胰岛素测量方法

① 酶联免疫法（ELISA）测胰岛素的具体步骤。

1.包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度（5～20μg/ml）各0.3ml加于微反应板每个凹孔中,4℃过夜或37℃水浴2～3小时,贮存冰箱
2. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟
3. 加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温-20的稀释缓冲液稀释的被检血清各50μl，37℃，作用1小时
4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl（TMB底物），再加入显色剂B 50μl（过氧化氢），轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟
10. 终止：每孔加终止液50μl（2M H2SO4），终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。

② 牛胰岛素一级结构的测定方法

就是将氨基酸从氨基端开始利用氨基很容易和2，4-二硝基氟氯苯（DNP）发生芳香亲核取代反应，如用一个肽和2,4-二硝基氟苯反应，显然键的N-端游离氨基和它反应，然后把这个N-端带有2,4-二硝基苯基的肽链彻底水解，在水解物中，只有一个氨基酸的α-氨基的氢被DNP取代，各种氨基酸的DNP标记化合物都是黄色的，并且都各有一个Rf值，因此很容易鉴别；所以通过这个方法，很容易辨认出肽中的N-端是哪一个氨基酸。

③ 胰岛功能测定是包括什么参考值是多少

胰岛素功能检测包括：

1. C-肽;糖化血红蛋白;血红蛋白A1C;

2. 血清糖化蛋白（GSP）;

3. 胰岛素;胰岛素原;胰高血糖素等。

胰岛素功能检测参考值：

1. C-肽; 正常值 成人≤4.0μg/L 男1.5～5.0μg/L 女1.4～5.5μg/L。

2. 糖化血红蛋白;血红蛋白A1C正常值

   电泳法 占Hb总量的0.056～0.075 柱层析法 占Hb总量的0.06～0.09

   高压液相色谱法 HbA1a 0.016 HbA1b 0.008 HbA1c 0.03～0.06。

3. 血清糖化蛋白（GSP）; 正常值 果糖胺法 [2.5mmol/L。

4. 胰岛素; 6～24mIU/L。

5. 胰岛素原; 正常值 [0.2μg/L 或[0.3IRI。

6. 胰高血糖素 正常值 30～210ng/L。

胰岛功能检测解释：

胰岛素功能检查包括胰岛素、C肽、血糖测定。胰腺组织是人体内的重要内分泌器官，其分泌的胰岛素能促进肝脏、肌肉和脂肪等组织摄取和利用葡萄糖，是体内唯一降低血糖的激素。C肽是胰岛素时段下的肽段，不被肝脏蛋白酶所破坏，因此在检测胰岛素的同时测定血中的C肽含量，可以更真实地反映胰岛的分泌功能。血糖测定则是间接地反映胰岛素功能。

胰岛功能检查的作用：

是看看你的胰岛分泌胰岛素的功能怎么样，是不是受损了，是检查早期糖尿病的常用方法。胰岛功能检查应该是在早晨空腹的情况下,进食75g葡萄糖或100g面粉的馒头前后分别于空腹,餐后1小时,2小时,3小时抽静脉血测定四个时间点的血糖,胰岛素释放,C-肽值.胰岛功能检查有几项，包括胰岛素释放试验、C肽释放试验。做法：糖尿病人选用馒头餐或者口服75g葡萄糖，取血同时进行葡萄糖和胰岛素、C肽等的测定。作用是测定胰岛素的含量是绝对还是相对不足，确定糖尿病的情况，决定用药。

胰岛功能检查步骤：

(1)试验应在上午7～11时之间进行。早8：30以前到医院、并顺便携带当天早晨第一次小便10ml送检。

(2)空腹坐位抽血后5分钟内饮入250ml含75g葡萄糖的糖水;对于部分糖尿病人，为减少对B细胞的强烈刺激，可以进食2两左右的(约100克)馒头代替葡萄糖;妊娠期妇女葡萄糖的用量为100g;儿童按1.75g/kg体重计算，但总量不超过75g。

