hbeag是用什么方法检测

Ⅰ 检测乙肝表面抗原的方法都有什么具体一点点

去医院化验。有专门的一项叫乙肝抗体
然后抗原抗体都查了
仅仅抗体阳性不能确诊乙肝
如果抗原抗体都阳的话才行

Ⅱ 如何检测体内是否存在抗体拜托了各位 谢谢

1. HBsAg (乙肝表面抗原) 原理：采用ELISA 双抗体夹心法。双抗体夹心法用于检测相对分子质量较大的蛋白质抗原。先将已知特异性抗体包被于固相载体上，加待测样本，若 其中有相应的抗原，则抗原和抗体特异性结合洗板后加入酶标记特异性抗体，使在固相上形成包被抗原抗体复合物洗板:加酶底物及色原呈色。双抗原夹心法则是利用包被抗原和标记抗原检测样本中的特异性抗体。抗原或抗 体水平与所测吸光度(A) 值呈正相关。 将纯化的抗HBs包被固相载体，加入待测样品，括其中含有HBsAg ，则与载体上的抗HBs 结合，再加入辣根过氧化物酶( HRP) 标记的抗HBs 抗体，加酶底物/色原显色。显色程度与 HBsAg 含量成正比。 2.HBsAb （乙肝表面抗体） 原理：采用ELISA 双抗原夹心法。反应板上包被纯化HBsAg ，待测样品中抗HBs与之反应，再加HRP-HBsAg 形成夹心，加酶底物/色原悔液显色。 3.HBeAg 和HbeAb 原理：检测HBeAg 和抗HBe 分别用ELISA 双抗体夹心法和Elisa竞争法。 4.HbcAb 原理：Elisa竞争法。用于检测待检样本中未知抗原或抗体。测抗原时用已知抗体包被固相载体，然后同步加入含有待测抗原的样本和酶标记抗原，使待测抗原与酶标记抗原竞争结合在固相载体上的抗体；洗板加酶底物及色原!让包。待iYlIJ 悔液抗原量越多，则被结合的酶标记抗原量越少，呈色越浅。呈色深浅与待测抗原的量成反比。测未知抗体时用已知抗原包被固相载体，同步加入含有待测抗体的标本和酶标记特异抗体，二者竞争结合固相载体t 的抗原.待测抗体量越多，酶标记抗体与固相抗原结合的最就越少，呈色就越浅。待测抗体的水平与呈色程度成反比。

Ⅲ 临床执业医师备考知识：肝炎病毒

第一节 甲型肝炎病毒

一、生物学性状

甲型肝炎病毒(HAV)属于小RNA病毒科，嗜肝RNA病毒。直径约为27nm，呈20面体立体对称，无包膜。本病毒比肠道病毒更耐热，60℃l小时不被灭活。病毒核酸为单正股RNA。HAV只有一个血清型。黑猩猩和狨猴对HAV敏感。HAV可在培养细胞上进行培养，但增殖非常缓慢，不引起细胞裂解，且病毒释放亦十分缓慢。

二、致病性与免疫性

(一)传染源与传播途径，HAV主要通过粪一口途径传播，传染源多为患者。甲型肝炎的潜伏期为l5—50天，病毒常在患者转氨酶升高前5—6天就存在于患者的血液和粪便中。发病后2周开始，粪便中不再排出病毒。HAV随患者粪便排出体外，通过污染水源、食物、海产品、食具等传播而造成散发流行或大流行。

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(二)致病机制与免疫HAV经口侵入人体，但如何经消化道后最终在肝细胞中增殖，则尚未阐明。由于病毒在组织培养细胞中增殖缓慢并不直接造成细胞损害，推测致病机制除病毒的直接作用外，机体的免疫应答可能在引起肝组织损害上起一定作用。

在甲型肝炎的显性感染或隐性感染中，机体都可产生抗一HAV的IgM和IgG抗体。前者在急性期和恢复期早期出现，后者在恢复期后期出现，并可维持多年，对病毒的再感染有免疫力。甲型肝炎患者预后良好。不会转变为慢性，亦无病毒携带者。

三、微生物学检查和防治原则

一般不进行病原学检查，但为与其他型肝炎鉴别，可检测抗HAV IgM。流行病学调查特别是检测群体中抗HAV阳性率，了解人群的免疫力，以预测发生甲型肝炎的可能性，则需检测抗HAVIgG。

