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常用的dna直接转化方法有

发布时间:2022-06-22 17:26:46

㈠ 除了热激转化法还有什么转化方法

通过转化将载体DNA导入受体菌继而得到含有目的DNA插入的转化菌株是构建DNA文库最为关键的一步.
化学法(化学药物如氯化钙等)转化
氯化钙法转化细胞 细菌处于0℃及CaCl2低渗溶液中时,菌细胞膨胀成球形.转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物.

直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”.具体做法:用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过
运载体分别载人不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制(在遗传学中叫扩增),从中找出含有目的
基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来.但这种方法工作量大,具有一定的盲目性.20世纪80年代以后,随着DNA核苷酸序列分
析技术的发展,人们已经可以通过DNA序列自动测序仪对提取出的基因进行核苷酸序列分析,并且通过一种扩增DNA的新技术(也叫PCR技术),使目的基因
片段在短时间内成百万倍地扩增.上述新技术的出现大大简化了基因工程的操作技术.

㈡ 基因工程中转化的方法有哪些

转化(transformation)是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表现型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。

化学法(化学药物如氯化钙等)转化
氯化钙法转化细胞 细菌处于0℃及CaCl2低渗溶液中时,菌细胞膨胀成球形.转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物。


直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”

具体做法:用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别载人不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制(在遗传学中叫扩增),从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。但这种方法工作量大,具有一定的盲目性。20世纪80年代以后,随着DNA核苷酸序列分析技术的发展,人们已经可以通过DNA序列自动测序仪对提取出的基因进行核苷酸序列分析,并且通过一种扩增DNA的新技术(也叫PCR技术),使目的基因片段在短时间内成百万倍地扩增。上述新技术的出现大大简化了基因工程的操作技术。

㈢ DNA是如何转化的

不知道你问的是细胞的复制 还是基因工程中的DNA转化呢
在基因工程中,DNA是通过运载体就如受体细胞的,再在受体细胞中复制的

㈣ 什么是DNA直接转化系统

DNA直接转化系统不依赖致瘤土壤杆菌载体或其他生物载体,将经处理的DNA通过物理的和化学的方法导入植物细胞,而实现遗传转化。

1.化学法

化学诱导DNA直接转化是以植物原生质体为受体,借助于特定的化学物质诱导DNA直接进入植物细胞,主要有下述两种方法。

(1)PEG介导法:PEG(polyethyleneglycol)即聚乙二醇,可在细胞膜之间或在DNA与膜之间形成分子桥,致使相互接触和粘连,诱导原生质体的内吞作用,摄取外源基因DNA。PEG法由Davey等(1980)建立,该法不一定需要克隆的基因和特定的载体,能实现控制数量性状的基因和在缺乏受体筛选标记条件下的遗传转化,但必须以裸露的原生质体为受体,某些植物建立原生质体再生系统较为困难,使PEG法的应用受到限制。

(2)脂质体法:脂质体(liposome)是由人工构建的磷脂双分子层组成的膜状结构。用脂质体包裹DNA成球状,通过原生质体的吞噬或融合作用而将它转运到原生质体内部。包裹在脂质体内的DNA可免受DNA酶的降解。脂质体法可直接转化外源DNA和RNA,亦可用于基因的瞬时表达检测。2.物理法

物理法以植物原生质体、细胞、组织或器官为受体,以一些物理因素作用于细胞膜而直接导入外源目的基因DNA。

(1)基因枪法:又称微弹轰击法(particlebombardment),已有广泛应用。将外源DNA包裹在微小的金粒或钨粒表面,用基因枪(genegun)高速射入受体细胞或植物组织,微粒上的DNA进入细胞后,整合到染色体上得到表达,转化的受体几乎包括了所有具潜在分生能力的细胞与组织。基因枪法的转化率一般为10-3~10-2。该法可将外源基因导入植物细胞的细胞器,并可得到稳定表达。利用基因枪法能否成功,关键在于能否从转化细胞再生出可育的植株。基因枪还特别适于细胞器(叶绿体、线粒体)的基因转化,以及用于研究组织特异性启动子。基因枪法成本较高,操作比较复杂,难以插入外源DNA大片段,且整合的外源基因通常是多拷贝的,这可能导致植物自身某些基因的非正常表达,还容易发生基因沉默现象。

