igm血清检测方法

㈠ 病毒鉴定常用方法有哪些

寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。
开展蚊媒寨卡病毒检测时，对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。
开展寨卡病毒实验室检测时，应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。
（一）临床标本检测。
1．病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本，一般认为发病7天内检测阳性率高。
（1）核酸检测：采用荧光定量RT-PCR方法，是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。
（2）病毒分离：将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养，出现病变以后，用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
2．血清学检测
（1）血清特异性IgM抗体：发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体，但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应，易于产生假阳性。
（2）中和抗体：采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染，可以确诊。
（二）媒介标本检测。
1．标本处理
将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理。
2．病毒核酸检测
用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测
3．病毒分离
病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。

㈡ 免疫球蛋白的检测方法

异常血清免疫球蛋白检测方法学探讨（vip资料）
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保健食品检验方法－－ig检验
sfda网站和保健食品相关网站上都可以检索到。

关于牛初乳及其制品中免疫球蛋白G的检测方法

溶液配制：

1） 缓冲液A： 0.05mol.L-1磷酸二氢钠溶液（pH6.5）；

2） 缓冲液B: 0.05mol.L-1甘氨酸溶液（pH2.5）；

3）IgG贮液：sigma公司IgG配成浓度约4mg.mL-1溶液，冷冻浓缩至200mL。

样品制备和检测：取一定量牛初乳粉，溶解于缓冲液A，制成浓度2mg/mL的溶液，用0.45mm微滤器过滤后进样。按下表方案使用缓冲液B梯度洗脱。控制不同进样体积（25~200mL）产生标准响应曲线（5mg到70mg）。IgG贮液用缓冲液A稀释后，制成IgG标准曲线（4~40mg）。通过280nm处吸收值监测洗脱液蛋白浓度。

表1 蛋白质G亲合HPLC的梯度洗脱条件

时间（min） 流速（ml/min） %A %B 梯度
0 1.0 100 0 -
0.5 1.0 100 0 -
1.0 2.0 100 0 线性
1.5 2.0 0 100 -
4.0 2.0 0 100 线性
5.0 1.0 100 0 -
7.0 1.0 100 0 -

具体操作可参阅国标GB/T 5009.194- 2003和曹劲松《初乳功能性食品》第10章。

3、 RID与HPLC的比较

一般地，HPLC检测结果将高于RID检测结果。

我们实验室对比研究了牛初乳IgG抗原决定簇部位（或第二抗体结合部位）和蛋白质G结合部位的变性动力学，证实：在实验温度（69℃~81℃）范围内，IgG分子上蛋白质G结合部位在热处理过程中更为耐热，或者说IgG抗原决定簇部位相对更为热敏感。从而，揭示了上述现象的本质：RID测到的IgG在整体变性程度上低于HPLC测到的IgG。因此，国外一些将RID和ELISA方法测定的IgG含量视为“免疫活性IgG”是比较科学的。

在各温度下IgG分子上蛋白质G结合部位变性反应各温度下的D值均比IgG分子上第二抗体结合部位变性反应的相应温度下的D值大，说明IgG分子上蛋白质G结合部位在热处理过程中要比IgG抗原决定簇部位更为耐热。该温度范围内IgG分子上抗原决定簇部位热变性活化能（270.55kJ/moL）大大低于IgG分子上蛋白质G结合部位热变性活化能（316.42kJ/moL）。在该温度范围内IgG分子上第二抗体结合部位变性反应的Z值为9.34℃，IgG分子上蛋白质G结合部位变性反应的Z值为7.25℃，可认为：IgG分子上第二抗体结合部位的稳定性在上述温度范围内相对恒定，而蛋白质G结合部位的稳定性相对容易随温度发生变化。在酸性乳清溶液中，也获得类似的研究结论。
上述研究结果即将发表于《Journal of Agricultural and Food Chemistry》和《Journal of Food Science》。

4、其它

随着未来技术的发展，并不排除其它可能的IgG检测方法。例如ELISA法，国内已经建立，而且有国外公司可提供试剂盒。

㈢ 血清IgG，IgM，IgA检测一般所用的试剂盒哪家公司的比较好其检测方法一般采取什么方法

血清IgG，IgM，IgA检测一般采取生化法.北京华英生物技术研究所可以完成此类检测.

㈣ 迄今为止，我国检测新冠病毒有哪些方法

1、荧光PCR法。PCR法指的是聚合酶链式反应，能将微量的DNA大幅增加。荧光PCR检测的原理为——随着PCR的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。最后通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
2、联合探针锚定聚合测序法。这种检测主要是用专门的仪器检测测序载片上DNA纳米球携带的基因序列。这种检测的灵敏度高，不容易漏诊，但结果也容易受多种因素的影响而不准。
3、恒温扩增芯片法。检测原理是基于核酸之间的互补结合特性开发的一种检测方式，能够用于定性或定量测量存在于生物体内的核酸。
4、病毒抗体检测。抗体检测试剂是检测血清中由病毒进入人体后刺激人体产生的IgM或IgG抗体，IgM抗体出现较早，IgG抗体出现较晚。
5、胶体金法。胶体金法是用胶体金试纸进行检测，也就是常说的快速检测试纸。这种试纸经过特殊标记，上面有孔，用于滴入受检者的血清样本。
6、磁微粒化学发光法。化学发光法是一种高度敏感的免疫检测，凡具有抗原性的物质都可以用这种方法测定。

