人参皂苷f11检测方法

‘壹’ 今幸人参皂苷是管什么的

人参皂苷都具有相似的基本结构，都含有由30个碳原子排列成四个环的甾烷类固醇核。他们依糖苷基架构的不同而被分为两组：达玛烷型和齐墩果烷型。
达玛烷类型包括两类：人参二醇型 - A型，苷原为20（S） - 原人参二醇。包含了最多的人参皂苷，如人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2及糖苷基PD；人参三醇型 - B型，苷原为20（S） - 原人参三醇。包含了人参皂苷Re、Rg1、Rg2、Rh1及糖苷基PT。
齐墩果烷型：齐墩果酸型 - C型，苷原为齐墩果酸。
总皂苷不溶血，A型抗溶血而B型、C型溶血。
皂苷成分
Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复。人体吸收率在16%，最高含量在16.2%。
Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。
Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。
Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。
Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。
Rg5：抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长
Rb1：西洋参(花旗参)的含量最多，具影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用。
Rb2：DNA, RNA 的合成促进作用、脑中枢调节具有抑制中枢神经，降低细胞内钙，抗氧化，清除体内自由基和改善心肌缺血再灌注损伤等作用。
Rc：人参皂甙-Rc是一种人参中的固醇类分子。具有抑制癌细胞的功能。可增加精虫的活动力。
Rb3：可增强心肌功能，保护人体自身免疫系统。可以用于治疗各种不同原因引起的心肌收缩性衰竭。
Rh：具有抑制中枢神经、催眠作用，镇痛、安神、解热、促进血清蛋白质合成作用。
Rh1：具有促进肝细胞增殖和促进DNA合成的作用，可用于治疗和预防肝炎、肝硬化。
Ro：具有消炎、解毒、抗血栓作用，抑制酸系血小板凝结以及抗肝炎作用活化巨噬细胞作用。
Rh3：人参皂苷Rh3对人结肠癌细胞SW480增殖与凋亡的影响.
方法： 体外培养的人结肠癌细胞SW480分别用无血清培养液稀释的终浓度为15、30、60、120和240 μg/ml的人参皂苷Rh3作用24、48及72 h,应用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖;采用终浓度为15 μg/ml的人参皂甙Rh3作用于SW480细胞24及72 h,应用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,采用终浓度为15、20 μg/ml的人参皂甙Rh3作用于SW480细胞24及72 h;应用丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法计算细胞凋亡率和坏死率. [1]
结果： 15 μg/ml人参皂苷Rh3作用48 h即可明显抑制SW480细胞增殖,其作用随剂量增加和作用时间延长而增强,30 μg/ml人参皂苷Rh3作用72 h抑制率超过80%;15 μg/ml人参皂苷Rh3作用24 h部分细胞凋亡,胞浆呈棕色,作用72 h凋亡细胞增多;15 μg/ml人参皂苷Rh3作用24 h细胞凋亡率为25.5%,20 μg/ml人参皂苷Rh3作用24 h细胞凋亡率为31%,未见细胞坏死,15 μg/ml人参皂苷Rh3作用72 h细胞凋亡率为55%、坏死率为7%,20 μg/ml人参皂苷Rh3作用72 h细胞凋亡率为67.5%、坏死率为7%.结论 人参皂苷Rh3能抑制人结肠癌细胞SW480增殖,诱导其凋亡,作用呈剂量依赖性和时间依赖性. [1]
人参 [2] 作为滋补佳品，其成分极其复杂，人参中的核心成分——人参皂苷和以及其他营养成分。除了人参皂苷外，其他营养成分都是癌细胞非常乐意吸收的绝佳营养物质，因此我们不建议癌症患者直接服用人参。
众所周知，而且很难治愈。癌细胞没有扩散的时候，我们可以动手术切除，但它们却依然潜伏在我们身体中，如果不适当养护身体，还是有卷土重来的可能。因此，抗击癌症首要的一点就是要抑制癌细胞的生长繁殖，其次就是提高我们身体的免疫力，让正常细胞能在对抗癌细胞的时候处于优势。
癌症患者为什么不适宜吃人参？还需要了解一下癌细胞的特性。癌细胞其实是机体中一类生命力特别旺盛的细胞，它们对营养物质的吸收比正常细胞要快得多，多得多。它们抢走了正常细胞代谢的能量，所以得了癌症的病人大都会消瘦，身体虚弱。此时如果进补，营养物质会让癌细胞生长繁殖得更快。所以，很多专家都说给癌症患者进补，如果不能建立在遏制癌细胞增殖的基础上，就是在给癌细胞进补，补得越多，害处越大。