(3)进食后0.5小时、1小时、2小时、3小时分别抽血检测血糖。常规口服葡萄糖耐量试验的同时，平行测定血样中的胰岛素浓度。根据5次血中葡萄糖水平(空腹时坐标点为0)绘制糖耐量曲线，同时根据5次血浆胰岛素水平绘制出胰岛功能曲线。

患糖尿病时，无论空腹血浆胰岛素水平，还是胰岛素释放试验分泌曲线均较常人有明显不同，1型糖尿病患者胰岛素分泌减少，空腹血浆胰岛素水平明显低于正常，其基值一般在5mu/L以下，服糖刺激后其胰岛素释放也不能随血糖升高而上升，常呈现无高峰的低平曲线，有些病人甚至不能测出。2型糖尿病患者空腹血浆胰岛素水平可正常，或稍低于正常，但往往会出现高峰时间延迟，如在服糖后2小时或3小时出现，呈分泌延迟高峰后移。其中尤其是肥胖型的糖尿病病人，血浆胰岛素释放曲线明显高于正常，但低于同体重的非糖尿病病人的释放曲线。进食后胰岛素分泌高峰后延(2～3小时)是2型糖尿病的特征。

不过胃切除术后或严重的肝病等，肠道迅速吸收葡萄糖，而肝脏不能相应快速摄取葡萄糖所致。以上两类病人不宜进行口服葡萄糖耐量试验，需采用静脉注射葡萄糖耐量试验。

④ 测定胰岛素浓度的机理

胰岛素在胰岛B细胞中合成。胰岛素合成的控制基因在第11对染色体短臂上。基因正常则生成的胰岛素结构是正常的；若基因突变则生成的胰岛素结构是不正常的，为变异胰岛素。在B细胞的细胞核中，第11对染色体短臂上胰岛素基因区DNA向mRNA转录，mRNA从细胞核移向细胞浆的内质网，转译成氨基酸相连的长肽——前胰岛素原，前胰岛素原经过蛋白水解作用除其前肽，生成胰岛素原。胰岛素原随细胞浆中的微泡进入高尔基体，由86个氨基酸组成的长肽链——胰岛素原在高尔基体中经蛋白酶水解生成胰岛素及C肽，分泌到B细胞外，进入血液循环中。未经过蛋白酶水解的胰岛素原，一小部分随着胰岛素进入血液循环，胰岛素原的生物活性仅及胰岛素的5%。

胰岛素的分子量5700，由两条氨基酸肽链组成。A链有21个氨基酸，B链有30个氨基酸。A-B链之间有两处二硫键相连。胰岛B细胞中储备胰岛素约200U，每天分泌约40U。空腹时，血浆胰岛素浓度是5～15μU/mL。进餐后血浆胰岛素水平可增加5～10倍。胰岛素的生物合成速度受血浆葡萄糖浓度的影响，当血糖浓度升高时，B细胞中胰岛素原含量增加，胰岛素合成加速。胰岛素是与C肽以相等分子分泌进入血液的。临床上使用胰岛素治疗的病人，血清中存在胰岛素抗体，影响放射免疫方法测定血胰岛素水平，在这种情况下可通过测定血浆C肽水平，来了解内源性胰岛素分泌状态。

⑤ 胰岛功能测定包括什么参考值是多少

胰岛素功能检测包括：

1. C-肽;糖化血红蛋白;血红蛋白A1C;

2. 血清糖化蛋白（GSP）;