(2)电激法:利用高压电脉冲作用在原生质体上“电激穿孔”,形成可逆的瞬间通道,摄入外源目的基因。这一方法已成功地应用于多种单子叶植物和双子叶植物。

(3)激光微束法:将激光引入光学显微镜聚焦成微米级的微束照射细胞后,利用其热损伤效应,在细胞壁上产生可恢复的小孔,直径只有0.5~0.7μm,使加入到细胞培养基里的外源基因得以进入植物细胞。该法操作简便、受体类型广、无作物限制,但转化率低,一般仅为10-4~10-3。

(4)超声波法:利用低声强脉冲超声波的生物学效应,击穿细胞膜造成通道,使外源DNA进入细胞。该法有操作简便、设备便宜、不受作物种类的限制等优点,但尚需进一步完善。

(5)显微注射法:利用显微注射仪将外源基因直接注入到已固定的植物细胞核或细胞质中,实现基因转移。受体最初仅用原生质体,现可用于带壁的悬浮细胞、花粉粒、卵细胞、子房等。

㈤ 基因工程中转化的方法有哪些什么是载体转化法

通过转化将载体DNA导入受体菌继而得到含有目的DNA插入的转化菌株是构建DNA文库最为关键的一步。
化学法(化学药物如氯化钙等)转化
氯化钙法转化细胞 细菌处于0℃及CaCl2低渗溶液中时,菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物。

直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”。具体做法:用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别载人不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制(在遗传学中叫扩增),从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。但这种方法工作量大,具有一定的盲目性。20世纪80年代以后,随着DNA核苷酸序列分析技术的发展,人们已经可以通过DNA序列自动测序仪对提取出的基因进行核苷酸序列分析,并且通过一种扩增DNA的新技术(也叫PCR技术),使目的基因片段在短时间内成百万倍地扩增。上述新技术的出现大大简化了基因工程的操作技术。

㈥ (转基因)基因传递的方法有几种

几种常用的植物转基因方法

遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养、再生植株可分成两大类,第一类需要通过组织培养再生植株,常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法;另一类方法不需要通过组织培养,目前比较成熟的主要有花粉管通道法。

1.农杆菌介导转化法

农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中。因此,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合,然后通过细胞和组织培养技术,再生出转基因植株。

农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,近年来,农杆菌介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用。

2.基因枪介导转化法

利用火药爆炸或高压气体加速(这一加速设备被称为基因枪),将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中,然后通过细胞和组织培养技术,再生出植株,选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与农杆菌转化相比,基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制。而且其载体质粒的构建也相对简单,因此也是目前转基因研究中应用较为广泛的一种方法。

3.花粉管通道法

在授粉后向子房注射合目的基因的DNA溶液,利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并进一步地被整合到受体细胞的基因组中,随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出,我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株,技术简单,不需要装备精良的实验室,常规育种工作者易于掌握。

常用的动物转基因技术

1.显微注射法

在显微镜下,用一根极细的玻璃针(直径1-2微米)直接将DNA注射到胚胎的细胞核内,再把注射过DNA的胚胎移植到动物体内,使之发育成正常的幼仔。用这种方法生产的动物约有十分之一是整合外源基因的转基因动物。

2.体细胞核移植方法

先在体外培养的体细胞中进行基因导入,筛选获得带转基因的细胞。然后,将带转基因体细胞移植到去掉细胞核的卵细胞中,生产重构胚胎。重构胚胎经移植到母体中,产生的仔畜百分之百是转基因动物。

希望我的回答帮得到您,来自网络知道团队【周小周】,满意的话烦请采纳~O(∩_∩)O~

㈦ 转基因技术的例子

提起转基因技术,人们最先想到的往往是通过转基因育种技术得到的各种转基因食品。其实日常生活中胰岛素、乙肝疫苗、洗衣粉中的蛋白酶等,都是转基因技术的产物。


转基因技术应用到如今,虽然只有短短几十年,但已经广泛应用于医药、工业、农业、环保、能源等各个领域。

参考来源:转基因技术就在我们身边

㈧ dna转化有哪些方式合有何优点

DNA转化的范围较广,但以植物细胞中的转化为主,现将其方式及优点阐述如下:

1、农杆菌介导基因转化:

2、基因枪转化:

3、花粉管通道法:

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