金黄色葡萄球菌的染色检测方法

① 金黄色葡萄球菌的检验过程

1、样品制备：

称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤中，固体样品研磨或置均质器中做成1:10的样品混悬液。若供计数检验，可按十进制递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。

2、增菌与分离培养：

将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养24h～48h。

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈见图[4]。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈见图[5]。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

向左转|向右转

② 金黄色葡萄球菌的球菌检验

第一，金黄色葡萄球菌的检验
样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。
增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。
分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24~48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2~3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。
染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5~1μm。
血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴阳性对照。耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
第二，金黄色葡萄球菌肠毒素检测
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。

③ 金黄色葡萄球菌的检测方法

1、培养特性及形态特征①培养特性在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金黄色菌落，并且有β溶血现象。②镜检结果显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。2、菌落计数报告将直接计数法试验中的3个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。3、动物感染试验只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在9h内死亡。将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。
“金球菌”列为“极重要质量项目”
金黄色葡萄球菌因思念、三全、湾仔码头事件而引发标准争议，在2011年12月21日实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄球菌从原来“不得检出”变为“限量检出”，但这一检测标准的改变并不代表可以忽略金黄色葡萄球菌的危害性。
在市质监局征集意见而公示的抽检项目中查询到，对包括速冻水饺、汤圆、包子、花卷、馒头、南瓜饼、八宝饭等在内的速冻米面食品，仍然计划把金黄色葡萄球菌列入A类检验项目，并标注为“极重要质量项目”，同时速冻米面食品的沙门氏菌也是A类检验。
产品检出“金球菌”属严重不合格
市质监局介绍，速冻面米抽检中，金黄色葡萄球菌也是A类检验项目。如果食品检验项目中任一项或一项以上不符合规定的要求，判定为不合格；当产品存在A类项目不合格时，属于严重不合格；仅有B类项目不合格，属于一般不合格。
同时，在婴幼儿奶粉、蛋制品中，三聚氰胺、苏丹红也是同样的A类。为避免一些肉禽食品可能含瘦肉精，此次在肉禽罐头食品中，还有专门针对瘦肉精的检测。
速冻食品“金球菌”可限量检出
中国现行《速冻预包装面米食品卫生标准》（GB19295－2003）规定金黄色葡萄球菌等致病菌不得检出。
而卫生部于2012年12月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》，将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量，规定每批产品抽检5个样品中，至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。

④ 金黄色葡萄球菌的涂片染色怎么做

金黄色葡萄球菌的简单染色
1．涂片：在洁净的载玻片中央滴1 小滴无菌水，用无菌接种环（火焰灭菌）挑取少量大肠杆菌或金黄色葡萄球菌分别与无菌水充分混合，涂成极薄的菌膜；（注意：菌量不宜过多，否则菌体堆积成块不易看清个体形态！）
2．固定：手执玻片一端，将有菌膜的一面朝上，通过微火3-4 次，使水分蒸干；（注意：可用手背接触涂片反面，以不烫手为宜。否则过分烘烤会导致菌体变形！）
3．染色：将玻片置于玻片架上，待其冷却后，在涂片部位滴加适量（盖满菌膜）的草酸铵结晶紫染液，染色1 分钟；
4．水洗：倾去染液，用普通蒸馏水自玻片一端轻轻冲洗，至流下的水中无染液的颜色为止。
5．干燥：用吸水纸吸去多余水分；（注意：勿擦去菌体！）

6.观察。

⑤ 金黄色葡萄球菌检测AOAC方法

金黄色葡萄球菌食物中毒的实验室诊断常通过检测剩余食品，根据金黄色葡萄球菌数量达到105cfu/g以上，或者检出肠毒素来判定。先达基因专注于现场核酸检测，开发了致病微生物，水产病害，支原体污染等领域现场检测产品方案。1、常规细菌培养法目前，从食品中检测金黄色葡萄球菌的常规细菌培养方法(
GB
4789.10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》)
，可对食品中金黄色葡萄球菌进行定性和定量检验，该方法设备简单、成本低;
但检验时间较长(
3
～
5d)
，操作繁琐，且灵敏度较低;
不宜应对突发性公共卫生和食物中毒事件中筛检出金黄色葡萄球菌球菌的污染，

⑥ 金黄色葡萄球菌的检验

1、样品制备：
称取25g样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤中，固体样品研磨或置均质器中做成1:10的样品混悬液。若供计数检验，可按十进制递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。
2、 增菌与分离培养：
将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板 36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养24h～48h。
金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈见图[4]。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈见图[5]。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

⑦ 金黄色葡萄球菌的鉴别要点有哪些

1、形态染色鉴别：

革兰阳性球菌，葡萄串状排列。

2、菌落特征鉴别：

在血平板上菌落中等大小、光滑湿润、菌落呈金黄色、菌落周围有透明溶血环。

3、鉴定试验鉴别：

甘露醇发酵试验阳性，血浆凝固酶试验阳性，触酶阳性球菌，耐热核酸试验酶阳性，新生霉素试验敏感。

(7)金黄色葡萄球菌的染色检测方法扩展阅读：

金黄色葡萄球菌的检验规定：

根据 GB4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》第一法定性检验和第二法平板计数法进行实验操作。

