比色计算方法

⑴ 比色分析法有几种结果计算方法

应该包括：
1、单标准计算法： Cx = Cs（Ax/As）;
2、标准曲线法： Cx = m/V = （A-Ao)/bV;

⑵ 有什么比色方法

第二节 比色分析测量仪器和测量方法

比色分析法通过比较溶液对光的吸收程度以测定物质的含量。

一、比色测量仪器

（一）比色测量仪器的基本部件

比色测量仪器一般包括以下五大部件（图8-4）。

图8-4 比色测量仪器部件示意图

1．光源

在光电比色计和可见光分光光度计中，采用6～12v的钨灯，其最适宜的波长范围是360～1000nm，为使光的强度稳定，须用稳压装置来稳定电压。

2．波长控制器

在光电比色计中采用滤光片作为波长控制器。滤光片是有色玻璃片，其作用是从光源发出的连续光谱中分出实验所需的某一特定波长范围的光，即获得适当波长的近似单色光。

选择滤光片的原则是滤光片最易透过的光，也就是溶液最易吸收的光。即滤光片的颜色与溶液的颜色应互为补色，这是因为有色溶液对它的互补色光有最大的吸收。581-g型光电比色计通常只有红、绿和蓝三块滤光片。例如，要测定kmno4溶液，就应选用绿色滤光片。

分光光度计采用单色器来控制波长。它可以把连续波长的光分解，从中得出任一所需波长的更纯的单色光。单色器包含有狭缝调节、透镜系统以及色散元件。

图8-5为自准式单色光器。光源发出的光经入射狭缝由凹 面准直镜反射后的平行光投在棱镜上，经棱镜色散后的光又经准直镜反射到出射 狭缝，转动棱镜便可在出射狭缝得到所需波长的单色光。

图8-5 自准式单色光器示意图

图8-6 硒光电效应示意图

3．吸收池

吸收池供比色时盛溶液用，它是用无色透明、厚度均匀的玻璃制成的。其透光的两面严格平行。同一系列的测定中，所用的比色皿必须配套，即同一配套比色皿盛有同一溶液在同一波长时测得的透光率误差不得越过0.5%。实验时可根据溶液的浓度不同选择。0.5,1.0,2.0,3.0cm不同规格的比色皿。比色皿要保持清洁，透光面要注意保护，不得用手直接接触或用粗糙的滤纸擦拭，以免划伤表面，影响吸收程度。若外壁有液珠，应用滤纸吸干后再用擦镜纸擦净。

4．光电转换器

它是将光能转换成电信号的器件，常用的有光电池和光电管。

光电池 常用的硒光电池如图8-6，适用 于380～750nm波长范围。当光线照射到光电池时，电子从半导体表面逸出。由于硒的半导体特性而在电路中产生光电流。将光电池与一个灵敏检流计相联，在照射光强度不太大且外电路电阴很小时，光电流大小与照射光的强度成正比。因此可根据光电流的大小测量透过溶液的光强度。

硒光电池的优点是光电流较大，可不必经过放大而直接用灵敏检流计测量。有时当光电池受强光照射或连续使用时间太长时，容易产生“疲劳”，这时需使其在暗的状态下暂作恢复，方可继续使用。

光电管 由封装在真空透明管中的一个半圆柱型阴极和一个丝状阳极组成（图8-7）。阴极凹面有光电发射材料层，被光照射可发电子。当两极间加有电压时，发射出来的电子就流向阳极产生光电流。发射出的电子数目与射在该表面上光束的强度成正比。光电管产生的电流啼弱，经放大器放大后可由微安电表直接指示出吸光度或透光率。

图8-7 光电管线路示意图

图8-8 吸光度和透光率标尺

5．检流计

用光电池作光电转换器的比色测量仪器中，检流计一般采用悬镜式光电反射检流计，其灵敏度较高，能测量10-9a（安培）的电流。检流计有吸光度a和百分透光率t（%）两种刻度标尺，可直接读数（图8-8）。

标尺上透光率t是等分的而吸光度a的刻度是不均匀的。透光率t可用小数或百分率表示。a与t的关系可推导为：

例如，已知某溶液对某一波长的光吸光度为0.04，其透光率可由下面方法求得。

0.04=-lgt

lgt=-0.40

t=0.398=39.8%

又如,已知某溶液对某一波长光的透光率为65%,吸光度为:

