葉綠素檢測方法

❶ 葉綠素的提取液和層析液分別是什麼

提取液：丙酮5ml。

層析液：石油醚。

在做葉綠體色素分離時用到,將葉片碾碎，浸出綠色液體，將液體與層析液（石油醚）混合，將濾紙一段進入混合液體，四種色素在層析液中的溶解度不同，在濾紙上留下4條色素帶。由此觀查出各種色素的相對含量和種類。

紙層析法一般用於葉綠體中色素的分離，葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b，它們在層析液中的溶解度不同，溶解度大的隨層析液在濾

紙上擴散地快，反之則慢；含量較多者色素帶也較寬。最後在濾紙上留下4條色素帶，所以利用紙層析法

能清楚地將葉綠體中的色素分離。

葉綠素提取後的色素帶分布：最上端橙黃色為胡蘿卜素，其次黃色為葉黃素，再下面藍綠色為葉綠素a，最後的黃綠色為葉綠素b。

(1)葉綠素檢測方法擴展閱讀

葉綠素含量的測定方法主要有紫外分光光度法、熒光分析法、活體葉綠素儀法、光聲光譜法和高效液相色譜法。不過目前應用最為廣泛的還是分光光度法。

葉綠素提取液的吸收光譜表明：有兩個強吸收峰，分別在紅光區和藍紫區，不同提取溶劑和原料所得的葉綠素溶液的吸收光譜比較相似。

葉綠素a、葉綠素b的紅區最大吸收峰分別在663nm、645nm附近，在藍紫區分別為429nm、453nm附近。由於提取溶劑和原料不同，對葉綠素提取液進行光譜掃描後，所得的最大吸收值可能有較小范圍的浮動。

高效液相色譜(HPLC)定量檢測葉綠素含量准確率較高，效果很好。用甲醇和丙酮作為流動相，體積比為80：20時，同時在流動相中加入質量分數為0.1%的冰醋酸，流速為1.0mL/min。利用每一種色素的色譜峰面積進行定量，葉綠素a、葉綠素b的定量可通過外標法由工作曲線求得。

❷ 葉綠素a的測定方法有哪些各有哪些優缺點

葉綠素a的測定方法有哪些
一.單色分光光度法測定葉綠素含量時，要測定665和750nm處的吸光度．根據文獻，665nm處光密度值應該在0.1-0.8之間.
葉綠素含量測定選取待測樣品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,測652nm處吸光度.
計算方法方式:
計算樣品葉綠素總量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 樣品總葉綠素含量,mg/L;D652-- 樣品丙酮抽提液在652nm處的吸光值。
回

二.葉綠素含量測定選取待測樣品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,測652nm處吸光度.
計算方法方式:
計算樣品葉綠素總量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 樣品總葉綠素含量,mg/L;D652-- 樣品丙酮抽提液在652nm處的吸光值。

❸ 液相色譜能測葉綠素含量嗎怎麼測

可以

液相色譜法的最早應用是用於分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現幾種顏色的混合譜帶。然後用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，並逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續沖洗就可分別接得各種顏色的色素，並可分別進行鑒定。色譜法也由此而得名。
現在的色譜法早已不局限於色素的分離，其方法也早已得到了極大的發展，但其分離的原理仍然是一樣的。我們仍然叫它色譜分析。
一、色譜分離基本原理：
由以上方法可知，在色譜法中存在兩相，一相是固定不動的，我們把它叫做固定相；另一相則不斷流過固定相，我們把它叫做流動相。
色譜法的分離原理就是利用待分離的各種物質在兩相中的分配系數、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。
使用外力使含有樣品的流動相（氣體、液體）通過一固定於柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當流動相中攜帶的混合物流經固定相時，混合物中的各組分與固定相發生相互作用。
由於混合物中各組分在性質和結構上的差異，與固定相之間產生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經過反復多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中先後流出。與適當的柱後檢測方法結合，實現混合物中各組分的分離與檢測。
二、色譜分類方法：
色譜分析法有很多種類，從不同的角度出發可以有不同的分類方法。
從兩相的狀態分類：
色譜法中，流動相可以是氣體，也可以是液體，由此可分為氣相色譜法（GC）和液相色譜法（LC）。固定相既可以是固體，也可以是塗在固體上的液體，由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜、液-固色譜、液-液色譜。

❹ 怎麼測葉綠素

液相色譜法的最早應用是用於分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現幾種顏色的混合譜帶。然後用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，並逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續沖洗就可分別接得各種顏色的色素，並可分別進行鑒定