其中定性检验的主要步骤有检样处理、增菌、分离、镜检、肠毒素检验等，定量实验主要步骤有：检样处理、接种、培养、计数和确认试验等，常规的计数培养方法时间需要48 h左右。

卫生部于2012年12月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》，将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量，规定每批产品抽检5个样品中，至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。

⑧ 求金黄色葡萄球菌检验

金黄色葡萄球菌检验
1
目的
1.1
了解金黄色葡萄球菌检验原理
1.2
掌握金黄色葡萄球菌鉴定要点和检验方法
2
原理
葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
3
材料
3.1
样品
奶、肉、蛋、鱼制品和饮料等。
3.2
菌种
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus）
藤黄八叠球菌（Sarcina
lutea）
3.3
培养基与试剂
7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-parker氏培养基、无菌盐水、兔血浆、革兰氏染色液。
3.4
其它
显微镜、温箱、离心机、无菌吸管、无菌试管、
无菌平皿、均质器、
载玻片、L型涂布棒、酒精灯、接种环等。
4
流程
5
步骤
5.1
一般培养
称取25g固体样品，加入225mL无菌生理盐水，制成混悬液(液体样品可不稀释)。吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL培养基内，同时挑取混悬液或液体样品直接在血平板和Baird-Parker平板划线分离。同时将对照菌种在上述两种平板上作划线分离接种。置36±1℃温箱培养24h。
5.2
分纯培养
将上述血平板和Baird-Parker平板上挑取可疑菌落,先观察对照的菌落特征,再观察被检样品的菌落.,并挑取可疑菌落在血平板上进行分离纯化。若无菌落生长，可用也增菌培养物在上上述平板上划线分离，在36±1℃温箱培养24h后再分离纯化，挑取可疑菌落及对照菌种进行革兰氏染色及血浆凝固酶试验。
5.3
形态特征
本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄状，无芽孢，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5～1um。
在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板菌落呈金黄色，也有时呈白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
5.5血浆凝固酶试验
挑取上述可疑菌落菌种于肉浸液肉汤，同时将金黄色葡萄球菌和藤黄八叠球菌分别接种于肉浸液肉汤，在36±1℃温箱培养24h后进行血浆凝固酶试验。
吸取1∶4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养基0.5mL，振荡摇匀，放在36℃温箱或水浴内，每0.5h观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为是阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。
6
结果
根据形态染色，血平板情况以及血浆凝固酶试验，判别检样有否金黄色葡萄球菌。
7
思考
7.1
金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的菌落特征如何？为什么？
7.2
鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么？

⑨ 金黄色葡萄球菌怎么鉴别，用什么样的培养基

金黄色葡萄球菌检测步骤为：增菌、划平板、血浆凝固酶试验等。
平板通常为BP和血平板，BP上菌落为黑色菌落有浑浊带和透明环，血平板上为灰白色菌落有溶血环。
血浆凝固酶实验为阳性。

⑩ 细菌有哪些染色方法

1
革兰氏染色法
是最常用的鉴别染色法之一。此法起始1881年，染色步骤是先用结晶紫或龙胆紫染液加于已固定好的标本上使之着色，其后加碘液作媒染剂，再用酒精脱色，最后用复红或沙黄复染。革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件及操作技术等有密切关系。如涂片太厚影响酒精脱色，革兰氏阴性菌则可染成革兰氏阳性菌。脱色时若酒精作用时间太长,
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,革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。在缺乏镁盐的培养基中，革兰氏阳性菌可变成革兰氏阴性菌。菌龄也能影响染色的结果，这与生长过程中核酸含量的改变有关。革兰氏染色法的原理还不十分清楚，有化学学说、等电点学说、渗透性学法，目前最通常的解释是革兰氏阳性菌在95%酒精中因含粘肽多而导致细胞壁脱水，通透性减低，使在细菌细胞内着色的染料─碘复合物不易透出细胞壁，所以保留了紫色；革兰氏阴性菌含粘肽少，其细胞壁在95%酒精作用下通透性变化不大，酒精容易进入菌体内溶解染料─碘复合物而透出，失去紫色后被复染成为红色。
2
抗酸染色法
有些细菌，如结核杆菌，不般不易着色，一旦染上色后又不易被盐酸酒精脱色，称为抗酸菌。主要步骤是将细菌涂片、干燥、固定后，以石炭酸复红染液加温进行染色，然后用含酸的酒精脱色，最后用美蓝复染。一般细菌以及标本中的物质都被脱色，抗酸菌则不能，仍为红色。在蓝色背景上呈红色的细菌即为抗酸菌。
3
细菌特殊结构的染色法
细菌的特殊结构，如鞭毛、荚膜、细胞壁、芽孢及异染颗粒等，用普通染色法不易着色，故需用特殊染色法。
4
负染色法
是指背景着色而细菌本身不着色。常用墨汁负染色法配合单染色法（如美蓝）检查细菌的荚膜，背景呈黑色，菌体染成蓝色,
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,荚膜不着色，包绕在菌体周围，成为一层透明的空圈。
5
荧光染色法
用荧光染料，如金胺、吖啶橙等进行染色。细菌用荧光染料着色后在荧光显微镜下检查，可在黑的背景中观察到细菌发出明亮的荧光。用荧光染色法检查细菌，有加快检查速度和提高阳性率等优点。
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