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放線菌測量使用什麼方法

發布時間:2022-06-23 10:49:50

❶ 跪求 土壤微生物的測定:塗布平板法 測定細菌、真菌和放線菌的實驗步驟(詳細)

塗布平板法實驗器材 牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基配製 牛肉膏 0.3g
蛋白腖 1g
氯化鈉 0.5g
瓊脂 2g
自來水 100mL
pH 7.0~7.2 滅菌 1.05kg/cm2,22min
配製具體步驟
1.稱量
按培養基配方比例依次准確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶化後倒入燒杯。也可放在稱量紙上,稱量後直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙分離,然後立即取出紙片。蛋白腖很易吸潮,在稱取時動作要迅速。另外,稱葯品時嚴防葯品混雜,一把牛角匙用於一種葯品,或稱取一種葯品後,洗凈、擦乾,再稱取另一葯品,瓶蓋也不要蓋錯。
2.溶化
在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量,用玻棒攪勻,然後,在石棉網上加熱使其溶解。待葯品完全溶解後,補充水分到所需的總體積。如果配製固體培養基,將稱好的瓊脂放入已溶化的葯品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最後補足所失的水分。
3.調pH
在未調pH前,先用精密pH試紙測量培養基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,並隨時用pH試紙測其pH值,直至pH達7.6。反之,則用1mol/L HCl進行調節。注意pH值不要調過頭,以避免回調,否則,將會影響培養基內各離子的濃度。
對於有些要求pH值較精確的微生物,其pH的調節可用酸度計進行(使用方法,可參考有關說明書)。
4.過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以利結果的觀察。一般無特殊要求的情況下,這一步可以省去(本實驗無需過濾)。很多都是不需要過濾的。
5.分裝
按實驗要求,可將配製的培養基分裝入試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖Ⅴ-1。
分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超過管高的1/5,滅菌後製成斜面,如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜,滅菌後垂直待凝。
6.加塞
培養基分裝完畢後,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進入培養基內而造成污染,並保證有良好的通氣性能(棉塞製作方法附本實驗後面)。
7.包紮
加塞後,將全部試管用麻繩捆紮好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道麻繩紮好。用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞後,外包牛皮紙,用麻繩以活結形式紮好,使用時容易解開,同樣用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。
8.滅菌
將上述培養基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃, 20分鍾高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌,則應放入冰箱內暫存。
9.擱置斜面
將滅菌的試管培養基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
10.無菌檢查
將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時,以檢查滅菌是否徹底。

1.活材料:蘇雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)菌劑。
2.培養基:牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基(附錄三、1)
3.器材:90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等。
四、實驗方法
1.樣品稀釋液的制備 准確稱取待測樣品l0g,放入裝有90ml無菌水並放有小玻璃珠的250ml三角瓶中,用手或置搖床上振盪20min,使微生物細胞分散,靜置20-30s,即成10-1稀釋液;再用1ml無菌吸管,吸取10-1稀釋液lml,移入裝有9ml無菌水的試管中,吹吸3次,讓菌液混合均勻,即成10-2稀釋液;再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml,移入裝有9ml無菌水的試管中,也吹吸三次,即成l0-3稀釋液;以此類推,連續稀釋,製成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液(圖22-1)。
圖22-1 平板計數法中樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養
用稀釋平板計數時,待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時,稀釋度應高,反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時,採用10-7、10-8、10-9稀釋度,測定土壤細菌數量時,採用10-4、10-5、10-6稀釋度,測定放線菌數量時,採用l0-3、10-4、10-5稀釋度,測定真菌數量時,採用10-2、10-3、10-4稀釋度。
2.平板接種培養 平板接種培養有混合平板培養法和塗抹平板培養法兩種方法。
(1)混合平板培養法 將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼,每一號碼設置三個重復,用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中,同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中,再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中(由低濃度向高濃度時,吸管可不必更換)。然後在9個平板中分別倒入已融化並冷卻至45—50℃的細菌培養基(圖22-2),輕輕轉動平板,使菌液與培養基混合均勻,冷疑後倒置,適溫培養。至長出菌落後即可計數。
(2)塗抹平板計數法 塗抹平板計數法與混合法基本相同,所不同的是先將培養基熔化後趁熱倒入無菌平板中,待凝固後編號,然後用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上(每個編號設三個重復)。再用無菌刮鏟將菌液在平板上塗抹均勻(圖22-3),每個稀釋度用一個滅菌刮鏟,更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度塗抹時,也可以不更換刮鏟。將塗抹好的平板平放於桌上20—30min,使菌液滲透入培養基內,然後將平板倒轉,保溫培養,至長出菌落後即可計數。