❺ 辣椒植株葉綠素含量的測定方法怎麼取材怎麼測定

辣椒植株葉綠素含量的測定方法，取材，測定如下：
材料、儀器設備及試劑

（一）材料：新鮮（或烘乾）的植物葉片。
（二）儀器設備：1. 分光光度計；2. 電子頂載天平（感量0.01g）；3. 研缽；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量濾紙；7. 吸水紙；8. 擦境紙；9. 滴管。
（三）試劑：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸鈣粉。
步驟
1. 取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或乾材料，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈），混勻。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇10ml，繼續研磨至組織變白。靜置3～5min。3. 取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次，最後連同殘渣一起倒入漏斗中。4. 用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最後用乙醇定容至25ml，搖勻。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內。以95％乙醇為空白，在波長665nm、649nm下測定吸光度。

實驗結果計算：將測定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。據此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb：mg/L），二者之和為總葉綠素的濃度。最後根據下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量：
葉綠素的含量（mg/g）= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數]/樣品鮮重（或乾重）。

❻ 葉綠素含量測定分光光度法實驗中,總葉綠素測定波長為什麼選取652nm

葉綠素a的測定方法有哪些
一.單色分光光度法測定葉綠素含量時，要測定665和750nm處的吸光度．根據文獻，665nm處光密度值應該在0.1-0.8之間.
葉綠素含量測定選取待測樣品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,測652nm處吸光度.
計算方法方式:
計算樣品葉綠素總量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 樣品總葉綠素含量,mg/L;D652-- 樣品丙酮抽提液在652nm處的吸光值。
回
二.葉綠素含量測定選取待測樣品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,測652nm處吸光度.
計算方法方式:
計算樣品葉綠素總量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 樣品總葉綠素含量,mg/L;D652-- 樣品丙酮抽提液在652nm處的吸光值。

❼ 怎樣測葉綠素a 以及怎樣進行藍藻計數

欲知封閉水域會否出現藻類瘋長，如藍藻爆發等現象，應監測水域中的藻類數量以及水質，由於對藻類等浮游植物採用計數的方法測定誤差較大，耗時費力，對檢測人員的工作經驗要求相對較高，一般可測定水中的葉綠素a含量代替藻類測定。當水中的葉綠素a含量突然增高，而且水中含有大量氮、磷等營養物質，加上陽光照射強烈，氣候炎熱等因素，該水域極有可能發生藻類瘋長，可通知各有關部門盡早採取應對措施。

因為藻類是一類含葉綠素的、光合自養的、無胚的原植體植物，在浮游藻類里葉綠素a的含量大約佔有機物比重的1～2%，是估算藻類生物量的較好指標。可預先測定藻類計數和葉綠素含量的相關關系，以葉綠素a的含量來推算藻類的數量，即通過測定水中的葉綠素來快速了解藻類的大致數量。

測定葉綠素a的儀器和方法有許多種，分光光度法測定葉綠素a是一簡便易行的測定方法，水樣經離心或過濾濃縮、研磨、丙酮提取後，定容，取上清液分別測量750nm、645nm、663nm、652nm等幾個波長下的吸光度值，根據經驗公式可分別計算出葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素的含量。

分光光度法測定葉綠素a，與測定其他物質稍有不同，如：測磷只需測定單一波長的吸光度值，再以該吸光度值代入由標准溶液測得的校準曲線計算含磷量。而葉綠素a無法使用校準曲線，需用幾個波長下的吸光度值，根據經驗公式來分別計算出各項指標的含量。因為葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b等物質組成，試液是多組分的混合溶液，在試液中分離這幾類物質的難度較大，且無必要。葉綠素a在645nm和663nm 處均有吸收，在645nm處吸光系數較小，為16.75，在663nm 處較大，為82.04；葉綠素b 在645nm和663nm 處亦都有吸收，但在645nm處吸光系數較大，為45.60，在663nm 處較小，為9.27。由此可知：葉綠素a的吸收峰值出現在663nm 處，該吸收曲線延伸到645nm處，在此波長處的吸收系數不如在663 nm 處大，因此在計算公式中求算葉綠素a的含量時，需扣除葉綠素b在663nm和645nm 處的吸光度值，再進行計算。

標准分析方法要求，葉綠體色素提取液不可渾濁，在710nm或750nm波長下測量吸光度，其值應小於葉綠素a吸收峰的吸光度值的5％，否則應重新過濾。假定樣品在663nm處的吸光度值為0.03，則在750nm處的吸光度值不得大於0.0015，對試液的清澈程度要求很高，測量710nm或750nm的目的是避免懸浮物質的干擾，一般測量水中的渾濁度所採用的波長為680nm，為避免在680nm處仍有葉綠素a產生的吸收值，故將測量渾濁度的波長選在710nm以上。在計算公式中，凡參與計算的各吸光度值都應減去710nm處的吸光度值，以扣除懸浮物質的干擾。

採用分光光度法測定葉綠素含量，對測量儀器分光光度計的波長精確度要求較高。如果波長與原吸收峰波長相差1nm，則葉綠素a的測定誤差為2％，葉綠素b為19％，使用前必須對分光光度計的波長進行校正。校正方法除按儀器說明書外，還應以純的葉綠素a和b來校正。