抗肿瘤成分
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人参皂苷Rh2预防和抗肿瘤
人参皂苷 Rh2单体对癌细胞的生长有抑制作用,能诱导肿瘤细胞凋亡，逆转肿瘤细胞异常分化，抗肿瘤转移，与化疗药物联用能起到增效减毒的作用。 除去抗肿瘤作用外，人参皂苷具有提高机体免疫力、抗菌、改善心脑血管供血不足、调节中枢神经系统、抗疲劳、延缓衰老等作用。
人参皂苷Rh1预防和抗肿瘤
人参皂苷单体Rg3预防和抗肿瘤
能抑制肿瘤细胞的 黏附，侵润，阻止癌细胞新生血管的形成，从而抑制肿瘤生长，扩散和转移，具有显着的抗癌功能。可明显改善放化疗及手术后引起的白血球下降，使血液流变学趋于正常，该成分有很强的预防和抗癌作用，可以提高人体机能和免疫功能，配合手术和放化疗效果显着。
人参皂苷单体Rg5预防和抗肿瘤
Rg5能诱导多种肿瘤细胞凋亡，从细黑参中提取的Rg5已被验证在人乳腺细胞，Rg5也能诱导多种宫颈癌细胞凋亡和DNA损伤，并且通过一系列体外实验证实人参皂苷Rg5对食道癌细胞具有抑制增殖作用。 [3]
人参皂苷Rh3预防和抗肿瘤
人参皂苷Rh3能抑制人结肠癌细胞SW480增殖,诱导其凋亡,作用呈剂量依赖性和时间依赖性。 [1]
人参皂苷人参皂苷aPPD预防和抗肿瘤
20(S)-原人参二醇(aPPD)是人参皂苷经过胃肠道菌群的去糖代谢活化后产生的具有药物疗效的活性成分,具有广谱的抗肿瘤作用。近年来,英属哥伦比亚大学的William Jia课题组对aPPD体内外抗肿瘤活性进行了系列研究,发现其具有双重药理作用,一方面可直接杀伤肿瘤细胞,促其凋亡；另一方面可保护神经元免受细胞毒物质的侵害。

‘贰’ 人参与西洋参的参苗在外观上如何区分开对于从未接触过人参种植的人有什么好的方法来区分开

（1）西洋参越冬芽呈鹦哥嘴状，人参的越冬芽是鸽子嘴状。
（2）叶形上同龄植株，西洋参叶片较宽短（多为倒卵形），叶色较深，人参叶片较狭长（披针形），叶色较浅。
（3）根形上西洋参主根圆锥形，表皮环纹少而粗糙，人参主根呈圆柱形，表皮环纹细密。西洋参根粗短者较多，人参根长形者较多。
（4）西洋参花轴短，花轴与茎之比为1∶2，人参花轴长，花轴与茎之比为1∶1。
（5）生长发育上，西洋参比人参稍快，西洋参多数二年生就可开花结果，人参多数三年生才开花结果，一般情况下，西洋参比人参早收获一年（人参和西洋参收获期分别为5～6年和4～5年）。但在一年中，西洋参比人参出苗晚10～15天，开花也晚10～15天，果实成熟晚20～25天。

（6）对环境条件要求基本相同，但西洋参比人参耐较高温，因此西洋参适宜种植的地区比人参要广些。西洋参要求温度比人参高，这也是在一年内西洋参出苗、开花、果熟比人参晚的原因，因春天气温逐渐升高，季节往后才能达到西洋参对温度的要求，辽宁和吉林而去的参全部使用的沃叶水溶肥，卖价高。

在北京农田栽培西洋参和人参，研究它们对土壤湿度反应的结果表明，在土壤相对含水率80%以内，两种作物的产量都随土壤湿度的增加而提高，当土壤湿度相对含水率达86.8%时，对人参已表现不利，而对西洋参却无不利影响，说明西洋参比人参耐湿性强。
（7）它们都是滋补强壮药，但人参以热补为主，年轻人服后易上火，最适合于年老体弱的人。西洋参以凉补为主，服后不易上火，春夏秋冬，老幼皆宜。
（8）从化学成分上看，人参特有的成分为人参皂苷Rf，西洋参的特有成分为人参皂苷F11，此两种特有成分在没有植株只有药材的条件下，为能准确无误地鉴别人参和西洋参提供了科学依据