3. 胰岛素;胰岛素原;胰高血糖素等。

胰岛素功能检测参考值：

①C-肽; 正常值 成人≤4.0μg/L 男1.5～5.0μg/L 女1.4～5.5μg/L。

②糖化血红蛋白;血红蛋白A1C正常值。

③电泳法 占Hb总量的0.056～0.075 柱层析法 占Hb总量的0.06～0.09。

④高压液相色谱法 HbA1a 0.016 HbA1b 0.008 HbA1c 0.03～0.06。

⑤血清糖化蛋白（GSP）; 正常值 果糖胺法 [2.5mmol/L。

⑥胰岛素; 6～24mIU/L。

⑦胰岛素原; 正常值 [0.2μg/L 或[0.3IRI。

⑧胰高血糖素 正常值 30～210ng/L。

⑥ 用胰岛素控制血糖的计量和用法

胰岛素怎样计算用量
正常人的空腹血糖维持在3.3~6.1mmol/L（60~110mg/dl），餐后半小时到1小时之间一般在10.0mmol/L（180mg/dl）以下，最多也不超过11.1mmol/L（200
mg/dl），餐后2小时又回到7.8mmol/L（140
mg/dl）。
胰岛素怎样计算用量
（一）怎样估算其初始用量：
糖尿病患者在开始使用胰岛素治疗时，一律采用短效胰岛素。而且，一定在饮食与运动相对稳定的基础上，依下列方法估算初始用量，而后再依病情监测结果调整。
1、按空腹血糖估算：
每日胰岛素用量（μ）=[空腹血糖（mg/dl）-100]x10x体重(公斤)x0.6÷1000÷2
100为血糖正常值；
x
10换算每升体液中高于正常血糖量；
x
0.6是全身体液量为60%；
÷1000是将血糖mg换算为克；
÷2是2克血糖使用1μ胰岛素。
为避免低血糖，实际用其1/2--1/3量。
2、按24小时尿糖估算：病情轻，无糖尿病肾病，肾糖阈正常者，按每2克尿糖给1μ胰岛素。
3、按体重计算：血糖高，病情重,0.5--0.8μ/kg；病情轻，0.4--0.5μ/kg；病情重，应激状态，不应超过1.0μ/kg。
4、按4次尿糖估算：无糖尿病肾病，肾糖阈基本正常，按每餐前尿糖定性"+"多少估算。一般一个"+"需4μ胰岛素。
5、综合估算：体内影响胰岛素作用的因素较多，个体差异较大，上述计算未必符合实际，故应综合病情、血糖与尿糖情况，先给一定的安全量，然后依病情变化逐步调整。
（二）怎样分配胰岛素用量
按上述估算的情况，每日三餐前15--30分钟注射，以早餐前>晚餐前>午餐前的用量来分配。由于早餐前体内拮抗胰岛素的激素分泌较多，故胰岛素用量宜大一些；而一般短效胰岛素作用高峰时间2--4小时，因此午餐前用量最小；多数病人睡前不再用胰岛素，至次日晨再用，故晚餐前又比午餐前要用量大。如睡前还用一次，则晚餐前要减少，而睡前的用量更少，以防夜间低血糖。
（三）怎样调整胰岛素剂量
在初始估算用量观察2--3天后，根据病情、血糖、尿糖来进一步调节用量。
1、据4次尿糖定性调整：只适用于无条件测血糖且肾糖阈正常的病人。依据前3--4天的4次尿糖定性进行调整：早餐前胰岛素用量依据午餐前尿糖，午餐前胰岛素用量依据晚餐前尿糖，晚餐前胰岛素用量依据睡前或次日晨尿（包括当天晨尿）。
2、根据血糖调整：糖尿病人，尤其是I型糖尿病及肾糖阈不正常的病人，应根据三餐前与睡前的血糖值来调整胰岛素用量，详见下表：

血糖值(mmol/l)
mg/dl
餐前胰岛素增量
其它处理
<2.8
<50
减少2--3μ
立即进餐2.8--3.9
50--70
减少1--2μ
3.9--7.2
70--130
原剂量
7.2--8.3
130--150
加1μ
8.3--11.1
150--200
加2μ
11.1--13.9
200--250
加3μ
13.9--16.6
250--300
加4--6μ
16.6--19.4
300--350
加8--10
μ
餐前活动量增加减1--2μ或加餐

加餐前活动量减少
加1--2μ

⑦ 如何测量胰岛素的摩尔质量

根据公式π=cRT,C=m/(M*V)得π=m/(M*V)RT,M=mRT/(π*V),就可以计算了,这里胰岛素是分子,总浓度就是溶液浓度,溶液依数性包括：蒸气压下降、沸点升高、凝固点下降和溶液的渗透压,M=5765.78g/mol