甲型肝炎的预防有灭活疫苗和减毒活疫苗。

第二节 乙型肝炎病毒

一、生物学性状

(一)形态与结构乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒科。完整的HBV颗粒首先由Dane在乙型肝炎病毒感染者的血清中发现，故称为Dane颗粒。Dane颗粒呈球形，直径为42nm，具有双层衣壳。病毒的外衣壳，相当于一般病毒的包膜，HBV的表面抗原(HBsAg)即镶嵌于包膜的脂质双层中，内部为一电子密度较大的核心结构，呈20面体立体对称，直径约为27nm，其表面即为病毒的内衣壳，内衣壳蛋白也具有抗原性，为HBV的核心抗原(HBcAg)。其在酶或去垢剂作用后，暴露出具有不同抗原性的e抗原(HBeAg)。

HBeAg在体内可被分泌而存在于血清中，而HBcAg则仅存在于感染的'肝细胞核内，一般很少存在于血循环中。HBV核心结构的内部，含有病毒的DNA和DNA多聚酶。DNA为不完全环状双股，其中有一段为单股，单股区的长短在各病毒体可不等，但均不超过全长基因的一半。病毒DNA的长股为负股。而较短的一股为正股，病毒体具有特殊的DNA多聚酶，既有能以RNA为模板转录DNA的逆转录酶功能，又有合成DNA的功能。

(二)抗原组成

1.表面抗原(HBsAg) 在患者血清中HBsAg可以三种不同的形式存在：

(1)小球形颗粒：直径约22nm，是最多见的形式，主要由HBsAg组成，一般很少有heSl或PreS2抗原。

(2)管形颗粒：直径同小球形颗粒，长短不等，实际是一串聚合的小球型颗粒。

(3)Dane颗粒的表面，为外衣壳的成分。 HBsAg有四个基本亚型：adr，adw，ayr，ayw，各亚型均有共同抗原决定簇a，此外还有二组互相排斥的亚型抗原决定簇(d/y和w/r)。HBsAg亚型的分布，有明显的地区差异并与种族有关。我国汉族以adr多见，少数民族多为ayw。

HBsAg大量存在于感染者血中，是检查受HBV感染的主要标志。具有抗原性，可引起机体产生特异性有保护性的抗一HBs抗体，是制备疫苗的最主要成分。

2.核心抗原(HBcAg) 存在于Dane颗粒核心部位的表面，为内衣壳成分。因其外表为HBsAg所覆盖，故不易在血循环中检测到。 HBcAg抗原性强，能刺激机体产生抗HBc抗体。

HBcAg可在感染的肝细胞表面表达，是杀伤性T细胞识别并清除HBV感染细胞的靶抗原之一。 抗一HBc IsG在血清中持续时间较长，而抗HBc—IgM则常提示HBV处于复制状态。

3.e抗原(HBeAg) 是由PreC及C基因编码，整体转录及翻译后成为e抗原(如仅由C基因转录及翻译则为HBcAg)。为可溶性蛋白质，可自感染肝细胞游离存在于血清中。因HBeAg的消长与病毒体及DNA多聚酶的消长基本一致，故HBeAg可作为体内有HBV复制及血清具有强感染性的一个标志。

HBeAg可刺激机体产生抗一HBe抗体，此抗体对HBV感染有一定的保护作用。

(三)动物模型与细胞培养 黑猩猩是对HBV最敏感的动物。HBV尚不能在细胞培养中分离及培养，目前采用的细胞培养系统是病毒DNA转染系统。

(四)抵抗力HBV对外界的抵抗力较强，不被70%乙醇灭活。高压灭菌法或l00℃加热l0分钟等可灭活HBV。

二、致病性与免疫性

(一)传染源HBV主要的传染源是患者和无症状的HBsAg携带者。

(二)传播途径

1。通过血液、血制品等传播人对HBV极易感。极小量污染血液进入人体后，即可致感染。输血、注射、外科及牙科手术、针刺，共用剃刀或牙刷，皮肤粘膜微小损伤，性行为等均可传播。

2.母婴传播主要是围生期感染，即分娩时婴儿经产道通过婴儿的微小伤口受母体的病毒感染所致。哺乳也被认为是传播HBV的途径，婴儿在母体子宫内被感染，表现为出生时已为HBsAg阳性。

(三)致病性与免疫性乙型肝炎的临床表现呈多样性，有无症状带毒者、急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎等。病毒在肝细胞中增殖，为非杀细胞型病毒，对肝细胞无明显损害作用，病毒感染引起的病理损害是致病的主要因素。

