，振搖混勻，做成1：100的稀釋液，換用1支lmL滅菌吸管，按上述操作依次作l0倍系列稀釋液。

（3）根據食品的衛生要求或對檢驗樣品污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。也可直接用樣品接種。

2、乳糖初發酵試驗

即通常所說的假定試驗。其目的在於檢查樣品中有無發酵乳糖產生氣體的細菌。將待檢樣品接種於乳糖膽鹽發酵管內，接種量在1mL以上者，用雙倍乳糖膽鹽發酵管。

lmL及1mL以下者，用單倍乳糖膽鹽發酵管。每一個稀釋度接種3管，置36±1℃溫箱內，培養24±2h，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產氣者，則按下列程序進行。

3、分離培養

將產氣的發酵管分別劃線接種於伊紅美藍瓊脂平板，置36±1℃溫箱內培養18～24h，然後觀察菌落形態並作革蘭氏染色、鏡檢並作復發酵試驗。

4、乳糖復發酵試驗

即通常所說的證實試驗，其目的在於證明經乳糖初發酵試驗呈陽性反應的試管內分離到的革蘭陰性無芽胞桿菌，確能發酵乳糖產生氣體。

在上述選擇性EMB培養基上，挑取可疑的大腸菌群菌落1～2個進行革蘭染色，同時接種乳糖發酵管，置36±l℃溫箱內培養24±2小時，觀察產氣情況。

凡乳搪發酵管產氣，革蘭染色為陰性反應的無芽胞桿菌，即報告為大腸菌群陽性；凡乳糖發酵管不產氣或革蘭染色為陽性，則報告為大腸菌群陰性。

(8)布局氏菌病不同檢測方法的比較擴展閱讀：

有益菌菌群的生理功能：

如果腸內有益菌菌群占優，腸內黏膜呈現粉紅色，表示腸內環境相當良好。

1、吸收水分，糞便較軟，較易排泄

在胃部分解消化的食物，經由小腸吸收營養後，成為粘稠狀物體送至大腸。然後再經過18小時將水分及礦物質吸收，就變成容易排泄的糞便。腸道內環境良好時，糞便的軟硬適中，排便會較為順利。

2、緩和的蠕動，能順利將糞便排出

藉由腸的蠕動，將糞便緩慢的推送至肛門。如果蠕動過快或太慢，都將影響糞便的構成，導致便秘或者腹瀉。而如果腸內干凈，則蠕動的速度就相當的有規律，糞便可順利排出。

3、有助維他命的合成

比菲德氏菌等好菌能維護肌膚的健康，並具有合成有助熱量產生的維他命B1、B2及B6等，以及與止血、骨骼形成有關的維他命K等之功用。健康的腸道，好菌會不斷繁殖，維他命的合成也可順利進行。

4、迅速排出有害物質

健康的腸道並非完全沒有壞菌的存在，有害物質多少會產生。當然還包括，吃進體內的食品化學添加物或是無法成為營養成分的物質。只要腸內環境良好，這些物質在開始危害身體前就被排出體外。

5、避免病原菌的侵害

比菲德氏菌等好菌可以刺激並提高身體的免疫機能，而且易引起食物中毒等病原菌因具怕酸特質，所以像是含有好菌的乳酸飲料或健康食品等，都可抑制病原菌在腸內繁殖。

腸道有益菌菌群除了以上功能之外，對人體還有營養作用，如糖尿病、高血壓、高血脂等。B族維生素和非必需氨基酸對人類的毛發具有重要的作用，當缺少這些營養元素，會導致頭發脫落或毛發發黃、發叉，容易折斷等現象。

❾ 牛布氏桿菌病的診斷及防治方法

牛布氏桿菌病是人畜共患的慢性傳染病。主要侵害生殖系統，以母牛發生流產和不孕，公牛發生睾丸炎和不育為特徵，故又稱傳染性流產。本病病原體是牛布氏桿菌。

該病臨床症狀主要表現為妊娠母牛流產。流產後多數伴發胎衣不下或子宮內膜炎。

公牛發生睾丸炎和副睾炎，失去配種能力。

對牛布氏桿菌病的診斷可採取3種實驗室檢查方法。

（1）細菌學檢查。取母牛陰道分泌物、胎衣、胎兒胃內容物塗片，將塗片在酒精燈上加溫固定後，滴加2%沙黃水溶液，在火焰上方微微加熱0.5～1分鍾至出現蒸氣，水洗後用1%孔雀綠復染1～2分鍾，水洗吸干、鏡檢。若看到紅色的球桿菌便可確診。其他雜菌成綠色。

