吡咯类药物无菌检测方法

❶ 细菌L型的检测方法

细菌变为L型细菌后，其形态和培养特性均发生了改变。由于L型细菌细胞壁缺失，对外界抵抗力降低，普通培养基含琼脂2%～3% ，氯化钠(NaC1)0.5%， 相对于L型细菌柔软的躯体难于附着生长。即使生长，由于低渗原因(相对于L型细菌)易造成L型细菌菌体肿胀，裂解致死，所以必须配制L型细菌的培养基。
⑴L型细菌培养基制备： 基础培养物加高渗NaC1(3%～6%)、低琼脂(0.8%～0.9% )、富含血清(20 %)、10 %～20%蔗糖或7%聚乙烯吡咯酮等稳定剂以提高渗透压。如为干粉培养基，可采用加NaCI(2%～5%)、血清20%，适当稀释(使琼脂含量约为0.8%～0.9%)亦可。同理也可制备L型液体培养基。
⑵2 L型细菌的培养:标本接种于L型培养基，于5%～10% 二氧化碳环境37℃培养，由于生长缓慢，故培养过程中应仔细、耐心，以防止污染，一般生长2～7 d后，形成中间较厚、四周较薄的荷包蛋样细小菌落。L型细菌在液体培养基中生长后，呈疏松的絮状颗粒，沉于管底，培养液则澄清。
⑶L型细菌的形态:L型细菌的形态因缺乏细胞壁呈高度多形性，有球状、杆状、丝状。此外，L型细菌尚有颗粒型和丝状型两种类型。
⑷ L型细菌的药敏试验:挑取L型菌落于高渗肉汤，37℃培养6～8 h，以无菌棉签蘸取，于L型平板密集划线，贴药敏纸片置37℃烛缸，24～48 h测抑菌环直径。

❷ 茶叶农残检测项目有那些

茶叶农残检测项目:茶叶农残超标的食品安全事件，在我国也是屡见不鲜。茶叶分散式种植模式也让农药残留成为突出性问题。我国对茶叶农残检测的食品安全问题，也建立起系统的标准体系进行规定。像GB2763-2019、GB2763.1-2018、GB23200.26对应茶叶中各类农药的限量、检测方法都进行了明确的规定。

一、茶叶中有机杂环类农药残留检测

茶叶中的有机杂环类农药残留检测项目主要是莠去津、乙烯菌核利、腐霉利、氟菌唑、抑霉唑、噻嗪酮、丙环唑、氯苯嘧啶醇、哒螨灵等农药残留的检测。具体检测方法就是想将茶叶磨碎进行试样制备，然后通过使用丙酮一正己烷提取相关的农药残留，之后使用活性炭小柱依据中性氧化铝小柱进行净化，最终被测物会被丙酮一正己烷洗脱。

二、茶叶中有机氯类农药残留检测

茶叶中有机氯类农药残留检测种类主要有六六六及异构体、滴滴涕及异构体及弄型物、七氯、环氧七氯、艾氏剂、异狄氏剂、六氯苯等。检测方法也是先制备试样，然后用丙酮一正己烷进行提取，不同净化处理使用的是弗罗里硅土-活性炭，然后使用配有电子俘获检测器的气相色谱仪进行测定，定量方法使用内标法。

三、茶叶中二硫代氨基甲酸酯类农药残留检测

茶叶中二硫代氨基甲酸酯类农药残留检测种类主要如下

1、乙撑双二硫代氨基甲酸盐：代森锌、代森锰、代森锌锰、代森钠、代森联；

2、甲基乙撑双二硫代氨基甲酸盐：甲基代森锌；

3、二甲基二硫代氨基甲酸酯（盐）类：福美双、福美锌、福美铁

茶叶中乙撑双二硫代氨基甲酸盐类和甲基乙撑双二硫代氨基甲酸盐类农药残留检测方法：主要将试样在碱性乙二胺四乙酸二钠溶液中转化为水溶性钠盐，加入离子对试剂后，用碘化甲烷进行甲酯化反应，固相萃取柱净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩至干后，乙腈-0.1%甲酸溶液溶解残渣，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

茶叶样品中残留的二甲基二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药残留检测方法：将试验用乙腈提取，加入碘化甲烷甲酯化试剂生成甲酯化衍生物，采用无水硫酸镁和石墨化碳极性填料分散固相萃取净化，样液浓缩至干后，乙腈-0.1%甲酸溶液溶，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

四、茶叶中有机磷类农药残留检测

茶叶中有机磷类农药残留检测种类主要有敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、乐果、敌百虫、氧化乐果、甲基对硫磷、毒死蜱、杀螟硫磷、喹硫磷、杀扑磷、乙硫磷、三唑磷等茶叶中有机磷类农药残留检测方法：先制备试样，然后将试样放入水中浸泡，然后使用乙酸乙酯和乙酸乙酯＋正己烷溶液进行提取，通过活性炭进行净化，之后用配备火焰光度检测器的气息色谱仪进行测定，定量方法使用外标法。

五、茶叶中吡唑、吡咯类农药残留检测

茶叶中吡唑、吡咯类农药残留检测种类主要有唑螨酯、硫化氟虫腈、氟虫腈、氟虫腈砜、溴虫腈、氟硅唑、野燕枯、吡草醚、吡螨胺、唑虫酰胺等。检测方法主要将制备后的试样放在 剂萃取仪（ASE)中用乙酸乙酯-正己烷混合溶剂提取，然后使用ENVI-Carb/PSA复合固相萃取小柱净化，之后用气相色谱串联四极杆质谱仪测定，定量方法使用外标法。