胰島素測量方法

① 酶聯免疫法（ELISA）測胰島素的具體步驟。

1.包被抗原：用包被緩沖液稀釋抗原至最適濃度（5～20μg/ml）各0.3ml加於微反應板每個凹孔中,4℃過夜或37℃水浴2～3小時,貯存冰箱
2. 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鍾
3. 加被檢標本：每凹孔加入用含有0.05%吐溫-20的稀釋緩沖液稀釋的被檢血清各50μl，37℃，作用1小時
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml 後備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒後棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl（TMB底物），再加入顯色劑B 50μl（過氧化氫），輕輕震盪混勻，37℃避光顯色
15 分鍾
10. 終止：每孔加終止液50μl（2M H2SO4），終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液後15 分鍾以內進行。

② 牛胰島素一級結構的測定方法

就是將氨基酸從氨基端開始利用氨基很容易和2，4-二硝基氟氯苯（DNP）發生芳香親核取代反應，如用一個肽和2,4-二硝基氟苯反應，顯然鍵的N-端游離氨基和它反應，然後把這個N-端帶有2,4-二硝基苯基的肽鏈徹底水解，在水解物中，只有一個氨基酸的α-氨基的氫被DNP取代，各種氨基酸的DNP標記化合物都是黃色的，並且都各有一個Rf值，因此很容易鑒別；所以通過這個方法，很容易辨認出肽中的N-端是哪一個氨基酸。

③ 胰島功能測定是包括什麼參考值是多少

胰島素功能檢測包括：

1. C-肽;糖化血紅蛋白;血紅蛋白A1C;

2. 血清糖化蛋白（GSP）;

3. 胰島素;胰島素原;胰高血糖素等。

胰島素功能檢測參考值：

1. C-肽; 正常值 成人≤4.0μg/L 男1.5～5.0μg/L 女1.4～5.5μg/L。

2. 糖化血紅蛋白;血紅蛋白A1C正常值

   電泳法 佔Hb總量的0.056～0.075 柱層析法 佔Hb總量的0.06～0.09

   高壓液相色譜法 HbA1a 0.016 HbA1b 0.008 HbA1c 0.03～0.06。

3. 血清糖化蛋白（GSP）; 正常值 果糖胺法 [2.5mmol/L。

4. 胰島素; 6～24mIU/L。

5. 胰島素原; 正常值 [0.2μg/L 或[0.3IRI。

6. 胰高血糖素 正常值 30～210ng/L。

胰島功能檢測解釋：

胰島素功能檢查包括胰島素、C肽、血糖測定。胰腺組織是人體內的重要內分泌器官，其分泌的胰島素能促進肝臟、肌肉和脂肪等組織攝取和利用葡萄糖，是體內唯一降低血糖的激素。C肽是胰島素時段下的肽段，不被肝臟蛋白酶所破壞，因此在檢測胰島素的同時測定血中的C肽含量，可以更真實地反映胰島的分泌功能。血糖測定則是間接地反映胰島素功能。

胰島功能檢查的作用：

是看看你的胰島分泌胰島素的功能怎麼樣，是不是受損了，是檢查早期糖尿病的常用方法。胰島功能檢查應該是在早晨空腹的情況下,進食75g葡萄糖或100g麵粉的饅頭前後分別於空腹,餐後1小時,2小時,3小時抽靜脈血測定四個時間點的血糖,胰島素釋放,C-肽值.胰島功能檢查有幾項，包括胰島素釋放試驗、C肽釋放試驗。做法：糖尿病人選用饅頭餐或者口服75g葡萄糖，取血同時進行葡萄糖和胰島素、C肽等的測定。作用是測定胰島素的含量是絕對還是相對不足，確定糖尿病的情況，決定用葯。

胰島功能檢查步驟：

(1)試驗應在上午7～11時之間進行。早8：30以前到醫院、並順便攜帶當天早晨第一次小便10ml送檢。

(2)空腹坐位抽血後5分鍾內飲入250ml含75g葡萄糖的糖水;對於部分糖尿病人，為減少對B細胞的強烈刺激，可以進食2兩左右的(約100克)饅頭代替葡萄糖;妊娠期婦女葡萄糖的用量為100g;兒童按1.75g/kg體重計算，但總量不超過75g。

