㈠ 纖維素酶活力用什麼方法測定
纖 維 素 酶 是 一 種 復 合 酶 。 酶 系 包 括 外 切 B-1.4- 葡 聚 糖 酶 （ ExoB-1.4glucanase,EC3.2.1.9 ） 內 切 B-1.4 葡 聚 糖 酶 （ Endo β -1.4-glucanase,EC1.2.1.4） 和纖維二糖酶。纖維素酶在一定溫度和 PH 條件下， 將纖維素酶底物（濾紙或羥甲基纖維素鈉）水解，釋放出還原糖。在鹼性，煮沸 條件下，3.5-二硝基水楊酸（DNS 試劑）與還原糖發生顯色反應，其顏色的深淺 與還原糖（與葡萄糖汁）含量成正比。通過在 540nm 測定吸光度，可得到產生還 原糖的量，計算出纖維素酶的 FPA 酶和 CMCA 酶活力，以此代表纖維素酶的酶活 力。
㈡ 誰知道纖維素酶酶活測定的具體方法詳細說一下吧！非常感謝啊！！！！
纖維素酶活測定以還原糖量標示轉化，具體的做法下載文獻自己看。
㈢ 果膠酶怎麼樣定性檢測什麼方法能像剛果紅染色檢測纖維素酶一樣可以出現透明圈
[原理]
果膠物質主要存在於植物初生壁和細胞中間，果膠物質是細胞壁的基質多糖。果膠包括兩種酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果膠酶本質上是聚半乳糖醛酸水解酶，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸鈉法進行半乳醛酸的定量,從而測定果膠酶活力。
果膠酶活力單位定義]
1g(或1ml液體酶)酶粉,於50.0℃、pH3.5條件下,每分鍾催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個活力單位。
1. 試劑和儀器
*本標准所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純
1.1 醋酸
1.2 碘
1.3 碘花鉀
1.4 濃硫酸
1.5 果膠（sigma公司）
1.6 硫代硫酸鈉
1.7 碳酸鈉
1.8 可溶性澱粉
1.9 水浴鍋
1.10 碘量瓶
2. 試劑的制備
2.1 pH3.5的酸水
用醋酸將蒸餾水調至3.5
2.2 1%果膠溶液：
准確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻後過濾，定至100ml。
2.2 0.1N碘液：
准確稱取碘化鉀5g，用蒸餾水溶解後，加入2.54g碘，溶解後定容至100ml。
2.3 0.025mol/L硫代硫酸鈉：
准確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加蒸餾水後定容至1L
2.4 0.5%可溶性澱粉指示劑：
准確稱取可溶性澱粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.5 1M碳酸鈉溶液：
准確稱取10.6g碳酸鈉，定容於100ml的水中
2.6 2N硫酸：
吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中
2.7 酶樣的制備
准確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml，於50℃水浴浸取1小時，過濾，濾液為供試酶液。則該酶已經稀釋100倍。
3. 程序
3.1 取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（PH3.5），在50℃水浴中保溫反應1小時。
3.2 取出後加熱煮沸2~3min，冷卻後，補水至20ml。
3.3 取5ml反應液於100ml碘量瓶中，加1M碳酸鈉溶液1ml，0.1N碘液5ml，搖勻，具塞，於室溫暗處下放置20min。