对于用光电管作光电 转换器的仪器,由于加了放大器,可方便地连接微安电表、记录仪，数字显示器等指示器，也可以调节电桥平衡的方式读数取数据。

（二）比色测量仪器

1．光电比色计

光电比色计用光电池和检流计测量透射光的强度并直接可读出百分透光率t（%）或吸光度a。图8-9是581-g型光电比色计的示意图。它是利用滤光片把钨灯产生的白光中与测定无关的光除去，使入射光尽可能是接近溶液补色的单色光，从而提高了比色分析的准确度。

图8-9 581-g型光电比色计光学线路示意图

图8-10 721型分光光度计光学系统示意图1.光源 2.,8.聚

光透镜 3.棱镜 4.准直镜 5.,11.保护玻璃 6.入射狭缝 7.

平面镜 9.吸收池 10.光门 12.光电管 13.光栅

2．721型分光光度计

721型分光光度计的工作波长范围为360-800nm。采用真空光电管作为光电能量 转换元件，在整个可见光区都比较灵敏。同时采用晶体管放大电路和电表直读结构，仪器的灵敏度和稳定性都比较好。

图8-10为721型分光光度计的光学系统示意图。由光源发出的连续辐射于聚光镜上，经平面镜转角90度反射到入射狭缝，射入单色器。入射光经过准直镜反身射在出射狭缝上，再经过聚光透镜后进入比色皿。经溶液吸收后的透射光通过光门照射在光电管上转换为光电流信号，经过入大后输入检流计，由电表直接显示吸光度。

二、比色分析的测量方法

无论是光电比色计还是分光光度计，最常用的测量方法有如下两种。

（一）标准曲线计

先配制一系列不同浓度的标准溶液，用选定的显色剂显色。选用合适波长的入射光（光电比色计用滤光片，分光光度计可转动波长调节器）。测定时先以空白溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图得到一条通过原点的直线，叫做标准曲线（或称工作曲线）。

例如，测定维生素b12时，可预先绘制维生素b12的a-c标准曲线（图8-11），再用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，即可从标准曲线上找出被测溶液的浓度或含量。

这种方法叫做标准蛐线法。标准曲线可在固定仪器和方法的条件下多次使用，适合于经常性工作。但若仪器不同或测定方法及条件改变，测得的标准曲线不同。因此在更换任何测定条件时都需重新绘制标准曲线。

图8-11 维生素b12的标准曲线

（二）直接比较计算法

若仅对个别样品进行测定，且a-c曲线线性良好，可水作标准曲线而直接比较测定结果。

先配制一个被测物质溶液浓度相近的标准溶液，与被测溶液在相同条件下测定吸光度。根据下式可以计算。

a标=k标c标b标

a测=k测c测b测

由于使用同一波长的入射光，采用同样的比色皿，测定同样的物质。所以

k标=k测

b标=b测

因此a标/a测=c标/c测

则c测=a测/a标×c标

⑶ 比色法的比色法简介

常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯-比尔定律 (A=εbc)为基础。常用的目视比色法是标准系列法，即用不同量的待测物标准溶液在完全相同的一组比色管中，先按分析步骤显色，配成颜色逐渐递变的标准色阶。试样溶液也在完全相同条件下显色，和标准色阶作比较，目视找出色泽最相近的那一份标准，由其中所含标准溶液的量，计算确定试样中待测组分的含量。
与目视比色法相比，光电比色法消除了主观误差，提高了测量准确度，而且可以通过选择滤光片来消除干扰，从而提高了选择性。但光电比色计采用钨灯光源和滤光片，只适用于可见光谱区和只能 得到一定波长范围的复合光 ， 而不是单色光束，还有其他一些局限，使它无论在测量的准确度、灵敏度和应用范围上都不如紫外-可见分光光度计。20 世纪30～60年代，是比色法发展的旺盛时期，此后就逐渐为分光光度法所代替。

⑷ 比色法是什么意思

以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种定量分析的方法，开始于19世纪30～40年代。比色分析对显色反应的基本要求是：反应应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，是比色分析的关键。

⑸ 有谁知道比色法实验的基本原理及步骤

用比色法测定时,应取对照品同时操作。除另有规定外,比色法所用的空白系指用同
体积的溶剂代替对照品或供试品溶液, 然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处
理。在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸收度后,按紫外分光光度法项下(1)对
照品比较法的计算式计算供试品浓度。
当吸收度和浓度关系不呈线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同
一体积，显色后测定各份溶液的吸收度，然后以吸收度与相应的浓度绘制标准曲线，再
根据供试品的吸收度在标准曲线上求出其含量。

