1. 基因克隆的方法主要有哪几种简述各种方法的原理和用途。
【答案】：(1)RACE技术
基本原理：根据已知序列设计基因片段内部特异引物，由该片段向外侧进行PCR扩增得到目的序列。用于扩增5'端的方法称为5'RACE，用于扩增3'端的称为3'RACE。
用途：是用于从已知cDNA片段扩增全长基因的方法。
(2)应用cDNA差示分析法克隆基因
基本原理：该法充分发挥了PCR技术以指数形式扩增双链DNA模板的特性，通过降低cDNA群体复杂性和更换cDNA两端接头等方法，特异性扩增目的基因片段。因为试验对象和供试探针在接受差示分析前均经一个4碱基切割酶处理，形成平均长度256bp的代表群，保证绝大部分遗传信息能被扩增。每次T减D反应后仅设置72℃复性与延伸，94℃复性这两个参数共20个PCR循环，PCR产物的特异性和所得探针的纯度非常高。
用途：对染色体步移技术、定位克隆技术、cDNA差显技术等方法的补充。
(3)Gateway大规模克隆技术
基本原理：利用入噬菌体进行位点特异性DNA片段重组，通过整合与切出反应，实现基因快速克隆和载体间平行转移。
用途：为大规模克隆基因组注释的可译框架提供了保障。
(4)基因的图位克隆
基本原理：首先，通过构建遗传连锁图，将目的基因定位到某染色体的特定位点，并在其两侧确定紧密连锁的RFLP或RAPD分子标记。其次通过对许多不同的生态型及大量限制性内切酶和杂交探针的分析，找出与目的基因距离最近的RFLP标记，通过染色体步移技术将位于这两个标记之间的基因片段克隆并分离出来。然后，根据基因功能互作原理鉴定目的基因。
用途：分离未知性状的目的基因。
2. 基因克隆的方法主要有哪几种,简述各种方法的原理和用途
基因克隆的方法主要有：平板划线克隆法、液体克隆法、PCR扩增克隆法和基因重组克隆技术。下面详细介绍各种方法的原理和用途：
平板划线克隆法：
原理是通过将微生物细胞在固体培养基表面划线分离，通过单菌落的形成来实现基因的克隆。这种方法适用于微生物的基因克隆。操作简便，能够直观观察克隆效果。
用途：主要用于微生物学领域，如细菌、真菌等基因的克隆和分离。特别适用于从复杂的微生物群体中分离出特定的菌株或基因。
液体克隆法：
原理是在液体培养基中通过细胞的增殖来实现基因的克隆。通过细胞在液体环境中的增殖，达到大量复制基因的目的。
用途：适用于大规模生产细胞系或需要培养细胞以进行进一步研究的场合，如蛋白质表达等。同时，也可用于从细胞中提取特定基因或进行基因功能研究。
PCR扩增克隆法：
原理是利用聚合酶链式反应技术，通过特定的引物对目标基因进行选择性扩增，从而实现基因的克隆。PCR技术具有高灵敏度和特异性，能在短时间内大量扩增目标基因。
用途：广泛应用于分子生物学研究，用于从复杂的基因组中扩增特定的基因片段，如基因诊断、法医鉴定、疾病研究等。此外，PCR技术也常用于基因工程中的基因表达调控研究。
基因重组克隆技术：
原理是通过将目的基因与载体结合，然后导入受体细胞中进行扩增和表达。这种技术可以实现跨物种的基因克隆和基因功能研究。
用途：广泛应用于基因工程领域，如转基因动植物制备、基因治疗、药物研发等。基因重组克隆技术是实现基因功能研究和应用的重要手段。
总之，以上四种基因克隆方法各具特色，根据研究目的和对象的不同选择合适的方法至关重要。随着技术的不断进步，这些方法在生命科学和基础研究领域将发挥更加重要的作用。