（2）全乳環狀反應。取剛擠出的全乳1毫升放於反應管內，加入抗原（染成藍色或紅色）0.1毫升，充分振盪混合，靜置於37℃溫箱中，1小時後取出立即判定。用藍色抗原時，若在乳脂層出現比乳柱深的藍色環狀帶即判為陽性。

（3）平板凝集反應。此法比較簡單實用。

採取被檢牛血液，待凝固後，分離血清作被檢材料。先用蠟筆在玻璃板上劃成2厘米×2厘米的方格，每一方格中放置一份被檢血清0.02毫升，用0.2毫升吸管吸取充分攪勻的抗原，分別在每一血清樣品旁加入0.03毫升抗原，每格各用一根火柴棒或牙簽攪拌血清和抗原，使其均勻混合，若室內溫度偏低，可將玻板在酒精燈上方微微加溫，於4分鍾內出現凝集現象者為陽性。

本病公牛無治療價值。母牛流產後繼發予宮內膜炎或胎衣不下時可用0.02%呋喃西林，0.1%高錳酸鉀液或生理鹽水沖洗子宮，排除沖洗液後向子宮內灌入抗生素葯物。胎衣不下時可採取手術剝離或肌內注射垂體後葉素50～100單位，以加速胎衣排除。本病防疫主要是加強檢疫，不到疫區引種。必須買牛時一定隔離30天以上，並作二次檢疫，確認健康才能入群。