⑹ Dische比色法具体是怎样操作

dische比色法又称硫酸咔唑法，咔唑比色法

1 材料与仪器

0.1% 咔唑试液(50 mg咔唑溶于50 mL 95%乙醇)，葡萄糖醛酸(GlcA)、半乳糖醛酸(GalA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、甘露糖(Man)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Ara)、鼠李糖(Rha)、果糖(Fru)均为化学纯，枸杞多糖样品LbGP3，LbGP4，LbP1，LbP2，LbP3由本课题组提供。722分光光度计。

2 方法与结果

2.1 常用的硫酸-咔唑法
2.1.1 标准曲线绘制：精确称取干燥的单糖标准样品10 mg，定容于25 mL容量瓶中。然后准确量取0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL单糖标准溶液于带塞试管中，各管加水至1 mL。在冰水浴中向各管加入6 mL浓硫酸，摇匀后，改在85 ℃水浴中保持20 min，取出后冷至室温，各管加0.2 mL咔唑液，在室温下保持2 h，测定吸收度(530 nm)，以浓度对吸收度作标准曲线。
2.1.2 测定各单糖在530 nm处的检测响应：分别准确吸取各种单糖溶液(10 mg/25 mL)0.4 mL，补水至1 mL用2.1.1项下方法测得其吸收值，结果如表1。

表1 咔唑法测定时各单糖在530 nm处的吸收值

Gal Glc Man Xyl Ara Rha Fru GalA GlcA
0.0493 0.1018 0.0503 0.0840 0.0251 0.0140 0.1245 0.2603 0.2498

上述结果表明，用咔唑法测定时，天然多糖化合物中常见的各种中性单糖在530 nm处也均有程度不同的吸收。
2.2 各单糖浓度与咔唑法测定时在530 nm处吸收值的线性关系：以常用咔唑法(参考2.1.1)测定各单糖吸收标准曲线(其中GalA和GlcA标准溶液的配制为精确称取干燥的糖醛酸10 mg溶于100 mL容量瓶)，其线性回归方程及相关系数如下。
Glc Y=0.4631X+0.004939(r=0.9996)
Gal Y=0.2358X+0.004567(r=0.9993)
Man Y=0.1587X+0.002963(r=0.9998)
Xyl Y=0.2559X+0.000884(r=0.9997)
Fru Y=0.1727X+0.001872(r=0.9960)
Rha 吸收值基本保持不变
GalA Y=0.5857X+0.005917(r=0.9998)
GlcA Y=0.4264X+0.000601(r=0.9999)
上述结果可知，各中性单糖在0.04～0.32 mg/mL范围内、GalA和GlcA在0.01～0.08 mg/mL范围内各单糖浓度与咔唑法检测吸收值呈线性。
2.3 定量考察各中性单糖对咔唑法测定糖醛酸含量的影响
2.3.1 分别准确量取GalA和GlcA(10 mg/100 mL)0.4 mL，各加入0.0，0.4，0.6 mL各中性单糖溶液(10 mg/25 mL)，分别补水至1 mL，按咔唑法测其吸收值。
2.3.2 分别准确量取各中性单糖溶液(10 mg/25 mL)0.0，0.4，0.6 mL，分别补水至1 mL，按咔唑法测其吸收值。得数据如表2。
表2 各种中性单糖对糖醛酸影响的定量考察结果