如何對土壤中細菌、放線菌及黴菌數量進行測定,要求設計實驗方案!求指點,謝謝啦!

【實驗內容及步驟】
一、分離
1. 制備土壤懸液及系列稀釋液
稱取土壤1g,放入99mL無菌水的三角瓶中,振盪10min,即為稀釋10-2的土壤懸液。另取裝有無菌試管5支,用記號筆編上10-3、10-4、10-5、10-6 、10-7 。在每隻試管中用無菌吸管加入4.5ml無菌水。取已稀釋成10-2的土壤液,振盪後靜止0.5min,用無菌吸管吸取0.5mL土壤懸液加入10-3的無菌水的試管中,並在試管內輕輕吹吸數次,使之充分混勻,即成10-3土壤稀釋液。同法依次連續稀釋至10-4、10-5、10-6、10-7土壤懸液。
2. 倒平板
將已經配製好的牛肉膏蛋白腖培養基、高氏一號培養基、土豆培養基在電熱爐上熔化。在無菌工作台的酒精燈旁,將培養基倒入培養皿中,加蓋後輕輕搖動使其在培養基上均勻鋪開,平置於桌面上,待其凝固後即為平板,注意保證無菌操作。
3. 塗布法分離各類微生物
將0.2ml菌懸液滴在平板表面中央位置,右手拿無菌塗布器平放在平板表面,將菌懸液先沿一條子線輕輕的來回推動,是之均勻分布,然後改變方向沿另一直線來回推動,平板邊緣可改變方向用塗布器再塗布幾次。
4. 培養(incubation)
28~30C, 24~48hr
5. 觀察記錄結果、記數(counting plates):細菌數量=數出的菌落數/稀釋度。例如,10-5稀釋度時菌落數為125個,則細菌數量=125/10-5=1.25*107個/ml。

這個是大學的實驗,用的方法是稀釋塗平板計數。

❸ 測定土壤中真菌細菌放線菌數量,怎麼測定

實驗假設:土壤微生物對澱粉有分解作用(或土壤微生物對澱粉無分解作用)
(2)放入等量澱粉糊,在A燒杯中加入適量土壤浸出液,在B燒杯中加入適量蒸餾水
(4)碘液 斐林試劑
(5)①.與B 1 、B 2 相比,A 1 無藍色出現,A 2 出現磚紅色沉澱(或A 1 、A 2 的顏色分別與B 1 、B2 相同,A 1 出現藍色,A 2 無磚紅色沉澱)
②.A 1 、A 2 的顏色分別與B 1 、B 2 相同,A 1 出現藍色,A 2 無磚紅色沉澱(或與B 1 、B 2 相比,A 1 無藍色出現,A 2 出現磚紅色沉澱)(說明:其他正確答案也可,但實驗現象分析必須與實驗步驟相一致)