對同群牛堅持每年定期預防注射布氏桿菌菌苗，被污染的場所及用具有3%～5%來蘇兒消毒。

❿ 布魯氏菌病診斷標准及處理原則的附錄A

布魯氏菌病診斷的特異性實驗室檢查技術
（補充件） A1.1 血培養
A1.1.1 雙相培養基培養：無菌從可疑病人靜脈取血液4～5mL，在酒精燈火焰附近將血液注入5～6支含雙相培養基的中試管內，或2～4隻含雙相培基燒瓶中，輕輕混合傾斜，使被檢血液分布在瓊脂斜面上，置37℃溫箱培養，如果懷疑病人是牛種布魯氏菌感染時，應有一半標本置CO（下標始）2（下標終）環境中培養，三天後觀察結果，如未見布氏菌生長，可按上法再傾斜，使血液塗在瓊脂斜面上，繼續培養，每隔一天觀察一次，如有可疑布魯氏菌落，可用鉑金耳勾出接種到瓊脂試管培基，獲得純培養，進一步作布氏菌鑒定，血培養二十天仍不出菌，可定為陰性。
A1.1.2 接種未受精雞卵法：取新鮮雞蛋兩個，把雞蛋放在固定架上，銳端向上，以碘酒和酒精依次消毒蛋殼，用眼科手術刀在頂部穿一小孔，用三厘米長注射針頭將被檢血液徐徐注入卵黃中，每個雞蛋接種血液0.2mL，立即用滅菌石蠟將孔密封，置37℃溫箱中培養，五天後把接種血液的雞蛋無菌打開，用滅菌的毛細管把接種血液部分的卵黃及蛋清吸出0.5～0.6mL，接種2～3支斜面培養基上，置37℃培養，2～3天觀察一次，15天仍不見可疑菌落生長，定為陰性。
A1.2 骨髓培養
用滅菌的導尿管將尿液導出放入滅菌容器中，為濃縮細菌，提高檢出率，可在尿液中加入1%～3%的高價布魯氏菌免疫血清，混合後，置37℃溫箱2h，高速離心沉澱，取沉澱物0.5mL接種在選擇性培基上培養，或注射豚鼠，用生物學法分離布魯氏菌。
A1.3 其他病原材料培養
由乳，腦脊液，關節液和滑囊液分離布魯氏菌，將液體標本無菌地接種到瓊脂斜面上，或培養平板上，塗布於培基表面，參照血培養法觀察結果，15天仍無可疑菌生長，定為陰性。
A1.4 生物學分離布魯氏菌法
為了提高對布魯氏菌的檢出率和從污染的材料中分離布魯氏菌，將被檢材料（固體標本加滅菌的生理鹽水研碾成漿液態）經皮下或腹腔注射豚鼠或小白鼠，豚鼠接種1mL，小鼠接種0.5mL，接種豚鼠，即可觀察血清變態反應情況，又可作細菌分離培養，小鼠感染後二十天解剖取臟器培養，豚鼠接種後三十天解剖取臟器培養。 A2.1 平板凝集試驗（PAT)
A2.1.1 器材及試劑
赫德遜氏凹玻板或一塊清潔無油脂玻璃板，平板凝集抗原，被檢血清，已知陰性和陽性血清，0.1mL吸管或微量加樣器，牙簽或細鐵絲。
A2.1.2 操作方法
A2.1.2.1 備方形潔凈的玻璃板，劃成25個方格（或更多），橫數5格，縱數5格，第一列各格寫下血清號碼。
A2.1.2.2 用0.1mL吸管按下列劑量加受檢血清於任何一行（橫格）的各格中：第一格0.08mL，第二格0.04mL，第三格0.02mL，第四格0.01mL。
A2.1.2.3 加平板凝集抗原0.03mL於各血清格中，用牙簽或細鐵絲混合，由血清量最小的格混起，每份血清用一根牙簽混合即可，用後燒毀，若用細鐵絲混合時，每份血清混合後用酒精棉球擦凈，然後再用作另一份血清。
A2.1.2.4 混勻後將玻璃板置於酒精燈火焰或凝集反應箱上，均勻加溫，使其達到30℃左右，5min內記錄反應結果。
A2.1.2.5 每次試驗用陰、陽性血清各1份作對照。
A2.1.2.6 按下列標准用加號記錄反應強度：
++++：出現大的凝集片或小的粒狀物，液體完全透明，100%凝集。
+++：有明顯的凝集片，液體幾乎完全透明，75%凝集。
++：有可見的凝集片，液體不甚透明，50%凝集。
+：液體混濁，只有少量粒狀物，25%凝集。
－：液體均勻混濁。
A2.1.2.7 平板凝集反應與試管凝集反應的關系：
0.08mL 血清量出現凝集相當於試管法1∶25的血清稀釋度，0.04mL相當於1∶50，0.02mL相當於1∶100，0.01mL相當於1∶200。
A2.1.3 判定
人血清0.02mL出現++及以上凝集程度判為陽性，人血清0.04mL出現++及以上凝集程度判為可疑。
A2.2 虎紅平板凝集試驗（RBPT)
A2.2.1 器材及試劑
清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，0.1mL吸管或微量加樣器，牙簽或細鐵絲，虎紅平板凝集抗原，被檢血清。
A2.2.2 操作方法
在玻片上加0.03mL被檢血清，然後加入虎紅平板抗原0.03mL，搖勻或用牙簽混勻，在5min內判定結果。
A2.2.3 判定
判定凝集程度（－至++++）同平板凝集反應亦可只分為（+）陽性，（－）陰性兩類。
A2.3 試管凝集試驗（SAT)
A2.3.1 器材及試劑
試管凝集抗原，被檢血清，0.5%的石碳酸生理鹽水，吸管，凝集試管，溫箱和試管架等。
A2.3.2 操作方法
A2.3.2.1 被檢血清的稀釋：在一般情況下，每份血清用5支小試管（口徑8～10mm），第一管加入2.3mL石碳酸生理鹽水，第二試管不加，第三、四、五管各加0.5mL，用1mL吸管吸取被檢血清0.2mL，加入第一管中，混勻。混勻後，以該吸管吸取第一管中血清加入第二管和第三管各0.5mL，以該吸管將第三管混勻，並吸取0.5mL加入第四管，混勻。再從第四管吸取0.5mL，棄去。如此稀釋後，從第二管到第五管血清稀釋度分別為1∶12.5，1∶25，1∶50和1∶100。