(3)進食後0.5小時、1小時、2小時、3小時分別抽血檢測血糖。常規口服葡萄糖耐量試驗的同時，平行測定血樣中的胰島素濃度。根據5次血中葡萄糖水平(空腹時坐標點為0)繪製糖耐量曲線，同時根據5次血漿胰島素水平繪制出胰島功能曲線。

患糖尿病時，無論空腹血漿胰島素水平，還是胰島素釋放試驗分泌曲線均較常人有明顯不同，1型糖尿病患者胰島素分泌減少，空腹血漿胰島素水平明顯低於正常，其基值一般在5mu/L以下，服糖刺激後其胰島素釋放也不能隨血糖升高而上升，常呈現無高峰的低平曲線，有些病人甚至不能測出。2型糖尿病患者空腹血漿胰島素水平可正常，或稍低於正常，但往往會出現高峰時間延遲，如在服糖後2小時或3小時出現，呈分泌延遲高峰後移。其中尤其是肥胖型的糖尿病病人，血漿胰島素釋放曲線明顯高於正常，但低於同體重的非糖尿病病人的釋放曲線。進食後胰島素分泌高峰後延(2～3小時)是2型糖尿病的特徵。

不過胃切除術後或嚴重的肝病等，腸道迅速吸收葡萄糖，而肝臟不能相應快速攝取葡萄糖所致。以上兩類病人不宜進行口服葡萄糖耐量試驗，需採用靜脈注射葡萄糖耐量試驗。

④ 測定胰島素濃度的機理

胰島素在胰島B細胞中合成。胰島素合成的控制基因在第11對染色體短臂上。基因正常則生成的胰島素結構是正常的；若基因突變則生成的胰島素結構是不正常的，為變異胰島素。在B細胞的細胞核中，第11對染色體短臂上胰島素基因區DNA向mRNA轉錄，mRNA從細胞核移向細胞漿的內質網，轉譯成氨基酸相連的長肽——前胰島素原，前胰島素原經過蛋白水解作用除其前肽，生成胰島素原。胰島素原隨細胞漿中的微泡進入高爾基體，由86個氨基酸組成的長肽鏈——胰島素原在高爾基體中經蛋白酶水解生成胰島素及C肽，分泌到B細胞外，進入血液循環中。未經過蛋白酶水解的胰島素原，一小部分隨著胰島素進入血液循環，胰島素原的生物活性僅及胰島素的5%。

胰島素的分子量5700，由兩條氨基酸肽鏈組成。A鏈有21個氨基酸，B鏈有30個氨基酸。A-B鏈之間有兩處二硫鍵相連。胰島B細胞中儲備胰島素約200U，每天分泌約40U。空腹時，血漿胰島素濃度是5～15μU/mL。進餐後血漿胰島素水平可增加5～10倍。胰島素的生物合成速度受血漿葡萄糖濃度的影響，當血糖濃度升高時，B細胞中胰島素原含量增加，胰島素合成加速。胰島素是與C肽以相等分子分泌進入血液的。臨床上使用胰島素治療的病人，血清中存在胰島素抗體，影響放射免疫方法測定血胰島素水平，在這種情況下可通過測定血漿C肽水平，來了解內源性胰島素分泌狀態。

⑤ 胰島功能測定包括什麼參考值是多少

胰島素功能檢測包括：

1. C-肽;糖化血紅蛋白;血紅蛋白A1C;

2. 血清糖化蛋白（GSP）;