⑧ 重组人胰岛素的检查

有关物质 取该品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含3.5mg的溶液，作为供试品溶液。照效价测定项下的方法，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH2.3）-乙腈（82:18）为流动相A，乙腈-水（50:50）为流动相B，进行梯度洗脱。
时间 流动相A 流功相B
0分 78% 22%
36分 78% 22%
61分 33% 67%
67分 33% 67%
调节流动相比例使重组人胰岛素主峰的保留时间约为25分钟，系统适用性试验应符合效价测定项下的规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，总有关物质不得过3.0%。高分子蛋白质 取该品适量，用溶解液（取乙二胺四醋酸四钠300mg，加水250ml溶解后，加0.1mol/L盐酸溶液3ml，加水至500ml）制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用稀释液（取乙二胺四醋酸四钠600mg，加水900ml溶解后，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.5，加水至1000ml）稀释成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照溶液。照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）测定，以适合分离分子量为5000～60000球状蛋白的色谱用亲水硅胶为填充剂；0.4mol/L碳酸氢铵溶液-乙腈（69:31）为流动相；流速为每分钟0.5ml；检测波长为214nm。取人胰岛素单体-二聚体对照品，用乙二胺四醋酸溶解制成每1ml中含1mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，以人胰岛素单体和二聚体之间的峰谷高与二聚体峰高之比作为分离度，分离度应不大于0.6。取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中显示的所有分子量大于重组人胰岛素单体的各峰面积之和，应不得大于对照溶液主峰的峰面积（1.0%）。锌 精密称取该品适量（约相当于锌0.1mg），置10ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；取供试品溶液与标准锌溶液（精密称取硫酸锌44mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，每lml相当于10μg的Zn）各1.6ml，分别置10ml量瓶中，各加硼酸-氯化钠缓冲液（pH9.0)2ml与新制的锌试剂溶液（取锌试剂0.13g，加氢氧化钠试液2ml溶解后，加水使成100ml)1ml，加水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，照分光光度法（附录Ⅳ A），在620nm的波长处分别测定吸收度，计算。含锌量不得过1.0%。
氯 取该品约10mg，精密称定，照氮测定法（附录Ⅶ D 第二法）测定，按干燥品计算，含氮量应为14.5%～16.5%。
干燥失重 取该品0.2g，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过10.0%（附录Ⅷ L）。
炽灼残渣 取该品约0.4g，依法检查（附录Ⅷ N），遗留残渣不得过2.0%。
无菌 取该品，加适量的灭菌0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含2mg的溶液，用薄膜过滤法处理后，依法检查（附录Ⅺ H），应符合规定。
细菌内毒素 取该品，依法检查（附录Ⅺ E），每1mg重组人胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。

⑨ 胰岛素敏感性的检测方法

结合常规实验室检查，如空腹胰岛素和甘油三酯，是一种筛查普通人群胰岛素抵抗的简单方法。与胰岛素敏感性紧密相关的变量是空腹胰岛素、空腹甘油三酯、天冬酸氨基转移酶、腰围和体重指数。

⑩ 空腹时胰岛素测定是多少

您好：胰岛素释放试验同OGTT（试验餐可用75g葡萄糖,糖尿病人用馒头餐（100g面粉）每次抽血糖标本同时抽一份血清测胰岛素.
正常结果：
空腹5～20μU/ml（mU/L）；餐后1小时,为空腹5～6倍；餐后2小时为空腹4～5倍；餐后3小时为空腹2.5～3倍.
临床意义：
①了解胰岛β细胞的胰岛素储备功能,有助于Ⅰ型,Ⅱ型的分型.
②Ⅰ型糖尿病胰岛素释放呈低平曲线,各时限胰岛素浓度与空腹时无明显增高.
③Ⅱ型糖尿病胰岛素释放延缓,峰值后延.