① 植物组织培养一般方法
植物组织培养可以分为四个阶段:
(1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消毒、接种,获得愈伤组织或器官。
(2)进行增殖,不断分化产生新的植株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的。
(3)将植株转移进行生根培养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行扦插生根。
(4)试管苗过渡,即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。
② 请分别简述,植物组织培养、植物细胞培养、植物原生质体培养的过程。
植物组织培养:
1
植物进行切割形成外植体(芽
茎
根尖等)
2
外植体离体培养脱分化形成愈伤组织(这里需要高浓度的生长素和细胞分裂素强烈促进形成愈伤组织,同时要暗培养,防止分化成其他组织)
3
愈伤组织在分化形成植株(要一定光照,细胞分裂素/生长素
比值高时,形成芽
,低时,形成根)
条件:整个过程中要确保无菌,且必须有植物生长所需营养:无机盐,糖类等,尤其是激素)
原理:细胞全能性
植物细胞培养:目的与植物组织培养不同,前者要获得植株,而细胞培养要获得细胞次级代谢产物
1
2与组织培养相同
3
愈伤组织在液体培养基中形成悬浮细胞,过程中获得代谢产物(悬浮细胞的特点是细胞质丰富,液泡小而细胞核大)
植物体细胞杂交:1去细胞壁,在0.5-0.6mol/l的甘露醇溶液,纤维素酶,果胶酶作用下,分解细胞壁,得到原生质体(一掘侍般都用纤维素酶)
2
利用物理方法:离心,震荡等,化学方法:聚二乙醇(一般都这个)得到杂交细胞
3
诱导细胞,形成植株,再生细胞壁(新植株生成标志)。注意,这里要进行筛选肆樱,得到AA
BB
AB细胞,我们需要的是AB细胞!
条件:同上
原理:细胞膜裂散丛的流动性
优点:克服远缘杂交不亲和的障碍(这句话出现频率很高的)
纯手打!不懂私信