‘叁’ 人参总皂苷的特征图谱

照高效液相色谱法( 附录 Ⅵ D) 测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长 25cm ，内径 4.6mm ，粒径 5μm ，载碳量 11% ）；以乙腈为流动相 A ，以 0.1% 磷酸溶液为流动相 B ，以下表进行梯度洗脱；柱温为 30 ℃ ；检测波长为 203nm ；流速为每分钟 1.3ml 。理论板数按人参皂苷 Re 峰计算应不低于 6000 ，按人参皂苷 Rd 峰计算应不低于 200000 。时间（分钟）流动相 A （%）流动相 B （%） 0 ～ 30 19 81 30 ～ 35 19→24 81→76 35 ～ 60 24→40 76→60 参照物溶液的制备分别取人参皂苷 Re 和人参皂苷 Rd 对照品适量，加甲醇制成每 1ml 各含 0.5mg 的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品适量，加甲醇制成每 1ml 含 2mg 的溶液，用 0.45μm 滤膜滤过，即得。测定法精密吸取供试品溶液及参照物溶液各 10μl ，分别注入液相色谱仪，记录 60 分钟的色谱图，即得。供试品特征图谱中应有 7 个特征峰，与参照物峰相应的峰为 S 1 和 S 2 峰，计算各特征峰的相对保留时间比值，应符合以下规定：峰 1 和峰 2 （ S 1 ）为一组，相对保留时间比值为 0.91 （峰 1 ）、 1.00 （峰 2 ）；峰 3 ，峰 4 ，峰 5 ，峰 6 和峰 7 （ S 2 ）为另一组，相对保留时间比值为 0.84 （峰 3 ）、 0.91 （峰 4 ）、 0.93 （峰 5 ）、 0.95 （峰 6 ）、 1.00 （峰 7 ），其相对偏差不得过 5% 。
da Pk # 对照特征图谱峰 1 ：人参皂苷 Rg 1 ，峰 2 （ S 1 ）：人参皂苷 Re ，峰 3 ：人参皂苷 Rf ，峰 4 ：人参皂苷 Rb 1 ，峰 5 ：人参皂苷 Rc ，峰 6 ：人参皂苷 Rb 2 ，峰 7 （ S 2 ）：人参皂苷 Rd

‘肆’ 皂苷的检测方法

本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定

本方法人参皂苷Re的低检出量为2μg/mL

一、方法提要

样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。

二、仪器

1.722分光光度计。

2.PT—大孔吸附树脂柱(河北省津杨滤材厂)。

3.超声波振荡器。

三、试剂

1.甲醇(分析纯)

2.乙醇(分析纯)

3.人参皂苷Re标准品(中国药品生物制品检定所)

4.5%香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL

5.高氯酸(分析纯)

6.冰乙酸(分析纯)

7.人参皂苷Re标准溶液：称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg

8.重蒸水

四、测定步骤

1.样品处理：

(1)固体样品

称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离

(2)液体样品

含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品(如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL)直接进行柱分离

2.柱层析

以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用

‘伍’ 人参茎叶总皂苷的含量测定

人参茎叶总皂苷照高效液相色谱法（附录 Ⅵ D ）测定。对照品溶液的制备精密称取人参皂苷 Re 对照品 5mg ，置 5ml 量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备精密称取本品约 50mg ，置 25ml 量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。标准曲线的制备精密吸取对照品溶液 20µl 、 40µl 、 80µl 、 120µl 、 160µl 、 200µl ，分别置于具塞试管中，低温挥去溶剂，加入 1% 香草醛高氯酸试液 0.5ml ，置 60 ℃ 恒温水浴上充分混匀后加热 15 分钟，立即用冰水冷却 2 分钟，加入 77% 硫酸溶液 5ml ，摇匀，以相应试剂作空白，照紫外 - 可见分光光度法（附录 Ⅴ A ），在 540nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法精密吸取供试品溶液 50µl ，照标准曲线制备项下的方法，自“置于具塞试管中”起操作，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液的含量，计算结果乘以 0.84 ，即得。本品按干燥品计算，含人参总皂苷以人参皂苷 Re （ C 48 H 82 O 18 ）计，应为 75% ～ 95% 。人参皂苷 Rg 1 、 Re 、 Rd 照高效液相色谱法（附录 Ⅵ D ）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A ，以 0.1% 磷酸溶液为流动相 B ，以下表进行梯度洗脱；检测波长为 203nm 。理论板数按人参皂苷 Re 峰计算应不低于 3000 。时间（分钟）流动相 A （％）流动相 B （％） 0 ～ 30 19 81 30 ～ 35 19→24 81→76 35 ～ 60 24→40 76→60 对照品溶液的制备取人参皂苷 Rg 1 对照品、人参皂苷 Re 对照品和人参皂苷 Rd 对照品适量，精密称定，加甲醇制成 1ml 中含人参皂苷 Rg 1 0.30mg ，人参皂苷 Re0.50mg 和人参皂苷 Rd 0.20mg 的混合溶液。供试品溶液的制备精密称取本品约 20mg ，置 10ml 量瓶中，加甲醇超声（功率 250W ，频率 50kHz ）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取上述对照品溶液 20μl 与供试品溶液 5 ～ 20μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含人参皂苷 Rg 1 （ C 42 H 72 O 14 ），人参皂苷 Re （ C 48 H 82 O 18 ），人参皂苷 Rd （ C 48 H 82 O 18 ）的总量应为 30% ～ 45% 。
【 贮藏 】 密闭，置干燥处。
【 制剂 】 口服。

‘陆’ 三七 人参皂苷Rg1 人参皂苷Rb1 三七皂苷R1 液相测定含量的保留时间是多少

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B：
0~30分钟 A 19 B 81
30~35分钟 A 19-24 B 81-76
35~60分钟 A24-40 B 76-60
柱温30，流速为每分钟1.3ml，检测波长203nm
人参皂苷Rg1在25-28分钟之间，Rb1在52分钟左右，三七皂苷R1在10-14分钟左右。具体时间数据记不清了，这个是大致的。不好意思。