植物中还原糖的检测方法有哪些

‘壹’ 还原糖鉴定

还原性糖的鉴定： 斐林试剂由质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05 g/mL的硫酸铜溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。

实验材料准备：植物组织是常用的实验材料,但必须加以选择。本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实。经试验比较,颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。

性质：

能够还原斐林(H.von Fehling)试剂(本尼迪特试剂）或托伦斯(B.Tollens)试剂的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮），不论醛糖、酮糖都是还原糖。

大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林试剂是含Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色Cu2O的沉淀。托伦斯试剂被还原后能生成单质银，发生“银镜反应”。

分子结构中含有还原性基团（如游离醛基或游离酮基）的糖，叫还原糖。如葡萄糖。果糖含有游离的酮基，所以果糖也属于还原糖。

以上内容参考：网络-还原性糖

‘贰’ 可溶性糖含量的测定方法有哪些

测定方法有以下几种：
1.蒽酮法测定可溶性糖
2.苯酚法测定可溶性糖
3.3 ,5 –二硝基水杨酸比色法测定还原糖
4.斐林试剂比色法测定还原糖

斐林试剂比色法测定还原糖步骤

一、原理
植物组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非还原糖（主要是蔗糖）两类。还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的 Cu 2+ 还原成 Cu + ，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比，在 590 nm 波长下比色测定吸光度，查标准曲线，即可计算出所测样品中还原糖的含量。本方法也可用于测定蔗糖及总糖含量。

二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。

（二）试剂
1. 斐林试剂 A 液： 40 g CuSO 4 · 5H 2 O 溶解于蒸馏水定容至 1000 mL 。
2. 斐林试剂 B 液： 200g 酒石酸钾钠（ KNaC 4 H 4 O 6 · 5H 2 O ）与 150g NaOH 溶于蒸馏水中，并定容至 1000 mL 。
A 、 B 两液分别贮存，使用前等体积混合。
3. 0.1 ％葡萄糖标准液：取 80 ℃下烘至恒重的葡萄糖 0.1000 g ，加蒸馏水溶解，定容至 100 mL 。
4. 0.1mol/LNaOH 。
5. 甲基红指示剂： 0.1 g 甲基红溶于 250 mL 60 ％乙醇中。 6. 10 ％ Pb(Ac) 2 。 7. 饱和 Na 2 SO 4 。

（三）仪器设备
分光光度计，分析天平，离心机，水浴锅，具塞刻度试管，刻度吸管，容量瓶，研钵。

三、实验步骤
1 . 标准曲线的制作 取 7 支试管，按表 24 – 4 分别加入各溶液。 将以上各管混合后加塞，于沸水浴中加热 15 min 。取出后自来水冷却， 1500 r/min 离心 15 min 。取上清液，用分光光度计在 590 nm 波长下比色，以蒸馏水作对照，读取吸光度。用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标，对应的糖含量为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中还原糖的提取 取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎，称取 3.00 g ，放入研钵中研磨至糊状，用水洗入大试管中。体积为 10 ～ 15 mL 时，加 2 ～ 3 滴甲基红指示剂，如呈红色，可用 0.1 mol/L 的 NaOH 中和至微黄色。若用风干样品，可称取干粉 3.00 g ，先在烧杯中用少量水湿润，然后用水洗入 250 mL 容量瓶中，如显酸性，可用上法中和。 将大试管置于 80 ℃的恒温水浴中保温 30 min ，其间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对含蛋白质较多的样品，此间可加 10 ％ Pb(Ac) 2 ，除去蛋白质，至不再产生白色絮状沉淀时，加饱和 Na 2 SO 4 除去多余的铅离子。 30 min 后取出冷却，将提取液全部转入 100 mL 容量瓶中。定容至刻度，摇匀后过滤待测。
3. 样品测定 吸取 6 mL 待测液，加 4 mL 斐林试剂，其他操作与标准曲线相同，在 590 nm 波长下读取吸光度。以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度，在标准曲线上查出糖含量。

‘叁’ 还原糖含量的测定有哪些方法,说出他们的优缺点

摘要 常用的还原糖测定方法有：直接滴定法、高锰酸钾滴定法、比色法。直接滴定法测定的是一大类具有还原性的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，适用于所有食品中还原糖的快速测定。

‘肆’ 植物中还原糖的测定方法

总糖:

主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖(水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖)，麦芽糖(水解后为2分子葡萄糖)以及可能部分水解的淀粉(水解后为2分子葡萄糖)。 还原糖:

在糖类中，分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都是还原糖。还原性糖包括所有单糖(除二羟丙酮)、乳糖、麦芽糖等。非还原性糖有蔗糖、淀粉、纤维素等，但它们都可以通过水解生成相应的还原性单糖。 分光光度计:

分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分


析。常用的波长范围为:(1)200,

400nm的紫外光区(2)400,760nm的

可见光区,(3)2.5,25μm(按波数计

为4000cm<-1>,400cm<-1>)的红

外光区。所用仪器为紫外分光光度

计、可见光分光光度计(或比色计)、

红外分光光度计或原子吸收分光光

度计。为保证测量的精密度和准确

度，所有仪器应按照国家计量检定规

程或本附录规定，定期进行校正检

定。

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比。

糖含量的检测方法:

