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快速细胞染色方法

发布时间:2022-11-30 03:41:10

⑴ 细菌细胞染色的方式有哪几种各有什么作用

简单染色法:利用单一染料对细菌进行染色的一种方法.例如番红.
1.涂片:用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成极薄的菌膜.
2.干燥:可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤.
3.固定:手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,通过迅速通过火焰2-3次(用手指触涂片反面,以不烫手为宜).
4.染色:加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液),染l~2min.
5.水洗:用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止.
6.干燥
7.镜检
复染色:利用用两种以上染料对细菌进行染色.例如革兰氏染色法.
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,需要碱性染料(basic dye)初染液;媒染剂(mordant);脱色剂(decolorising agent)和复染液(counterstain).
碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet).媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落,碘(iodine )是常用的媒染剂.脱色剂是将被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精(ethanol).复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染液,复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色,而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色,而且将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的复染液为番红.
1.载玻片固定.在无菌操作条件下,用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀,在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定.
2.草酸铵结晶紫染1分钟.
3.自来水冲洗,去掉浮色.
4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟,倾去多余溶液.
5.用中性脱色剂如乙醇(95%)或丙酮酸脱色30秒,革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色,革兰氏阴性菌被褪色而呈无色.
6.用番红染液或者沙黄复染30秒,革兰氏阳性菌仍呈紫色,革兰氏阴性菌则呈现红色.

⑵ 给细菌染色的方法都有几种,怎么操作,都用复红染色吗麻烦一一讲来,详细点,本人初学者.

细菌染色分为活菌染色跟死菌染色两种。其中死菌染色分为正染色跟负染色。正染色又包括普通染色与特殊染色两种。普通染色有简单染色法、革兰氏染色法和抗酸染色法;特殊染色分为芽孢染色法、荚膜染色法和细胞壁染色法。一般都只用革兰氏染色法跟抗酸染色法。

革兰氏染色法(Gram's stain)是最常用的细菌染色法。细菌经结晶紫初染染成蓝色。革兰氏染色阳性菌(G+)细胞壁肽聚糖层数多,且肽聚糖为空间网状结构,再经乙醇脱水,网状结构更为致密,染料复合物不易从细胞内漏出,仍为蓝色。而革兰氏染色阴性菌(G-)细胞壁脂类含量多,肽聚糖层数少,且肽聚糖为平面片层结构,易被乙醇溶解,使细胞壁通透性增高,结合的染料复合物容易泄漏,细菌被脱色为无色,再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
①将结晶紫染液加于涂膜上,染色(初染)1min。②水洗后加芦戈氏碘液处理(媒染)1min。③水洗后用95%酒精脱色,脱色时频频摇动玻片,直至流下的液体无色为止(约需0.5min)。④水洗后加石炭酸复红稀释液染色(复染)0.5min。⑤水洗,用滤纸轻轻吸干,待标本充分干燥后进行镜检。染色过程中,水洗要用自来水的细流徐徐冲洗,冲洗涂膜的背面,勿使强水流直接冲到涂膜上。

抗酸染色法(acid-fast stain)对分枝杆菌属等一般染色法不易着色的抗酸性细菌染色。要注意:1)涂片要略厚;2)加温染色或延长染色时间,加温时随时补加染色液;3)分枝杆菌呈红色(+),其他细菌和背景为蓝色。
①石碳酸复红加温染色8~10分钟。②3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟,脱色是轻摇玻片,直到涂片颜色脱去为止。③水洗后,用碱性美蓝复染1分钟。④再次水洗,印干。

芽孢染色法是专门给细菌芽孢染色的。要注意:1)芽孢染色用的菌种应控制菌龄,使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜;2)染色加热过程要及时补充染液,切勿让涂片干涸。
①孔雀绿加热染色5分钟。②水洗。③番红染色2~3分钟。④水洗,干燥。

荚膜染色法是专门给与染料亲和性弱的细菌荚膜染色。由于荚膜很薄,且含水量高(90%以上),易变形,所以制片和染色时一般不用热固定。这个包括黑素负染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素负染色法:
1.制菌液:在洁净载破片一端加一滴蒸馏水,按无菌操作要求,用接种环取少量斜面试管培养物于蒸馏水中,轻轻混匀。
2.涂片(推片法):取另一块边缘光滑的载玻片,使之一端与菌液接触,然后迅速均匀地将菌液推向玻片的另一端,使菌液涂成一薄层。置空气中自然干燥。注意:勿热固定。
3.复红染色:滴加石炭酸复红染色液覆盖涂布面,染色4~5分钟后,除去多余染液(勿用水洗)。干燥时间不要太长,防荚膜脱水。
4.黑素染色:在玻片一端加一滴1%黑素液,再取一块边缘光滑的裁玻片,当边缘与黑素液接触后,迅速均匀地推向玻片另一端,使成一薄层。置空气中自然干燥。
5. 镜检(油镜):菌体呈红色,背景呈黑色,荚膜无色。
注意事项:滴黑色素要量少;取菌要适量。
Leifson染色法
1.制备涂片同前,自然干燥。
2.滴加Leifson’s染色液覆盖涂布面,染色10分钟,倾去多余染料(勿用水洗)。
3.滴加硼酸钠美蓝染色液,染色5分钟,轻轻用水冲洗,置空气中自然干燥。
4.油镜下镜检,菌体呈蓝色,荚膜呈红色。
Tyler染色法
1.制备涂片同前,自然干燥。
2.滴加结晶紫冰醋酸染色液覆盖涂布面,染色5~7分钟。倾去多余染料(勿用水洗)。
3.用20%CuS04水溶液轻轻冲去染料,用吸水纸印干后,置空气中自然干燥。
4.油镜下检查,菌体呈紫色,荚膜呈浅紫色或浅蓝色。