3.4 取出後加2N硫酸2ml，立即用0.05N硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性澱粉溶液，繼續滴定至藍色消失為止。
3.5 空白試驗以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進行滴定。
3.6 每個酶樣最少做兩個平行樣。
4. 計算
4.1 將測得的各平行樣求OD值的均值。
4.2 計算酶的活性單位依據以下公式
酶的活力= [(B-A)*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ]
單位： U/g(ml)
式中： A：樣品滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數。
B：空白滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數。
N：硫代硫酸鈉摩爾濃度。
0.5：1當量硫代硫酸鈉相當於0.5當量半乳糖醛酸。
20：反應液總體積
51：酶液體積以1ml計
52：吸取反應液
n：稀釋倍數
W：酶粉重量g或酶液體積ml
㈣ 纖維素酶含有幾種成份，怎麼測
纖維素酶是一種重要的酶產品，是一種復合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、內切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等組成，還有很高活力的木聚糖酶活力。由於纖維素酶在飼料、酒精、紡織和食品等領域具有巨大的市場潛力，已被國內外業內人士看好，將是繼糖化酶、澱粉酶和蛋白酶之後的第四大工業酶種，甚至在中國完全有可能成為第一大酶種，因此纖維素酶是酶制劑工業中的一個新的增長點。
纖維素酶的應用
一、制酒
1、在進行酒精發酵時添加纖維素酶可顯著提高酒精和白酒的出酒率和原料的利用率，降低溶液的黏度，縮短發酵時間，而且酒的口感醇香，雜醇油含量低。纖維素酶提高出酒率的原因可能有兩方面：一是原料中部分纖維素分解成葡萄糖供酵母使用；另外，由於纖維素酶對植物細胞壁的分解，有利於澱粉的釋放和被利用。
2、將纖維素酶應用於啤酒工業的麥芽生產中可增加麥粒溶解性，加快發芽，減少糖化液中單一葡萄糖含量，改進過濾性能，有利於酒精蒸餾。
二、醬油釀造
在醬油的釀造過程中添加纖維素酶、可使大豆類原料的細胞膜膨脹軟化破壞，使包藏在細胞中的蛋白質和碳水化合物釋放，這樣既可提高醬油濃度，改善醬油質量，又可縮短生產周期，提高生產率，並且使其各項主要指標提高3％。
三、飲料加工
用纖維素酶處理豆腐渣後接入乳酸菌進行發酵，可製得營養、品味俱佳的發酵飲料。將纖維素酶應用於果蔬榨汁、花粉飲料中，可提高汁液的提取率（約10％）和促進汁液澄清，使汁液透明，不沉澱，提高可溶性固形物的含量，並可將果皮綜合利用。目前，有報道已成功地將柑橘皮渣酶解製取全果飲料，其中的粗纖維有50％降解為短鏈低聚糖，即全果飲料中的膳食纖維，具有一定的保健醫療價值。
四、纖維廢渣的回收利用
1、應用纖維素酶或微生物把農副產品和城市廢料中的纖維轉化成葡萄糖、酒精和單細胞蛋白質等，這對於開辟食品工業原料來源，提供新能源和變廢為寶具有十分重要的意義。
此外，在果品和蔬菜加工過程中如果採用纖維素酶適當處理，可使植物組織軟化膨鬆，能提高可消化性和口感。
2、將纖維素酶用於處理大豆，可促使其脫皮，同時，由於它能使細胞壁破壞，使包含其中的蛋白質、油脂完全分離，增加其從大豆和豆餅中提取優質水溶性蛋白質和油脂的獲得率，既降低了成本，縮短了時間，又提高了產品質量。