3. 胰島素;胰島素原;胰高血糖素等。

胰島素功能檢測參考值：

①C-肽; 正常值 成人≤4.0μg/L 男1.5～5.0μg/L 女1.4～5.5μg/L。

②糖化血紅蛋白;血紅蛋白A1C正常值。

③電泳法 佔Hb總量的0.056～0.075 柱層析法 佔Hb總量的0.06～0.09。

④高壓液相色譜法 HbA1a 0.016 HbA1b 0.008 HbA1c 0.03～0.06。

⑤血清糖化蛋白（GSP）; 正常值 果糖胺法 [2.5mmol/L。

⑥胰島素; 6～24mIU/L。

⑦胰島素原; 正常值 [0.2μg/L 或[0.3IRI。

⑧胰高血糖素 正常值 30～210ng/L。

⑥ 用胰島素控制血糖的計量和用法

胰島素怎樣計算用量
正常人的空腹血糖維持在3.3~6.1mmol/L（60~110mg/dl），餐後半小時到1小時之間一般在10.0mmol/L（180mg/dl）以下，最多也不超過11.1mmol/L（200
mg/dl），餐後2小時又回到7.8mmol/L（140
mg/dl）。
胰島素怎樣計算用量
（一）怎樣估算其初始用量：
糖尿病患者在開始使用胰島素治療時，一律採用短效胰島素。而且，一定在飲食與運動相對穩定的基礎上，依下列方法估算初始用量，而後再依病情監測結果調整。
1、按空腹血糖估算：
每日胰島素用量（μ）=[空腹血糖（mg/dl）-100]x10x體重(公斤)x0.6÷1000÷2
100為血糖正常值；
x
10換算每升體液中高於正常血糖量；
x
0.6是全身體液量為60%；
÷1000是將血糖mg換算為克；
÷2是2克血糖使用1μ胰島素。
為避免低血糖，實際用其1/2--1/3量。
2、按24小時尿糖估算：病情輕，無糖尿病腎病，腎糖閾正常者，按每2克尿糖給1μ胰島素。
3、按體重計算：血糖高，病情重,0.5--0.8μ/kg；病情輕，0.4--0.5μ/kg；病情重，應激狀態，不應超過1.0μ/kg。
4、按4次尿糖估算：無糖尿病腎病，腎糖閾基本正常，按每餐前尿糖定性"+"多少估算。一般一個"+"需4μ胰島素。
5、綜合估算：體內影響胰島素作用的因素較多，個體差異較大，上述計算未必符合實際，故應綜合病情、血糖與尿糖情況，先給一定的安全量，然後依病情變化逐步調整。
（二）怎樣分配胰島素用量
按上述估算的情況，每日三餐前15--30分鍾注射，以早餐前>晚餐前>午餐前的用量來分配。由於早餐前體內拮抗胰島素的激素分泌較多，故胰島素用量宜大一些；而一般短效胰島素作用高峰時間2--4小時，因此午餐前用量最小；多數病人睡前不再用胰島素，至次日晨再用，故晚餐前又比午餐前要用量大。如睡前還用一次，則晚餐前要減少，而睡前的用量更少，以防夜間低血糖。
（三）怎樣調整胰島素劑量
在初始估算用量觀察2--3天後，根據病情、血糖、尿糖來進一步調節用量。
1、據4次尿糖定性調整：只適用於無條件測血糖且腎糖閾正常的病人。依據前3--4天的4次尿糖定性進行調整：早餐前胰島素用量依據午餐前尿糖，午餐前胰島素用量依據晚餐前尿糖，晚餐前胰島素用量依據睡前或次日晨尿（包括當天晨尿）。
2、根據血糖調整：糖尿病人，尤其是I型糖尿病及腎糖閾不正常的病人，應根據三餐前與睡前的血糖值來調整胰島素用量，詳見下表：

血糖值(mmol/l)
mg/dl
餐前胰島素增量
其它處理
<2.8
<50
減少2--3μ
立即進餐2.8--3.9
50--70
減少1--2μ
3.9--7.2
70--130
原劑量
7.2--8.3
130--150
加1μ
8.3--11.1
150--200
加2μ
11.1--13.9
200--250
加3μ
13.9--16.6
250--300
加4--6μ
16.6--19.4
300--350
加8--10
μ
餐前活動量增加減1--2μ或加餐

加餐前活動量減少
加1--2μ

⑦ 如何測量胰島素的摩爾質量

根據公式π=cRT,C=m/(M*V)得π=m/(M*V)RT,M=mRT/(π*V),就可以計算了,這里胰島素是分子,總濃度就是溶液濃度,溶液依數性包括：蒸氣壓下降、沸點升高、凝固點下降和溶液的滲透壓,M=5765.78g/mol