1.病毒致机体免疫应答低下HBV感染后诱生的干扰素低下，使靶细胞HLA—I类抗原表达低下导致细胞毒性T细胞(CTL)作用减弱。幼龄感染HBV后，因免疫系统发育尚未成熟，对病毒未能作为“非己”而产生免疫应答，对病毒形成免疫耐受，从而不出现或仅出现低度的抗病毒体液与细胞免疫。病毒亦可长期存在于体内。

2.病毒发生变异HBV的Pre C基因变异使不能翻译出HBeAg，病毒可逃逸机体原已形成的对HBeAg的抗体与细胞免疫。

3.细胞介导的免疫病理损害HBV侵入肝细胞内增殖可使感染细胞膜表面表达HB-sAg，HBeAg或HBeAg，能为机体免疫系统所识别，引起一系列的免疫应答。病毒抗原致敏的T细胞对胞膜表面带有病毒抗原的靶细胞可进行杀伤以清除病毒，同时也造成肝细胞的损伤。有人认为细胞免疫的应答与临床过程的轻重及转归有密切关系。

如病毒感染波及的肝细胞数量不多，免疫应答处于正常范围，特异性CTL可摧毁病毒感染的细胞，损伤细胞释放的HBV则可被抗体中和而被清除。临床表现为急性肝炎，并可以恢复而痊愈。相反，若受病毒感染的细胞为数众多，机体的细胞免疫应答超过正常范围，迅速引起大量细胞坏死，肝功能衰竭，可表现为重症肝炎。如机体免疫功能低下，病毒在感染细胞内复制，受到功能低下的CTL的部分杀伤作用，病毒可不断释放，又无有效的抗体中和病毒，病毒则持续存在并再感染其他肝细胞，构成慢性肝炎。慢性肝炎造成的肝病变又可促进成纤维细胞的增生，引起肝硬化。

4.免疫复合物引起的病理损伤在部分乙型肝炎患者中，可检出HBsAg及抗一HBs的免疫复合物。免疫复合物可沉积于肾小球基底膜，关节滑液囊，激活补体，导致Ⅲ型变态反应。近年还发现由HBeAg与免疫球蛋白组成的免疫复合物引起膜性肾小球肾炎。免疫复合物大量沉积于肝内，可使肝毛细管栓塞，并可使肿瘤坏死因子(TNF)增多导致急性肝坏死，临床表现为重症肝炎。

5.自身免疫反应所引起的病理损害HBV感染肝细胞后，还会引起肝细胞表面自身抗原发生变化，暴露出肝特异性脂蛋白抗原(LSP)，诱导机体产生对肝细胞成分的自身免疫反应。

此外，HBV可能与原发性肝细胞癌有关。

三、微生物学检查和防治原则

目前主要用血清学方法检测HBsAg，抗一HBs，HBeAg，抗一HBe及抗一HBc。

(一)乙型肝炎抗原抗体检测结果的分析见表5—28一l。

HBsAg阳性见于急性肝炎，慢性肝炎或无症状携带者。急性肝炎如恢复后，一般在1—4个月HBsAg即消失。若持续6个月以上则认为已向慢性肝炎转化。无症状HBsAg携带者是指肝功能正常者，携带者可长期为HBsAg阳性。

抗一HBs的出现常显示患者已恢复或痊愈。抗HBs——保护性抗体

HBeAg阳性提示体内HBV在复制，如转为阴性，表示病毒停止复制。抗一HBe阳性，表示机体已获得一定的免疫力。

抗一HBc IgM阳性，提示仍有病毒复制。

(二)血清HBV DNA检测

(三)预防除加强对供血员筛选外，注射乙型肝炎疫苗是最有效的预防乙肝的方法，主要用于新生儿，可有效阻断母婴传播。此外还可用于高危人群，如血液透析和肾移植单位以及传染病院等单位人员。第一代疫苗是人血浆来源的HBsAg乙肝疫苗，第二代为基因工程HBsAg疫苗。用含有高效价抗一HBs制备的人免疫球蛋白(HBIg)可用于紧急预防，一般在一周内注射有预防效果。亦可与乙肝疫苗联合应用，以获得被动一主动免疫效应。

第三节 丙型肝炎病毒

丙型肝炎病毒(HCV)过去被称为肠道外传播的非甲非乙型肝炎病毒。1991年被归属于黄病毒科。

一、生物学性状

HCV大小为30—60nm，有包膜。HCV基因组为一单正链RNA，长度约9.5kb，由9个基因区组成，自5’端开始，依次为5’端非编码区，核心衣壳蛋白区(c区)，包膜蛋白.l区(E1)，包膜蛋白一2区/非结构蛋白一l区(E2/NSl)，NS2区，NS3区，Ns4区，NS5区和3’端非编码区。5’端非编码区核苷酸保守性强，在各株病毒问很少变异，可用于诊断。