A2.3.2.2 加入抗原：先以0.5%石碳酸生理鹽水將抗原原液作適當稀釋（一般是作1∶10稀釋）。稀釋後的抗原加入各稀釋的血清管（第一管不加，作為血清對照），每管加0.5mL，混勻。加入抗原後，每管總量1mL，血清稀釋度從第二管至第五管分別為1∶25，1∶50，1∶100和1∶200，從第一管再吸出0.5mL，剩1mL。
A2.3.2.3 對照：陰性血清對照，血清稀釋後加抗原（與被檢血清對照相似）。陽性血清對照，其血清稀釋到原有滴度，再加抗原，抗原對照，適當稀釋的抗原加石碳酸鹽水。
A2.3.3 判定
A2.3.3.1 判定比濁管制備：每次試驗須配製比濁管作為判定的依據。配製方法是：取本次試驗用的抗原稀釋液5～10mL，加入等量的0.5%碳酸鹽水作倍比稀釋，按表A1配製比濁管。
表A1 比濁管配製
A2.3.3.2 全部試驗管，對照管及比濁管充分振盪後置37℃溫箱中20～22h，取出後放室溫2h，然後以比濁管為標准判定結果。
A2.3.3.3 記錄結果：根據各管中上層液體的清亮度記錄結果。特別是50%清亮度（++）對判定結果關系較大，一定要與比濁管對比判定。
++++：完全凝集，上層液100%清亮。+++：幾乎完全凝集，上層液75%清亮。++：顯著凝集，液體50%清亮。+：有微量凝集，液體25%清亮。－：無凝集，液體不清亮。
確定每份血清滴度是以出現十十及以上的凝集現象的最高血清稀釋度。
A2.4 抗人免疫球蛋白試驗（COOMBS)
A2.4.1 器材及試劑
除試管凝集試驗所需的一般器材及試劑外，還需抗人免疫球蛋白血清及普通離心機。
A2.4.2 操作方法
A2.4.2.1 試管凝集試驗階段：按A2.3進行試管凝集試驗。
A2.4.2.2 抗免疫球蛋白的反應階段：選取試管凝集試驗的可疑反應管及全部陰性反應管，記錄管號，經4000r/min離心15min，用生理鹽水反復洗滌三次，然後向各管中加入生理鹽水0.5mL、一定稀釋度（一般是1∶20倍稀釋）的抗人免疫球蛋白血清，混勻，將反應管置37℃溫箱中20～22h，取出放室溫2h後判定結果。
A2.4.2.3 判定：判定結果的標准，程度均同試管凝集試驗。
A2.5 補體結合試驗（CFT)
A2.5.1 器材及試劑
37℃水浴箱，普通離心機，普通冰箱，各種容量的吸管，燒瓶，凝集管和試管架，生理鹽水，補體（新鮮豚鼠血清，或凍干補體），2%的綿羊紅細胞懸液，溶血素，補體結合抗原，陰性和陽性血清，被檢血清。
A2.5.2 操作方法
A2.5.2.1 補體滴度：在進行CFT時，必須當天滴定補體，將補體用生理鹽水稀釋為1∶20，通常在十支凝集管中分別依次加入不同量的1∶20稀釋補體0.02～0.2mL，然後各管中加入2個單位的抗原液0.2mL，再用生理鹽水把各管補至0.6mL，混勻後放37℃水浴中30min，再加0.2mL的溶血素（2個單位）和2%紅細胞0.2mL，混勻，置37℃水浴中30min，判定結果（見表A2）。
表A2 補體滴度程序和結果 mL
上例中產生完全溶血且合補體量最少管為第八管，定為一個恰定單位，前一管（即第七管）為一個完全單位。在正式試驗時採用兩個完全單位的補體量，按式（A1）計算出補體稀釋倍數X。
20∶2Y=X∶0.2………………………………………（A1）
式中：Y——1個完全單位補體量。
A2.5.2.2 溶血素及抗原滴定：在進行CFT時溶血素和抗原亦需滴定，但不必在試驗當天進行；而且，在購到此二試劑時出售單位（或提供單位）都已滴定了，需用單位按說明稀釋即可。
A2.5.2.3 被檢血清滅活：人血清滅活補體的溫度是56℃，時間為30min。
A2.5.2.4 本試驗：滅活後的被檢血清從1∶5稀釋開始，然後作倍比稀釋，每管中稀釋血清量為0.2mL，再向各管中加2個單位抗原0.2mL，2個單位補體量0.2mL，混勻，置37℃水浴中30min，取出後，向各管加0.4mL的溶血素，再放37℃水浴中作用30min，判定結果（見表A3）。
表A3 CFT本試驗程序 mL
A2.5.3 判定
++++：無溶血，SRBC沉於管底或懸浮。+++∶25%溶血。++∶50%溶血。+∶75%溶血。－：100%溶血。以50%(++）及以上不溶血確定CFT的滴度。
為防止判定的錯誤，可配製標准溶血管（見表A4）。
表A4 標准溶血管的配製 mL A3.1 器材及試劑
布魯氏菌素，75%酒精棉球，結核菌素注射器，皮內注射針頭，測量尺。
A3.2 操作方法
於被檢者前臂內側1/3處，用酒精棉球消毒後，晾乾，皮內注射0.1mL布魯氏菌素，在注射後24和48h作兩次觀察。
A3.3 判定
兩次觀察，以反應最強的結果為准，注射局部出現充血，浸潤為2.0cm×2.0cm及以上（或以反應面積≥4.0cm（上標始）2（上標終）），判為陽性。
附加說明：
本標准由衛生部委託技術歸口單位衛生部傳染病防治監督管理辦公室負責解釋。