3、植物纖維原料是地球上最豐富、最廉價而又可再生的資源，其主要成分是纖維素和半纖維素，纖維素和半纖維素的利用一直是國際國內的研究熱點課題。利用的途徑和整體思路是利用纖維素酶和半纖維素酶先將纖維素和半纖維素降解成可發酵糖，進而通過發酵製取酒精、單細胞蛋白、有機酸、甘油、丙酮及其他重要的化學化工原料。此外，纖維素、半纖維素通過纖維素酶的限制性降解還可制備成功能性食品添加劑，如微晶纖維素、膳食纖維和功能性低聚糖等。
㈤ 纖維素酶活的活性檢測方法及使用說明是什麼
這些是在索萊寶官網上借鑒的：（僅供參考）
纖維素酶活的活性檢測方法
1. 纖維素CMC酶
1.0標題
用3.5一二硝基水楊酸法測定纖維素CMC酶活性單位。 2.0范圍
生產分析和質量控制部門適用。 3.0原理
纖維素CMC酶（EC3.2.1.4）水解羧基纖維素分子中β－1.4葡萄糖苷鍵,釋放出的還原糖(以葡萄糖計)與3.5二硝基水楊酸(DNS)反應,產生顏色變化,這種顏色變化與釋放還原糖(以葡萄糖計)的量成正比關系,即與酶樣品中的酶活性成正比。通過在550nm的光吸收值查對標准曲線(以葡萄糖為標准物)可以確定還原糖產生的量,從而確定出酶的活力單位。 4.0試劑
4.1無水醋酸鈉(分析純) 4.2冰醋酸(分析純) 4.3 3.5－二硝基水楊酸 4.4無水葡萄糖
4.5四水酒石酸鉀鈉(分析純) 4.6氫氧化鈉(分析純) 4.7重蒸苯酚(分析純) 4.8無水亞硫酸鈉(分析純) 4.9疊氮化鈉(分析純) 4.10羧甲基纖維素鈉 5.0儀器
5.1水浴鍋(恆溫)50±1℃ 5.2電熱乾燥箱80±1℃ 5.3 722型分光光度機計 5.4分析天平感量0.1㎎ 5.5一級玻璃製品 5.6電冰箱 6．0試劑的准備
6．1乙酸－乙酸鈉緩沖溶液（PH=4.8）
溶液A：量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，製成0.1M醋酸鈉溶液。 溶液B：稱取8.2g醋酸鈉，溶解後容至1000ml，製成0.1M醋酸鈉溶液。 以A：B=4：6的比例混合，低溫冷藏備用。 6.2 DNS試劑:
溶液A:稱分析純NaOH 104g溶於1300ml水中,加入30g分析純3.5一二硝基水楊酸。 溶液B:稱分析純酒石酸鉀鈉910g，溶於2500ml熱水中，再稱取25g重蒸苯酚和25g無水亞硫酸鈉加入酒石酸鉀鈉溶液。
將A、B溶液混合，定容至5000ml，貯存於棕色瓶中，暗處放置一星期後可使用。 6.3 CMC溶液：用羧甲基纖維素鈉（CMC）以PH4.8醋酸緩沖液配成1%的溶液。 7．0標准曲線製作：
7.1無水葡萄糖80℃烘乾至恆重。
7.2准確稱取1.000g溶於1000ml水中，加10mg疊氮化鈉防腐，4℃冷藏備用。 7.3標准葡萄糖曲線製作
纖維素酶的作用原理
1、纖維素酶在提高纖維素、半纖維素分解的同時,可促進植物細胞壁的溶解使更多的植物細胞內溶物溶解出來並能將不易消化的大分子多糖、蛋白質和脂類降解成小分子物質有利於動物胃腸道的消化吸收熊譜成1996.
2、纖維素酶制劑可激活內源酶的分泌,補充內源酶的不足,並對內源酶進行調整,保證動物正常的消化吸收功能,起到防病,促生長的作用（張國立,1996）.
3、消除抗營養因子,促進生物健康生長.半纖維素和果膠部分溶於水後會產生粘性溶液,增加消化物的粘度,對內源酶造成障礙,而添加纖維素酶可降低粘度,增加內源酶的擴散,提高酶與養分接觸面積,促進飼料的良好消化.
4、纖維素酶制劑本身是一種由蛋白酶、澱粉酶、果膠酶和纖維素酶等組成的多酶復合物,在這種多酶復合體系中一種酶的產物可以成為另一種酶的底物,從而使消化道內的消化作用得以順利進行.也就是說纖維素酶除直接降解纖維素,促進其分解為易被動物所消化吸收的低分子化合物外,還和其他酶共同作用提高奶牛對飼料營養物質的分解和消化.
5、纖維素酶還具有維持小腸絨毛形態完整,促進營養物質吸收的功能.