❹ 印片法和插片法用於觀察放線菌各有何優點

印片法:主要用於觀察孢子絲的形態、孢子的排列及其形狀等,方法簡便。
插片法:可觀察到放線菌自然生長狀態下的特徵,而且便於觀察不同生長期的形態。

❺ 放線菌的生長曲線怎麼測定

由於放線菌是絲狀細菌,好氧,在搖床液體培養過程容易形成菌絲球,而呈不均勻分布,所以不能用單細胞細菌的測OD值的方法繪生長曲線。

可直接測細胞乾重。即設多個三角瓶,裝量一樣如250毫升三角瓶裝20毫升,每個時間高三個平行。每隔一小時取樣測放線菌細胞乾重。

可用過濾法也可以用離心法,無菌水清洗再離心。重復兩次。之後於攝氏105度乾燥一小時或以上,重量不再改變為止。然後以細胞乾重為Y軸,培養時間為X軸繪曲線。

可測蛋白含量。用凱氏定氮法檢測菌絲含氮量,折算成蛋白含量。菌絲收集與處理同上。

供參考。

❻ 幾種觀察放線菌方法的優缺點分別是什麼

1、印片法:主要用於觀察孢子絲的形態、孢子的排列及其形狀等,方法簡便。

2、插片法:可觀察到放線菌自然生長狀態下的特徵,而且便於觀察不同生長期的形態。

3、水封片:比較普通的方法,操做簡單.水封片發是插片法的延伸。

4、玻璃紙法:又助於觀察基內菌絲、氣生菌絲和彎曲狀或螺旋狀的孢子絲.觀察棘孢小單孢菌時注意把視野調暗。

❼ 用來測定細菌生長量的直接計數法和間接計數法一般採用什麼具體的方法

顯微鏡直接計數法和稀釋平板計數法是測定微生物數量的常用方 法。 直接計數法中常用的是顯微鏡直接計數法,這種方法是先將待 測樣品製成懸液,然後取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數(圖1- 3-1)。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微 生物總數。直接計數法所需設備簡單,可迅速得到結果,而且在計數 的同時能觀察到所研究微生物的形態特徵,其缺點是難以計數微小的 細菌。這種方法一般適用於純培養懸浮液中各種單細胞菌體的計數。 間接計數法最常用的是稀釋平板計 數法,它是根據微生物的培養特徵而設計 的計數方法。這種方法在樣品中含菌數較 少的情形下,也可以完成計數。 應用稀釋平板計數法計數時,需要 將待測樣品配製成均勻的系列稀釋液,盡 量使樣品中的微生物細胞分散開。再取一 定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板 中,使其均勻分布於平板中的培養基內; 或是將一定量的稀釋液,與溶化後冷卻至 45℃左右的瓊脂培養基混合,傾入無菌培 養皿中,搖勻、靜置待凝。經過培養後, 就由單個微生物生長繁殖形成菌落,這樣 的一個菌落就代表著一個微生物個體。統 計培養基中出現的菌落數,即可推算出檢 測樣品中的活菌數。 FOR EXAMPLE:] 土壤中好氣性細菌的計數 土壤中生活的微生物種類和數量是極其豐富的,這些數量眾多的 微生物對提高土壤肥力有重要作用。因此,測定土壤中的含菌量可以 作為判定土壤肥力的一個重要指標。 材料器具 土壤樣品;牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基(附錄二)、無菌水;培養皿、 移液管、天平、錐形瓶、試管、酒精燈、恆溫培養箱、搖床等。 活動程序 1.制備土壤稀釋液 取土壤表層5~10 cm 處的土樣。准確稱取1 g 土樣,放入盛有 99 mL 無菌水的錐形瓶(250 mL,放有小玻璃珠)中,用手或搖床振盪 20 min,即製成102 倍的稀釋液。 用1 mL無菌移液管,吸取10 2倍稀釋液0.5 mL,移入裝有4.5 mL 無菌水的試管中,配製成103 倍稀釋液。 用同樣的方法可製成稀釋倍數為104、105、106 的系列稀釋菌液 (圖1-3-2)。 圖 移液時,要將移液管插入液面,吹吸3 次,每次吸上的液面要高 於前一次,讓菌液混合均勻並減少稀釋中的誤差。每配一個稀釋度要 換用一支移液管。 2.取樣及倒平板 將無菌培養皿編號,依次為104、105、106,每一號碼設置三個 重復。 用無菌移液管三支,分別吸取稀釋倍數為104、105、106的土壤稀釋 液各0.2 mL,注入到相應編號的培養皿中(每個稀釋倍數各三個培養皿)。 將已滅菌牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基溶化,待冷卻至45~50 ℃左 右,傾入到無菌培養皿中,每皿約15 mL,輕輕轉動培養皿,使土壤 稀釋液與培養基混合均勻。 3.培養 將上述接種好的平板培養基冷卻後,倒置放入28~30 ℃的恆溫 培養箱中培養24~36 h,直至長出菌落為止。 4. 觀察記錄 將實驗中得到的菌落數填入表1-3-1。 結果分析 1.選取具有合適菌落數的稀釋倍數並計數。 在計算結果時,從接種的3 個稀釋度中選擇一個合適稀釋倍數, 統計出菌落數(圖1-3-3)。選擇的原則是: 過 (1) 細菌、放線菌、酵母菌以每個培養皿內有30~300 個菌落為 宜。黴菌以每個培養皿內有10~100 個菌落為宜。 (2) 同一稀釋倍數各個重復的菌落數相差不太懸殊。 2.將統計出的菌落數按下列公式計算,得出每克樣品菌數。 每克土壤樣品菌數= 某稀釋倍數的菌落平均數×稀釋倍數