其中E1，E2/NSl区易发生变异，致包膜蛋白的抗原性变异而不被原有的抗包膜抗体所识别，病毒得以持续存在。这可能是HCV引起的丙型肝炎易发展为慢性肝炎的原因之一。

根据世界各地分离的HCV毒株，可将HCV分为6种基因型，我国以Ⅱ型为主。目前认为1型HCV复制产生的病毒量多，较难治疗。

NS3，NS4及NS5区基因可分别表达蛋白质，其中NS4表达的蛋白(C100—3)和NS3表达的C33c可作为抗原用于检测患者血清。

二、致病性和免疫性

经输血、血制品或污染注射器而传播。大多数丙型肝炎患者不出现症状，发病时已成慢性过程。慢性肝炎的表现亦轻重不一，约20%可发展为肝硬化。并可导致肝癌，我国肝癌患者中约10%有抗一HCV抗体。

丙型肝炎患者恢复后，仅有低度免疫力，且免疫力不牢固。感染HCV后，机体可依次出现抗一C33c，抗一C及抗一Cl00—3，可用于诊断;还可用套式RT—PCR检测HCV RNA。

第四节 丁型肝炎病毒

丁型肝炎病毒(HDV)为球形，直径35—37nm，核心为单负链RNA基因组，仅有l.7kb长，是已知动物病毒中最小的基因组。病毒不能独立进行复制，必须随HBV或其他嗜肝DNA病毒共同增殖，获得包膜。HDV RNA可编码抗原HDA9，可刺激机体产生抗体。

HDV感染常可导致乙肝病毒感染者的症状加重与恶化，故在重症肝炎时应注意是否有HDV的重叠感染。此外还有联合感染，即同时发生急性乙肝和急性丁肝。

HDV与HBV有相同的传播途径。预防乙肝的措施同样适用于丁肝。，由于HDV是缺陷病毒，如能抑制乙肝病毒，则HDV亦不能复制。

第四节 戊型肝炎病毒

戊型肝炎病毒(HEV)是经消化道传播的一种肝炎病毒。病毒体直径27—34nm，无包膜。核酸单正链RNA，属杯状病毒科，迄今，尚未能在细胞培养中使HEV复制。目前HEV有2个基因型，缅甸毒株与墨西哥毒株。

HEV感染后，可表现临床型和亚临床型，成人中多见临床型。潜伏期为2-9周，多数患者于发病后6周即好转并痊愈，不发展为慢性肝炎。少数患者可表现为重症肝炎，甚至可导致死亡。孕妇感染HEV，发病率高。病情严重，尤其以怀孕6-9个月最为严重，常发生流产或死亡。孕妇的病死率可达l0%-20%。

目前，HEV临床诊断常用方法是检查血清中的抗一HEV IgM或IgG。急性肝炎患者在排除甲、乙、丙之后，如抗一HEV IgM或IgG阳性均可诊断为HEV急性感染。

Ⅳ 请教请教

HBV是乙型肝炎病毒的英文缩写。HBV的抗原组成包括HBsAg,HBcAg,HBeAg等。
HBsAg可刺激机体产生相应抗体，是一种中和抗体，对机体有保护作用。血清中出现HBsAg是HBV感染的标志，反之，血清中出现抗HBs则可视为乙肝恢复的标志。
关于HBcAg，未检测出抗HBc-IgM也可排除急性乙肝。
HBeAg又称e抗原，是病毒在体内复制及血清有强传染性的一个指标。抗HBe对乙肝感染有一定保护作用，但是进来发现HBV有突变，突变株不能产生HBeAg，也就无法被抗HBe清除，因此对抗HBe阳性患者，应同时检测其血清中的病毒DNA，以全面了解病情作出判断。

由于HBsAg仅存在于肝细胞内，外周血将HBV大球型颗粒脱去外衣壳才能查到，方法烦琐，故一般不查HBsAg。目前临床上主要用血清学方法检测HBsAg，抗HBs，抗HBe和抗HBc，俗称“两对半”。
HBsAg HBeAg 抗HBc阳性，效价高——可诊断为乙肝
血清型中出现HBsAg HBeAg 抗HBc-IgM阳性——表示具有传染性
HBsAg HBeAg 抗HBc-IgM高效价阳性持续六个月以上——应考虑乙肝由急性转入慢性