㈥ 我想知道纖維素，木質素，和半纖維素的測定方法
正確
㈦ 蛋白酶、澱粉酶的種類檢測
cellulase
是酶的一種，在分解纖維素時起生物催化作用。
纖維素酶廣泛存在於自然界的生物體中。細菌、真菌、動物體內等都能產生纖維素酶。一般用於生產的纖維素酶來自於真菌，比較典型的有木酶屬(Trichoderma)、麴黴屬（Aspergillus）和青黴屬(Penicillium）。
產生纖維素酶的菌種容易退化，導致產酶能力降低。
纖維素酶在食品行業和環境行業均有廣泛應用。在進行酒精發酵時，纖維素酶的添加可以增加原料的利用率，並對酒質有所提升。
由於纖維素酶難以提純，實際應用時一般還含有半纖維素酶和其他相關的酶，如澱粉酶（amylase）、蛋白酶（Protease）等
纖維素酶種類繁多，來源很廣。不同來源的纖維素酶其結構和功能相差很大。由於真菌纖維素酶產量高、活性大，故在畜牧業和飼料工業中應用的纖維素酶主要是真菌纖維素酶。
一、真菌纖維素酶的種類
自然界中很多真菌都能分泌纖維素酶。由許多具有高協同作用的酶組成，習慣上，將纖維素酶分成三類：
內切葡聚糖酶(Cx )、外切葡聚糖酶(C1 )、β一葡萄糖苷酶(βG )。
1、C1-酶：這是對纖維素最初起作用的酶，它破壞纖維素鏈的結晶結構，起水化作用。即C1-酶是作用於不溶性纖維素表面，使結晶纖維素鏈開裂、長鏈纖維素分子末端部分游離，從而使纖維素鏈易於水化。
2、Cx-酶：這是作用於經C1-酶活化的纖維素、分解β-1，4鍵的纖維素酶。主要包括內切-1,4-β-葡聚糖酶和外切-1,4-β-葡聚糖酶。前者是從高分子聚合物內部任意位置切開β-1,4鍵，主要生成纖維二糖、纖維三糖等。後者作用於低分子多糖，從非還原性末端游離出葡萄糖。
3、β-葡萄糖苷酶：即為將纖維二糖、纖維三糖及其它低分子纖維糊精分解為葡萄糖。
上述三種纖維素酶在分解纖維素時，任何一種酶都不能裂解晶體纖維素，只有三種酶共同存在並協同作用時，才能完成水解過程。
二、纖維素酶菌種選育
菌種選育是纖維素酶生產的基礎性工作，國內外許多專家進行了大量研究，為了生產高質量的纖維素酶產品，王家林等（1996）在吸收國內外經驗的基礎上，先後引進了綠色木霉木10、綠色木霉Sn-91014、康氏木霉NT-15、黑麴黴XX-15A，在此基礎上，採用了紫外線、特定電磁波輻射、線性加速器，亞硝基胍等物理、化學的誘變方法，獲得了高產菌株NT15-H、NT15-H1、XT-15H、XT-15H1。其中木霉NT-15H固體培養活力經輕工部食品質量監督檢測中心南京站檢測表明，濾紙活力為3670u/g, C1-酶活力24460u/g，Cx-酶活力1800u/g，已達到國際先進水平。此菌種在工廠化生產中性能穩定。張苓花等（1998）採用康氏木霉W-925，J-931，經過濃度為2%硫酸二乙酯和紫外線（15W、30cm、2min）復合誘變後，得到了產酶活性高的Wu-932菌種，該菌種CMC糖化力達到2975，濾紙糖酶活性為531，比出發菌W-925分別提高了100%和81%。化工部飼料添加劑技術服務中心王成書等（1997）採用該中心的里氏木霉A3先進行紫外線和亞硝基胍復合誘變後，將處理過的孢子接種於纖維雙層平板上，30℃培養5-8天，15℃放置7-10天，挑選透明圈直徑和菌落直徑比較大的單菌落進行三角瓶固態發酵再篩選，得到了產纖維素酶活力很高的里氏木霉91-3菌株。