⑧ 重組人胰島素的檢查

有關物質 取該品適量，用0.01mol/L鹽酸溶液製成每1ml中含3.5mg的溶液，作為供試品溶液。照效價測定項下的方法，以0.2mol/L硫酸鹽緩沖液（pH2.3）-乙腈（82:18）為流動相A，乙腈-水（50:50）為流動相B，進行梯度洗脫。
時間 流動相A 流功相B
0分 78% 22%
36分 78% 22%
61分 33% 67%
67分 33% 67%
調節流動相比例使重組人胰島素主峰的保留時間約為25分鍾，系統適用性試驗應符合效價測定項下的規定。取供試品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計算，總有關物質不得過3.0%。高分子蛋白質 取該品適量，用溶解液（取乙二胺四醋酸四鈉300mg，加水250ml溶解後，加0.1mol/L鹽酸溶液3ml，加水至500ml）製成每1ml中含1mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用稀釋液（取乙二胺四醋酸四鈉600mg，加水900ml溶解後，用1mol/L鹽酸溶液調節pH值至8.5，加水至1000ml）稀釋成每1ml中含0.01mg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法（附錄Ⅴ D）測定，以適合分離分子量為5000～60000球狀蛋白的色譜用親水硅膠為填充劑；0.4mol/L碳酸氫銨溶液-乙腈（69:31）為流動相；流速為每分鍾0.5ml；檢測波長為214nm。取人胰島素單體-二聚體對照品，用乙二胺四醋酸溶解製成每1ml中含1mg的溶液，取20μl注入液相色譜儀，以人胰島素單體和二聚體之間的峰谷高與二聚體峰高之比作為分離度，分離度應不大於0.6。取供試品溶液和對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中顯示的所有分子量大於重組人胰島素單體的各峰面積之和，應不得大於對照溶液主峰的峰面積（1.0%）。鋅 精密稱取該品適量（約相當於鋅0.1mg），置10ml量瓶中，用0.01mol/L鹽酸溶液溶解並稀釋至刻度，作為供試品溶液；取供試品溶液與標准鋅溶液（精密稱取硫酸鋅44mg，置100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，每lml相當於10μg的Zn）各1.6ml，分別置10ml量瓶中，各加硼酸-氯化鈉緩沖液（pH9.0)2ml與新制的鋅試劑溶液（取鋅試劑0.13g，加氫氧化鈉試液2ml溶解後，加水使成100ml)1ml，加水稀釋至刻度，搖勻，放置30分鍾，照分光光度法（附錄Ⅳ A），在620nm的波長處分別測定吸收度，計算。含鋅量不得過1.0%。
氯 取該品約10mg，精密稱定，照氮測定法（附錄Ⅶ D 第二法）測定，按乾燥品計算，含氮量應為14.5%～16.5%。
乾燥失重 取該品0.2g，在105℃乾燥至恆重，減失重量不得過10.0%（附錄Ⅷ L）。
熾灼殘渣 取該品約0.4g，依法檢查（附錄Ⅷ N），遺留殘渣不得過2.0%。
無菌 取該品，加適量的滅菌0.01mol/L鹽酸溶液製成每1ml中含2mg的溶液，用薄膜過濾法處理後，依法檢查（附錄Ⅺ H），應符合規定。
細菌內毒素 取該品，依法檢查（附錄Ⅺ E），每1mg重組人胰島素中含內毒素的量應小於10EU。

⑨ 胰島素敏感性的檢測方法

結合常規實驗室檢查，如空腹胰島素和甘油三酯，是一種篩查普通人群胰島素抵抗的簡單方法。與胰島素敏感性緊密相關的變數是空腹胰島素、空腹甘油三酯、天冬酸氨基轉移酶、腰圍和體重指數。

⑩ 空腹時胰島素測定是多少

您好：胰島素釋放試驗同OGTT（試驗餐可用75g葡萄糖,糖尿病人用饅頭餐（100g麵粉）每次抽血糖標本同時抽一份血清測胰島素.
正常結果：
空腹5～20μU/ml（mU/L）；餐後1小時,為空腹5～6倍；餐後2小時為空腹4～5倍；餐後3小時為空腹2.5～3倍.
臨床意義：
①了解胰島β細胞的胰島素儲備功能,有助於Ⅰ型,Ⅱ型的分型.
②Ⅰ型糖尿病胰島素釋放呈低平曲線,各時限胰島素濃度與空腹時無明顯增高.
③Ⅱ型糖尿病胰島素釋放延緩,峰值後延.