除乙肝抗原抗体系统检测外，还可进行血清HBV DNA检测和血清DNA多聚酶检测。血清HBV DNA和血清DNA多聚酶有平行关系，是病毒复制的指标。近年血清DNA多聚酶检测已被血清HBV DNA检测所取代。

解答有一些专业术语，不过大体上就是这样，希望能帮到你啦~

Ⅳ HBV抗原、抗体检测五项指标分别是() ()() () (),常用的检测方法是()

乙肝五项分别为HBsAg，HBsAb，HBeAg，HBeAb，HBcAb。常用检测方法ELISA。其次为化学发光法

Ⅵ 简述分别用ELISA的哪种方法检测乙肝两对半

表面抗原和E抗原采用的是双抗体夹心法。

表面抗体是双抗原夹心法。

E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法。

乙肝两对半：检测血清中有无乙肝病毒5种抗原、抗体的简称，也叫乙肝五项，共为两对半,即乙肝病毒表面抗原(HBsAg,旧称澳抗)、表面抗体(抗-HBs或HBsAb)为一对、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、e抗体(抗-HBe或HBeAb)为一对,另一项只检测乙肝病毒核心抗体(抗-HBc或HBcAb)。

(6)hbeag是用什么方法检测扩展阅读：

在乙肝两对半定性检查中，项目顺序如下：乙肝病毒表面抗原HBsAg、乙肝病毒表面抗体HBsAb、乙肝病毒e抗原HBeAg、乙肝病毒e抗体HBeAb、乙肝病毒核心抗体HBcAb，“-”表示阴性，“+”表示阳性。

在乙肝两对半定量检查中，乙肝两对半正常值为：

①HBsAg：<0.5ng/ml(毫微克/毫升)

②HBsAb：<=10MIU/ml

③HBeAg<=0.5PEI U/ml

④HBeAb：当HBeAb定量<=0.2PEI U/ml

⑤HBcAb：<=0.9PEI U/ml。

Ⅶ 酶联免疫法的检测方法

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
四、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步法检测。
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，显然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而可消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显着提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
⑶加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。
⑷加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竞争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。 竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：
⑴将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。
⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。
⑶加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。一般情况，是通过方波伏安法，检测培养体系的峰电流，通过峰电流与抗原抗体的线性关系来最终确定体系的最终检测目标的浓度。
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：
⑴将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。
⑵加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。
⑶加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。
⑷加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。
⑸加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。 亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。
亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。 在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
⑴已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；⑵酶标记的抗原或抗体（结合物）；
⑶酶的底物；
⑷阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
⑸酶联物（结合物）及标本的稀释液；
⑹洗涤液；
⑺酶反应终止液。

Ⅷ HBeAg是什么有何临床意义

HBeAg是乙型肝炎病毒e抗原，乙型肝炎病毒核心部分的可溶性蛋白，一般认为，HBeAg是病毒复制和具体传染性的指标。在急性乙型肝炎发病早期HBeAg出现阳性后数日至2周，几乎所有病人血清都可检出HBeAg，为时短暂，呈一过性，此时传染性最强，如HBeAg持续阳性，提示肝炎慢性化。HBeAg检测的意义如下。
（1）
HBeAg阳性是乙型肝炎病毒在体内复制的标志。
（2）
HBeAg的水平（定量）有助于判断HBeAg携带者传染性的强弱。
（3）
有助于判断急性乙型肝炎的预后，在急性乙型肝炎病毒感染后，患者血清中HBeAg消失，抗-HBe的产生常提示病情好转；若HBeAg持续阳性大于8~10周，提示有转为慢性乙型肝炎的可能性。
（4）部分乙型肝炎患者，HBV可产生变异，HBeAg自动阴转，但并不意味病毒复制停止和病情好转。http://gzyg120.com

Ⅸ 如何检测体内是否存在抗体

用人们俗称的“两对半”检查， HBsAg (表面抗原)，HBsAb （表面抗体），HBeAg （e抗原），HbeAb（e抗体） ，HbcAb （核心抗原）。这种检查方法较准确，误诊的机率很小，要是没记错的话HBsAg ，HbcAb ，HbeAb这三种指标都为阳性就是“大三阳”了，有较强的传染性，其他指标阳性有可能是“小三阳”或是有抗体，感染后又好了的标志。

Ⅹ 乙肝抗原抗体检测实验的主要步骤

① 取出包被好的板，加入待测血清，再加入酶标记抗体，置湿合37℃30-45min
② 取出以洗涤剂洗涤3次，每次3-5min
③ 加入显色液，置于37℃保温箱15-30min