A530 加入标准中性糖体积(mL) A530 加入标准中性糖体积(mL)
0.0 0.4 0.6 0.0 0.4 0.6
GalA+Glc 0.2738 0.3732 0.3920 GlcA+Glc 0.2438 0.3506 0.4043
Glc 0.0000 0.1017 0.1377 Glc 0.0000 0.1183 0.1741
(GalA+Glc)Glc 0.2738 0.2715 0.2543 (GlcA+Glc)Glc 0.2438 0.2323 0.2302
GalA+Gal 0.2549 0.3059 0.3495 GlcA+Ga1 0.2603 0.3143 0.3406
Gal 0.0000 0.0513 .0914 Gal 0.0000 0.0473 0.1051
(GalA+Gal)Gal 0.2549 0.2546 0.2584 (GlcA+Gal)Gal 0.2603 0.2670 0.2355
GalA+Man 0.2636 0.3152 0.3100 GlcA+Man 0.2403 0.3050 0.3101
Man 0.0000 0.0463 0.0552 Man 0.0000 0.0533 0.0854
(GalA+Man)Man 0.2636 0.2636 0.2548 (GlcA+Man)Man 0.2403 0.2517 0.2247
GalA+Xyl 0.2692 0.3455 0.3837 GlcA+Xyl 0.2600 0.3432 0.3710
Xyl 0.0000 0.0759 0.1275 Xyl 0.0000 0.084 0.1072
(GalA+Xyl)Xyl 0.2692 0.6296 0.2562 (GlcA+Xyl)Xyl 0.2600 0.2592 0.2638
GalA+Rha 0.2218 0.2400 0.2223 GlcA+Rha 0.2204 0.2370 0.2215
Rha 0.0000 0.0090 0.0170 Rha 0.0000 0.0100 0.0120
(GalA+Rha)Rha 0.2218 0.2310 0.2063 (GlcA+Rha)Rha 0.2204 0.2270 0.2095
GalA+Fru 0.2444 0.3721 0.4432 GlcA+Fru 0.2204 0.3585 0.4335
Fru 0.0000 0.1345 0.2191 Fru 0.0000 0.1103 0.2097
(GalA+Fru)Fru 0.2444 0.2376 0.2241 (GlcA+Fru)Fru 0.2204 0.2482 0.2338
GalA+Ara 0.2551 0.2678 0.3125 GlcA+Ara 0.2360 0.2619 0.28885
Ara 0.0000 0.0072 0.0539 Ara 0.0000 0.0254 0.0558
(GalA+Ara)Ara 0.2551 0.2606 0.2586 (GlcA+Ara)Ara 0.2360 0.2365 0.2327

上述实验结果表明样品的吸收值随中性糖的含量增加而增大(Rha除外)，而样品吸收值与中性糖吸收值之差和糖醛酸的吸收值基本一致。
2.4 改进的硫酸-咔唑法：根据2.3的实验结果，我们提出一种改进的硫酸-咔唑法测定糖醛酸含量的方法，即样品的吸收值减去中性糖的吸收值为样品的吸收值。
2.4.1 标准溶液的配制
溶液1.准确量取GalA(10 mg/100 mL)0.2 mL，加入0.2 mL Gal(10 mg/25 mL)和0.2 mL Glc(10 mg/25 mL)，补水至1 mL。
溶液2.准确量取GalA(10 mg/100 mL)0.4 mL，加入0.2 mL Gal(10 mg/25 mL)和0.2 mL Glc(10 mg/25 mL)，补水至1 mL。
溶液3.准确量取GalA(10 mg/100 mL)0.6 mL，加入0.2 mL Gal(10 mg/25 mL)和0.2 mL Glc(10 mg/25 mL)，补水至1 mL。
中性单糖溶液.量取0.2 mL Gal(10 mg/25 mL)和0.2 mL Glc(10 mg/25 mL)，补水至1 mL。
2.4.2 方法改进前后糖醛酸测定结果的比较：上述中性单糖溶液按咔唑法测定在530 nm处的吸收值为0.0442。
表3所列结果表明，改进的咔唑法所测得的标准溶液中糖醛酸吸收值与实际测定值基本一致，因此这种改进的硫酸-咔唑法在测定各种样品中糖醛酸的含量时，排除了样品中中性糖对测定的影响，因而要比常用的硫酸-咔唑法准确。
表3 不同方法的糖醛酸测定结果

溶液1 溶液2 溶液3
咔唑法测定值 0.1497 0.2482 0.3628
改良咔唑法测定值 0.1055 0.2040 0.3186
糖醛酸实际值 0.1092 0.2058 0.3207