❽ 放線菌的檢測方法

首先取定量復合肥(一般是1克)然後根據放線菌的含量用無菌水稀釋到一定倍數,滴到顯微鏡專用計數玻片上,計數。在放線菌專用培養基上進行畫線分離培養,形成菌落後,可以知道放線菌所含比例,及大致含量,也可以進行純化培養!但技術性較強!

❾ 有一土壤樣品,要測定每克土壤中細菌、放線菌和真菌的活菌數,用什麼方法最好

在高氏培養基中培養放線菌培養2-3天能夠長出菌落。
取9套無菌平皿,在皿底貼上標簽,註明土壤稀釋液的稀釋度(10-3、10-4、10-5)、組別、姓名、操作日期等。每個稀釋度做三個培養皿。然後在每皿中倒入已溶化並冷至50℃左右的高氏一號培養基15~20ml左右,待冷凝成平板。

❿ 進行菌種質量檢測的常用方法哪些

1、直接觀察。對引進菌種觀察包裝是否合乎要求,棉塞有無松動,試管、玻璃瓶和塑料袋有無破損,棉塞和管、瓶或袋中有無病蟲侵染,菌絲色澤是否正常,有無發生變化。然後在瓶塞邊作深吸氣,聞其是否具備特有的香味。原種和栽培種可取出小塊菌絲體觀察其顏色和均勻度,並用手指捏料塊檢驗含水量是否符合標准。

2、顯微鏡檢驗。若菌絲透明,呈分枝狀、有橫隔、鎖狀聯合明顯,再加上具有不同品種固有的特徵,則可認為是合格菌種。

3、觀察菌絲長速。將供測的菌種接入新配製的試管斜面培養基上,置於最適宜的溫、濕度條件下進行培養,如果菌絲生長迅速、整齊濃密、健壯有力,則表明是優良菌種,否則即是劣質菌種。



優質菌種的標准

食用菌的種類雖然繁多,但從總體上看,每一個優良菌種均有"純、正、壯、潤、香"的共性。其標準是:

1、菌種的純度要高,不能有雜菌感染,也不能有其他類似的菌種。

2、菌絲色澤要純正,多數種類的菌絲應純白、有光澤,原種、栽培種菌絲應連結成塊,無老化變色現象。

3、菌絲要粗壯,分枝多而密,接種到培養基吃料塊,生長旺盛。

4、培養體要濕潤,與試管(瓶)壁緊貼而不幹縮,含水適宜。

5、具有每品種特有的清香味,不可有霉、腐氣味。

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