濕定量計算方法視頻

『壹』 請問：做熒光定量PCR時，△△Ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼

△△Ct是熒光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，其中，n為擴增反應的循環次數，X₀為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（內參基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。

起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

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熒光定量PCR的原理：

熒光定量PCR技術：在PCR反應體系中加入熒光基團，通過熒光信號不斷累積而實現實時監測PCR全程，然後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量PCR中，對全程PCR擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和熒光信號的變化可以繪製成一條曲線。

實時熒光定量常用的熒光化學分類有SYBR Green I法和Tag Man探針法。

Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。

『貳』 定量分析的全過程主要包括哪些步驟

定量分析的任務是測定物質中某種或某組分的含量。定量分析過程通常包括:1、試樣的採取和制備、2、稱量和試樣的分解、3、干擾組分的掩蔽和分離、4、定量測定和分析結果的計算和評價等
(1) 取樣:根據分析對象是氣體、液體、或固體，採用不同的取樣方法。在取樣過程中，最重要的一點是要使分析試樣具有代表性。試樣制備:試樣經過破碎、過篩、混勻、縮分後才能得到符合分析要求的試樣。破碎分為粗碎、中碎和細碎甚至研磨。每次破碎後要使樣品全部通過篩孔。縮分是使粉碎後的試樣量逐步減少，採用四分法。將過篩後的試樣混勻，堆為錐形後壓為圓餅形狀，通過中心分成四等份，棄去對角的兩份。是否需要繼續縮分，可按下述公式進行計算。mQ(kg):試樣的最小質量;k:縮分常數的經驗值，試樣均勻度越差，越大，通常在0.05~1 kg·mm-2之間。d(mm ):試樣的最大粒度直徑。· 采樣與縮分試樣量計算示例· 例:採集礦石樣品，若試樣的最大直徑為10 mm， k =0.2 kg/mm2, 則應採集多少試樣?· 解: mQ ≥ kd 2 = 0.2 ´ 10 2 = 20 (kg)· 例: 有一樣品 mQ = 20 kg， k =0.2 kg / mm2, 用6號篩過篩, 問應縮分幾次? 解: mQ ≥ kd 2 = 0.2 ´ 3.36 2 = 2.26 (kg)縮分1次剩餘試樣為20 ´ 0.5 = 10 (kg)，縮分3次剩餘試樣20´ 0.53= 2.5 (kg) ≥ 2.26，故縮分3次。從分析成本考慮，樣品量盡量少，從分析誤差考慮，不能少於臨界值 mQ ≥ kd 2
(2)試樣分解和分析試液的制備
定量化學分析一般採用濕法分析，通常要求將乾燥好的試樣分解後轉移入溶液中，然後進行分離及測定。試樣分解和分析試液的制備要求:試樣分解完全; 待測物質不損失;避免引入干擾雜質。根據試樣性質的不同，分解的方法亦不同。
溶解法→無機試樣
熔融法 →無機試樣
微波消解法→無機試樣
灰化法 →有機試樣
(3)分離及測定

根據待測組分的性質、含量和對分析結果准確度的要求，選擇合適的分析方法。根據方法的靈敏度、選擇性及適用范圍等來正確選擇適合的分析方法。當試樣共存組分對待測組分的測定有干擾時，常用掩蔽劑消除干擾，而無合適的掩蔽方法時，必須進行分離。
(4)分析結果的計算及評價
根據分析過程中有關反應的計量關系及分析測量所得數據，計算試樣中待測組分的含量。對於測定結果及誤差分布情況，應用統計學方法進行評價。
二、 定量分析結果的表示
⑴ 待測組分的化學表示形式
以待測組分實際存在形式含量表示。
以氧化物或元素形式表示
以所需的組分表示
電解質溶液的分析結果，以離子含量表示
三、 待測組分的含量表示方法
固體試樣:常用質量分數表示 wB=mB/ms (%)
含量很低時，μg/g(或10-6)，ng/g(10-9)，pg/g(10-12)
液體試樣:
物質的量濃度:單位mol/L。
質量摩爾濃度:單位mol/kg。
質量分數:待測組分的質量除以試液的質量，量綱為1。
體積分數:待測組分的體積除以試液的體積，量綱為1。
摩爾分數:待測組分的物質的量除以試液的物質的量，量綱為1。
質量濃度:以mg/L, μg/L, μg/mL，n g/mL, p g/mL。
氣體試樣:常量或微量組分的含量，通常以體積分數表示。
基礎化學中經常用到的定量分析儀器有:高效液相色譜儀、氣相色譜儀、分光光度計、常用玻璃儀器(燒杯、量筒、玻璃棒、容量瓶等)、天平等。此外，由於行業不同，應用的分析儀器截然不同，如在生物行業中會用到PCR。

『叄』 標准加入法怎樣的過程，如何定量計算

1、標准加入法，是將一定量已知濃度的標准溶液加入待測樣品中，測定加入前後樣品的濃度，加入標准溶液後的濃度將比加入前的高，其增加的量應等於加入的標准溶液中所含的待測物質的量。

2、標准加入法又稱為標准增量法或直線外推法。是一種被廣泛使用的檢驗儀器准確度的測試方法。這種方法尤其適用於檢驗樣品中是否存在干擾物質。

3、當很難配置與樣品溶液相似的標准溶液，或樣品基體成分很高，而且變化不定或樣品中含有固體物質而對吸收的影響難以保持一定時，採用標准加入法是非常有效的。

4、定量計算過程。假設取n份體積為V的樣品，等量加入n個100毫升的容量瓶中，取不同濃度梯度的已知濃度的標准溶液，分別加入上述容量瓶中。

5、濃度梯度可按實際情況選取。例如分別選取0.100毫升、0.200毫升、0.500毫升、1.00毫升、2.00毫升等，但至少要5個梯度，另外加一個空白。加水稀釋至所需刻度後，分別測定對應的吸光度A1、A2、A3、A4、A5、A6等。

6、以標准溶液的濃度為橫坐標，吸光度為橫坐標，得到有截距的直線，把直線延長到與橫坐標相交,得到的交點處的濃度值，該濃度值就是樣品中待測組分的濃度。

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標准曲線法和標准加入法

1、標准曲線法適用於標准曲線的基體和樣品的基體大致相同的情況，優點是速度快，缺點是當樣品基體復雜時不正確。

2、標准加入法可以有效克服上面所說的缺點，因為他是把樣品和標准混在一起同時測定的（「標准加入法」的叫法就是從這里來的），缺點就是速度很慢。

3、標准曲線法可在樣品很多的時候使用，先做出曲線，然後從曲線上找點求濃度；標准加入法，適合樣品數量少的時候用。

『肆』 定量分析有哪些方法

色譜定量方法：

1. 歸一化法

2. 外標法

3. 內標法

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