细胞壁染色法是观察细菌细胞壁时采用的染色法。细菌细胞壁很薄,它与染料结合的能力差,不易着色,在细菌的染色过程中,一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞,细胞壁本身并未染色,因此,欲通过染色来观察细胞壁,必须设法使细胞壁能着色,而细胞质则不易着色,常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用,它们使细胞壁形成可着色的复合物,而使细胞质不易被着色,经结晶紫或甲基绿染色后,便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。
根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后,会产生质壁分离这一现象,经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。
1.单宁酸法
(1)将培养16—18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。
(2)用5%单宁酸染5分钟后,水洗。
(3)用0.2%结晶紫染3—5分钟,水洗,吹干。用油镜观察,细胞壁呈紫色,细胞质呈淡紫色。
2.磷钼酸法
(1)制备浓厚的涂片,在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3—5分钟。
(2)用1%甲基绿水溶液染3—5分钟。
(3)水洗后,吹干,用油镜观察。细胞壁为绿色,细胞质无色。
3.区分细胞壁与细胞质膜
(1)乙醚蒸气法
(a)将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上,翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。
(b)取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出,水洗。
(c)用硫堇染色30秒钟。
(d)水洗,水封,置油镜下观察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。
(b)挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌,在25%NaCl水滴中涂布均匀,待自然干燥。
(c)滴加0.01%结晶紫于其上,使盖满有菌部分,30秒钟后水洗,干燥,用油镜观察结果。

⑶ 细胞核用什么试剂染色因为有很多方法,请列举试剂名称

对细胞核染色主要是对染色体染色。
1.最常用的碱性品红,顾名思义,它呈现碱性,而染色质也呈现碱性,所以在配置品红染液时在其中加入醋酸或盐酸,它们一方面与品红牢固结合,一方面与染色质结合,达到染色目的,且染色效果好,细胞质一般被染成淡紫红色,或无色,而细胞核被染成深紫红色或紫色,对比十分强烈。有两个重要的配方,一个是石碳酸-品红,一个是锡夫试剂,网上很容易查到具体配方。
2.苏木精。这是至今为止最优良的细胞核染色剂,优点是几乎所有植物的任何组织中的细胞核都能被它强烈染色。苏木精本身不是染料,起作用的是他的氧化产物苏木精素,依靠硫酸铁按或硫酸铝按等媒染剂来染色。常用配方是1铁矾-苏木精,2醋酸-铁矾-苏木精

⑷ 常用微生物染色的方法

革兰染色

抗酸染色:分支杆菌属,诺卡放线菌属。石炭酸复红染色,金永染色。

芽孢染色:用于区分细菌的芽孢和营养细胞。结果芽孢染成绿色,营养细胞为红色。

晶体染色:观察苏云金杆菌不同变种的晶体形状大小。结果晶体染成紫色,芽孢为透明椭圆形,仅见具有轮廓的折光体。

鞭毛染色:有赖夫生染色法、银盐染色法,西萨-基尔染色法等。一般以西萨-基尔(Cesares-Gill)染法效果最佳。

异染颗粒染色:用于白喉棒状杆菌染色,直接涂片或改良阿伯特法染色。

墨汁荚膜染色:观察菌体有无荚膜,如新型隐球菌。碳素墨汁。

镀银染色:螺旋体

吉姆萨染色:螺旋体

荧光染色

魏申染色(wayson)染色:鼠疫耶尔森杆菌。

铬酸P、A、S真菌类染色。结果:曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。曲霉菌丝周边紫红色,弹力纤维紫色,背景绿色。

Mann氏甲基蓝伊红染色法:病毒包涵体染色。Negri氏小体红色。

Nacchiavello氏染色:病毒包涵体染色。结果:包涵体、立克次氏体均染红色,其余组织呈蓝色。

Crocott-Gomori氏六胺银法:新型隐球菌

碘染色法吉姆萨染色:衣原体

乳酸酚棉蓝染色,糖原染色:真菌,前者适用于所有真菌,呈蓝色。

吉姆萨染色,瑞氏染色:鞭毛虫,滴虫,锥虫,疟原虫,弓形虫,隐孢子虫等原虫。

三色染色,碘染色:阿米巴等原虫。

荧光素吖啶橙染色:疟原虫。

金胺-酚染色:隐孢子虫。

甲苯胺蓝,四胺银染色:耶氏肺孢子虫。

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