㈤ 酶联免疫法的检测方法

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
四、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步法检测。
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，显然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而可消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显着提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
⑶加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。
⑷加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竞争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。 竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：
⑴将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。
⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。
⑶加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。一般情况，是通过方波伏安法，检测培养体系的峰电流，通过峰电流与抗原抗体的线性关系来最终确定体系的最终检测目标的浓度。
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：
⑴将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。
⑵加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。
⑶加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。
⑷加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。
⑸加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。 亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。
亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。 在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
⑴已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；⑵酶标记的抗原或抗体（结合物）；
⑶酶的底物；
⑷阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
⑸酶联物（结合物）及标本的稀释液；
⑹洗涤液；
⑺酶反应终止液。

㈥ IgM和IgG的区别

IgM和IgG的区别是：作用不同、功能不同以及生理变化不同。

一、作用不同

1、IgM是免疫球蛋白M，根据结构的不同将免疫球蛋白分为五种，IgM是人的免疫球蛋白之一。

2、IgG是免疫球蛋白G是血清主要的抗体成分，约占血清Ig的75%。其中40～50%分布于血清中，其余分布在组织中。

二、功能不同

1、IgG的功能作用主要在机体免疫中起保护作用，大多数抗菌、抗病毒；应对麻疹、甲型肝炎等，能有效地预防相应的感染性疾病。

2、IgM以膜结合型（mIgM)表达于细胞表面，构成B细胞抗原受体（BCR)。分泌型IgM为五聚体，是分子量最大的Ig，沉降系数为19S，称为巨球蛋白，一般不能通过血管壁，主要存在于血液中。

三、生理变化不同

1、胎儿出生前可从母体获得IgG，在孕前期22~28周间，胎儿血IgG浓度与母体血IgG浓度相等，出生后母体IgG逐渐减少，到第3、4月胎儿血IgG降至最低，随后胎儿逐渐开始合成IgG，血清IgG逐渐增加，到16岁前达到成人水平。

2、IgM也是初次体液免疫应答中最早出现的抗体，是机体抗感染的“先头部队”；血清中检出IgM提示新近发生感染，可用于感染的早期诊断。膜表面IgM是B细胞抗原受体的主要成分。只表达mIgM是未成熟B细胞的标志。

IgG的临床意义：

1、血清IgG增高：见于系统性红斑狼疮、萎缩性门静脉性肝硬变、慢性活动性肝炎、类风湿性关节炎、亚急性细菌性心内膜炎、IgG型骨髓瘤、某些感染性疾病、IgG型单克隆丙种球蛋白病等。

2、血清IgG减少：见于抗体缺乏症、免疫缺陷综合征、非IgG型多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、肾病综合征、某些白血病、烧伤、变应性湿疹、天疱疮、肌紧张性营养不良等。

以上内容参考 网络-免疫球蛋白M、网络-免疫球蛋白G

㈦ igm =中文是什么意思

朋友您好！
1、做IgM检查主要是抽血检查，做IgM检查主要是看有无近期感染。如果IgM阴性，IgG阳性。则提示曾经感染过，现在没有感染。
2、免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，存在于丙种球蛋白中，即免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、免疫球蛋白D和免疫球蛋白E，临床上主要测定前三种。正常情况下，这些抗体对人的组织不发生作用，只有在病理情况下，人的正常组织发生改变，形成了抗原性，则机体就产生了相应的抗体与之结合。
很多疾病，尤其是免疫性疾病，常常发生免疫球蛋白含量的变化，如免疫缺陷性疾病(如艾滋病)可见其在血清中含量降低，自身免疫性疾病(如红斑狼疮、类风湿关节炎等)的免疫球蛋白升高，在某些感染性疾病中，也可出现免疫球蛋白含量增高，所以免疫球蛋白的测定是一个非特异的检查，仅能说明机体的体液免疫功能情况如何，而不能说明是什么病。
一般红斑狼疮的抗核抗体都在免疫球蛋白G中，所以病人的免疫球蛋白G含量可增高，而其他免疫球蛋白亦可有变化。

㈧ 诺如感染可以查血清特异性IGM抗体吗

目前常用的检测方法有病毒核酸检测和新冠肺炎特异性抗体血清检测。核酸检测是检测病毒基因中某些特定核酸序列，是针对病毒的直接检测。抗体检测是间接检测，是检测人体对新冠病毒的免疫反应，当病毒侵入人体后，人体免疫系统会产生大量的免疫球蛋白，最常见的是IgM和IgG。

Q

检测发现新冠病毒血清特异性IgM阳性能否作为确诊依据？

A

不能！新冠病毒特异性抗体的血清学检测标本易获取，操作简单快捷，易于基层开展，可以作为初筛手段，但确诊新冠肺炎还需要结合核酸检测或者动态观察IgM和IgG滴度来判断。从抗体角度来讲，确诊依据必须是：特异性IgM、IgG抗体双阳性或IgG抗体由阴性转为阳性或IgG抗体滴度恢复期较急性期4倍及以上升高。

㈨ HAV-IgM是什么检查项目

检测病人血清中HAV—IgM抗体这是目前诊断甲型肝炎最可靠最灵敏的方法,患者于发病后1～4周血清中即可检出HAV—IgM抗体,该特异性抗体主要有两种,即IgM和IgG型的抗—HAV,HAV—IgM抗体在急性甲肝感染时出现较早上升较快,高峰滴度较高、持续时间较短。

故凡HAV—IgM抗体阳性特别是滴度较高(>10~(-3))时常提示为急性HAV感染或复发。我们在检测甲型肝炎病毒IgM抗体时发现大多数甲型肝炎患者血清中存在类风湿因子(RF)常干扰HAV—IgM抗体的检测,导致假阳性结果。

为此通过对甲型肝炎患者RF检测试图了解RF与肝功能以及RF对抗—HAVIgM检测等的影响。

以上参考来源:网络-甲型肝炎病毒抗体IgM