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免疫组化方法步骤

发布时间:2025-01-30 20:40:47

① 求涂片免疫组化的具体步骤

112. 取0.13ml骨髓,使用涂有蛋白甘油的硅化玻片制作涂片,每片涂5-7张。同时,用EDTA抗凝的试管抽取2ml静脉血进行流式细胞术(FCM)检查。
113. 免疫组化试剂来源:采用福州迈新公司提供的即用型第二代免疫组化ElivisionTMplus广谱试剂盒。
114. 免疫组化步骤:
① 石蜡涂片经过脱蜡和水化处理后,用PBS(pH7.14)冲洗3次,每次3分钟。
② 根据不同抗体的要求,对组织抗原进行相应的修复。
③ 每张涂片加入50μl 3%过氧化氢溶液,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。随后用PBS冲洗3次,每次3分钟。
④ 每张涂片根据需要加入50μl第一抗体(例如CD20、CD3、CD45RO、CD45RB、TdT、MPO、CD5、CD79、CD56、CD79a、CD43、CD5、CD10),室温下孵育60分钟。
⑤ 除去PBS液,每张涂片加入50μl聚合物(Polymer Enhancer),室温下孵育20分钟。之后用PBS冲洗3次,每次3分钟。
⑥ 除去PBS液,每张涂片加入50μl酶标抗鼠/兔聚合物(Polymerized HRP-Anti Ms/Rb IgG),室温下孵育30分钟。再用PBS冲洗3次,每次3分钟。
⑦ 除去PBS液,每张涂片加入50μl新鲜配制的DAB或AEC溶液,在显微镜下观察3-10分钟。
⑧ 用自来水冲洗,进行苏木紫复染,用0.11%盐酸分化,然后用自来水冲洗,并用PBS返蓝。
⑨ 涂片经过梯度酒精脱水干燥后,用DAE显色,再用中性树胶封固。

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