注：改进的咔唑法测定值为常用咔唑法测定值与标准配制溶液中中性单糖吸收值(0.0442)之差。
2.5 改进的咔唑法测定糖醛酸实例：从枸杞子中分离得到的多糖样品LbGP3，LbGP4，LbP1，LbP2和LbP3中的糖醛酸含量测定，具体操作如下：
2.5.1 样品中中性糖吸收值的测定：要求得样品中中性糖对检测的吸收干扰值，首先必须知道其中中性糖的含量和组成比。根据蒽酮-硫酸法〔4〕可测得中性糖的含量。组成比的测定需先将样品全水解〔5〕，然后再用HPLC或GC测得样品中各中性单糖的组成比。以此称取各种相应标准中性单糖配成混合液，然后取1 mL溶液于带塞试管中，然后按2.1.1所述的标准曲线制备操作，测得其吸收值。
2.5.2 样品的吸收值测定：按咔唑法(方法同2.1.1)，测得样品吸收值(注：样品中中性糖浓度应在其线性范围内)。
2.5.3 样品中糖醛酸含量的测定：样品中糖醛酸的吸收值为样品吸收值与中性糖吸收值之差，再根据对应标准的回归方程，计算出该样品中糖醛酸含量。实验结果如表4所示。

表4 常用的与改进的咔唑法测定糖醛酸含量结果的比较

糖醛酸含量(%)
多糖样品 常用咔唑法 改进咔唑法
LbGP3 5.3 3.4
LbGP4 10.4 6.4
LbP1 8.8 5.9
LbP2 8.1 6.7
LbP3 8.7 5.7

从表4结果可以看出常用咔唑法测定糖醛酸的含量其值偏高。
3 讨论

在咔唑法所规定的测定波长下，中性戊糖和中性己糖均有吸收，影响糖醛酸含量测定的准确性。为此我们对7种不同的中性糖分别进行了考察，测得其浓度与吸收值的线性范围。实验结果表明Xyl，Man，Glc，Gal，Fru分别找到了各自的线性范围，Rha随着浓度的改变其吸收值基本保持不变，Ara较难判断。各种单糖线性范围的测得，不仅证实了中性糖的存在对咔唑法测定糖醛酸的结果产生干扰，而且为提出一种比常用咔唑法准确性高的糖醛酸测定方法提供了实验依据。
用咔唑法测定各种中性单糖对糖醛酸影响的定量考察实验表明，糖醛酸和各中性单糖在其各自的线性范围内取样，样品的吸收值与中性糖吸收值之差与不含中性糖的糖醛酸实际测得吸收值基本一致。

⑺ 有谁知道比色法，比浊法和吸光度OD之间的关系。是不是一回事

比浊法中有目视比浊法,其原理是进行浊度比较,浊度是指溶液浑浊程度,如生成沉淀的多少就会有影响,产生的浊度与标准浊度进行比较,确定某种成分的含量.有仪器为浊度计,可以测溶液浊度.
比色法是测吸光度的.要求在规定波长下分别测样品溶液与参照物溶液的吸光度,然后按照计算公式计算样品浓度.。
以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种定量分析的方法，开始于19世纪30～40年代。比色分析对显色反应的基本要求是：反应应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，是比色分析的关键。
OD是optical delnsity（光密度）的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系.
检测单位用OD值表示,OD是optical delnsity（光密度）的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,OD＝1og（1／trans）,其中trans为检测物的透光值.
吸光度吸光度用A表示.A是absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度 与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数,影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等.吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关.只要光的波长被固定下来,同一种物质,吸光系数就不变.当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时,溶质吸收了光能,光的强度减弱.吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量.A＝abc,其中a为吸光系数,单位L/(g·cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度）,单位cm ,c为溶液浓度,单位g/L 影响吸光度的因数是b和c.a是与溶质有关的一个常量.此外,温度通过影响c,而影响A.

⑻ 什么叫比色法操作上应该注意什么问题

比色法是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。早在公元初古希腊人就曾用五倍子溶液测定醋中的铁。原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色，颜色深度和物质含量成正比，则根据光被有色溶液吸收的强度，即可测定溶液中物质的含量。

操作注意事项：选择适当的细胞接种浓度，保证细胞培养结束时浓度不至于过满；实验时应设置调零孔，溶媒孔，加药孔；避免血清干扰：一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。

比色法的原理：

利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定性分析的一种方法，其原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色，颜色深度和物质含量成正比，则根据光被有色溶液吸收的强度，即可测定溶液中物质的含量。