‘伍’ 测还原糖的方法

直接滴定法
1.原理
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，费林氏液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2.适用范围
GB5009.7-85，本方法适用于所有食品中还原糖的检测。检出限0.1mg。
3.主要仪器
滴定管
4.试剂
除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 费林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1 L。
（2） 费林乙液：称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3） 乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100 ml。
（4）亚铁氰化钾溶液。称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。
（5） 盐酸。
（6） 葡萄糖标准溶液：精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加水溶解后加入5 ml盐酸，并以水稀释至1 L。此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖。（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）
5.操作方法
5.1样品处理：
5.1.1乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。边摇边慢慢加入5 ml乙酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。）
5.1.2酒精性饮料：吸取50 ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后，移入100 ml容量瓶中。加25 ml水，混匀。以下按4.1.1自"加5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.3含多量淀粉的食品：称取2～5 g样品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45℃水浴中加热1 h，并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。）。冷后加水至刻度，混匀，静置。吸取50 ml上清液于另一100 ml容量瓶中，以下按4.1.1自"5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.4汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取50 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
（注意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。）
5. 2标定费林氏液溶液：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液，控制在2 min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去并出现淡黄色为终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液总体积，平行操作三份，取其平均值，计算每10 ml（甲、乙液各5 ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。）
5.3样品溶液预测：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液兰色褪去，出现亮黄色为终点。如果样品液颜色较深，滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液的总体积。（注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深，说明滴定过量，需重新滴定。）
5.4样品溶液测定：吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min内加热至沸，快速从滴定管中滴加比预测体积少1 ml的样品溶液，然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点。记录消耗样液的总体积，同法平行操作两至三份，得出平均消耗体积。
6.计算
X3 =（C×v1 × V）∕（m× v2 ×1000）×100
式中： X--样品中还原糖的含量(以葡萄糖计)，%；
C--葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml；
v1-- 滴定10 ml费林氏溶液（甲、乙液各5 ml）消耗葡萄糖标准溶液的体积，ml；
v2--测定时平均消耗样品溶液的体积，ml；
V--样品定容体积，ml；
m--样品质量，g；
7.注意事项
（1） 本方法测定的是一类具有还原性质的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示，所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知样品中只含有某一种糖，如乳制品中的乳糖，则可以认为还原糖=某糖。
（2）分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液，所消耗标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原糖，在物化性质上仍有所差别，所以还原糖的结果只是反映样品整体情况，并不完全等于各还原糖含量之和。如果已知样品只含有某种还原糖，则应以该还原糖做标准品，结果为该还原糖的含量。如果样品中还原糖的成分未知，或为多种还原糖的混合物，则以某种还原糖做标准品，结果以该还原糖计，但不代表该糖的真实含量。

‘陆’ 还原糖测定方法

糖果—还原糖的测定—直接滴定法
2 原理
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝作指示剂，根据样品液消耗体积，计算还原糖量。
3 试剂
3.1 碱性酒石酸铜甲液
称取15g硫酸铜（CuSO4•5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
3.2 碱性酒石酸铜乙液
称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
3.3 乙酸锌溶液
称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
3.4 亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4）
称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
3.5 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）
精密称取1.000g经过98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。此溶液每毫升相当于1mg葡萄糖。
3.6 盐酸
4 仪器
4.1 实验室常规仪器和设备
4.2 古氏坩埚或G4垂融坩埚
5 操作步骤
5.1 样品处理
将样品捣碎混匀待用，样品应避免暴露在空气和阳光下，并尽可能迅速地进行分析。
称取约2.5～5g样品，置于250mL容量瓶中，加50 mL水，摇匀后慢慢加入乙酸锌溶液5mL及亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4）5mL，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
5.2 标定碱性酒石酸铜溶液
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
5.3 样品溶液预测
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。
5.4 样品溶液测定 1
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。
6 结果计算
按下式计算糖果中还原糖的含量： 100100025021×××=VmmX
式中：X—样品中还原糖的含量（以葡萄糖计），%；
m1—10mL碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各5mL）相当于还原糖（以葡萄糖计）的质量，mg；
m2—样品质量，g；
V—测定时平均消耗样品溶液体积，mL。
7 精密度
同一样品两次平行测定值相对差不得超过15%。

‘柒’ 还原糖测定有几个步骤

步骤：
第二步：向1号试管注入其中的一种待测液2ml,向2号试管注入另一种待测液2ml
第三步：分别向1、2号试管中各注入1ml斐林试剂（甲、乙两液等量混合均匀后再注入）
第四步：将两支试管放入盛有50-65.C温水的大烧杯中加热约2min
结果分析：
结果：在1、2号试管中出现砖红色沉淀的那种溶液就是葡萄糖溶液,未出现砖红色沉淀的则是蔗糖溶液

‘捌’ 还原糖的测定方法有哪几种

总糖:主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖(水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖)，麦芽糖(水解后为2分子葡萄糖)以及可能部分水解的淀粉(水解后为2分子葡萄糖)。 还原糖:在糖类中，分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都是还原糖。还原性糖包括所有单糖(除二羟丙酮)、乳糖、麦芽糖等。非还原性糖有蔗糖、淀粉、纤维素等，但它们都可以通过水解生成相应的还原性单糖。 分光光度计:分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为:(1)200,400nm的紫外光区(2)400,760nm的可见光区,(3)2.5,25μm(按波数计为4000cm<-1>,400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比。糖含量的检测方法