如利用光电效应，将透过有色溶液后的光强度成正比例地变换为电流的强度来进行比色定量的方法。

以上内容参考：

网络-比色法

⑼ 比色测定的基本原理是什么操作步骤有哪些

比色测定的基本原理，操作步骤：

原理：

比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，又称吸光亮度法。

步骤：

1. 用相同型号的比色管。

2. 配制等体积的系列标准样品。

3. 配制待测样品(与标准样品等体积)。

4. 对比，找出相同的浓度。

⑽ 比色测定的操作要点是什么方法的基本原理是什么

许多化学物质的溶液具有颜色（无色的化合物也可以加显色剂经反应生成有色物质），当有色溶液的溶度改变时，颜色的深浅也随之改变，浓度愈大，颜色愈深。因此，可以用比较溶液颜色深浅的方法来测定有色溶液的浓度。这种方法叫做比色分析法。 一、 朗伯—比尔定律 当一束单色光通过有色溶液时，入射光线的一部分被器皿反射回来，一部分被溶液吸收，另一部分则透过溶液，如图所示。它们之间有以下关系： Io=Ia+Ir+It （1-1） 式中：Io—入射光强度 Ia—吸收光强度 Ir—反射光强度 It—透过光强度 由于在实际测定时，所用的比色皿都是同质料用规格的。反射光的强度为一定值，不会引起测量误差，所以反射光的影响可以不加考虑。则上式可简化为： Io=Ia+It （1-2） 从式1-2可知：当入射光强度Io为一定时，被吸收光强度Ia愈大，则透过光强度It愈小。也就是说：光强度的减弱仅与有色溶液对光线的吸收有关。 那么，溶液对光线的吸收与哪些因素有关呢？实验证明：溶液的浓度C愈大，液层厚度L愈厚（即光线在溶液中所经过的路程愈长），则溶液对光线吸收的愈多。它们之间的关系有下式决定： lg = KCL （1-3） 这个公式就是朗伯—比尔（Lambert---Beer）定律。 公式中的K称为吸光系数，它表示有色溶液在单位浓度和单位厚度时的吸光度。在入射光的波长、溶液种类和温度一定的条件下，K为定值。吸光系数是有色化合物的重要特性之一，在比色分析中有着重要的意义。K值愈大，表示该物质对光的吸收能力愈强，浓度改变时引起吸光度的改变愈显着，因此比色测定时灵敏度愈高。 朗伯-比尔定律即有色溶液对一定强度光的吸收程度，与液层厚度和溶液中有色物质浓度的乘积成正比。其中朗伯定律说明吸收光与厚度间的关系；比尔定律说明吸收光与浓度间的关系。 朗伯—比尔定律在光电比色计中的应用 假定有两种有色溶液，其中一种是已知浓度的标准溶液，另一种是待测溶液。根据公式： 在标准溶液中：As=KsCsLs （1-4） 在待测溶液中：Ax=kxCxLx （1-5） 将式1-4除以式1-5可得： = 1-6 如果上述两种溶液的液层厚度相等、温度相同而且是同一种物质的两种不同浓度的溶液，测定时所选用的单色光的波长亦相同，则有： Ls=Lx、Ks=Kx ，代入式1-6可得： = 1-7 由此可见，在上述条件下，吸光度与浓度成正比。这一关系式就是光电比色计的设计依据，也是比色分析的基本计算公式之一。式中标准溶液的浓度Cs为已知，As和Ax可用光电比色计测量出来，则待测溶液的浓度Cx即可求出： Cx = × Cs 1-8 由于在实际测定时，标准溶液和待测溶液都要加以稀释，而且在报告结果时，多以100毫升（或1000毫升）中的含量来表示。因此，在实际计算时，就需要在上式中乘上稀释因数。 求待测溶液浓度的方法有：直接比较法（计算法）、因数法和标准曲线法三种。这些方法在“生物化学及生物化学检验技术”课程中有介绍。 波长的选择： 由于有色溶液对光的吸收具有选择性，因此进行比色测定时，滤光片必须加以选择，否则灵敏度很低，导致测量结果不准确。选择滤光的一般原则是：滤光片最大透过的光线应该是溶液最大吸收的光线。从颜色上看，滤光片的颜色与待测溶液的颜色应为“互补色”。 什么叫做互补色呢？凡是两种颜色相加后能得到白色，则此两种颜色就称为“互补色”，图中直接相对的两种颜色，均为互补色。 为什么选择滤光片时，要使滤光片的颜色与待测溶液的颜色为互补色呢？这是因为滤光片和有色溶液具有相似的透光特性，与它们本身颜色相同的色光，能够最大限度地透过。而与它们本身颜色成互补的色光都能被最大地吸收。
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