纖維素酶菌種易退化，退化後其產酶力明顯降低，其原因可能有三個方面：①經誘變篩選的菌種發生回復突變。②自然負突變。③菌種長時間低溫斜面保藏，會在分生孢子上長出次生菌絲，而次生菌絲所形成的分生孢子生命力弱，這可能是菌種退化的主要原因。為了避免纖維素酶菌種退化，張苓花等（1998）報道，採用砂土管保藏菌種。即將過篩洗凈的砂子與土以3：2比例混合分裝在試管內，用1kg/cm2壓力滅菌30分鍾共三次，將欲保存的斜面菌種制備成1000ml孢子懸浮液，每個砂土管注入0.5ml，搖勻，放入盛有無水CaCl2真空乾燥器內保存。經測定，在所測的121天內，酶的活性基本不變；酶活性下降50%的時間，由常規方法的60天延長至160天，明顯地減緩了菌種退化速度。
三、發酵工藝
纖維素酶的生產工藝主要有兩種，即固體發酵和液體發酵，其工藝如下(見下頁)：
1、影響產酶量和活力的因素：影響纖維素酶產量和活力的因素很多，除菌種外，還有培養溫度、pH、水分、基質、培養時間等。這些因素不是孤立的，而是相互聯系的。張中良等（1997）採用均勻設計Cl12(1210)，以綠色木霉（T.ViriclePers.expr）為菌種，研究了影響產纖維素酶的五大因素對產酶量和活力的作用，認為基質粗纖維含量為40%、初始pH7.5、加水4倍、在26-31℃條件下培養45h可獲得最大產酶量26mg/g和CMC酶活力20mg/g·h。王成華等（1997）也研究了其誘變篩選的里氏木霉91-3的產酶條件，結果表明該菌種以7：3的秸稈粉和麥麩，另添加4%硫酸銨、0.4%磷酸二氫鉀、0.1%硫酸鎂為最佳培養基，28-32℃為適宜培養溫度，30℃為最佳溫度，4%為最佳接種量，96h到達發酵高峰。張苓花等（1998）研究了以康氏木霉W-925為出發菌，經誘變後得到的Wu-932纖維素酶高產菌的最佳發酵條件。結果表明，以1：2的麥麩和稻草粉為培養基，5%的接種量，稻草粉碎平均長度3-5mm，初始pH4-5，溫度在28-35℃，發酵時間72h為最佳發酵條件。
2、污染菌的控制：目前，在用康氏木霉發酵生產飼用纖維素酶中，普遍存在一種俗稱的「白毛菌」污染。污染後輕者酶活性下降，重者發酵失敗。為此，研究控制發酵污染意義很大。張苓花等（1998）研究「白毛菌」的菌落特徵、來源、生長和生理特徵及控制方法，找到了一種與康氏木霉Wu-932呈共生關系，而與「白毛菌」呈競爭性抑制關系的熱帶假絲酵母菌J-931。利用此菌進行混合發酵，可有效地控制「白毛菌」的污染。其微生態關系如下：
四、纖維素酶在畜禽生產中的應用
常見的畜禽飼料如穀物、豆類、麥類及加工副產品等都含有大量的纖維素。除了反芻動物藉助瘤胃微生物可以利用一部分外，其它動物如豬、雞等單胃動物則不能利用纖維素。近年來，國內外利用真菌纖維素酶成為提高畜禽生產性能和飼料利用率的重要措施之一。
1、在牛日糧中的應用
焦平林等（1996）用閹牛試驗，在日糧中按每頭每日添加纖維素酶40g，飼喂60天，結果表明加酶組日增重892.78g，對照組日增重746.8g，差異極顯著（P<0.01）。焦平林又用30頭荷斯坦奶牛進行試驗，試驗組按每頭每日添加50g纖維素酶，結果表明，試驗組15頭奶牛在68天總產奶量為2916kg,而對照組15頭奶牛在68天的總產奶量為2689kg，差異顯著（P<0.05）。付連勝等（1998）報道，在瘤胃功能正常狀態下，成年奶牛及育成牛飼喂纖維素酶5天後，其糞便干物質和飼喂前相比，減少30%，一周後，封閉式牛舍氨含量下降70%左右，粗飼料採食量提高8-10%，尿中尿素下降58.9%，懷孕奶牛在產前30天始飼喂纖維素酶，分娩後，不產生生理性消化不良症狀，胎兒體重可增加1.5-3kg，並無畸形和弱胎。產牛體質恢復快，產奶高峰維持時間長（一直至第四個泌乳月）。趙長友等（1998）綜述了纖維素酶在草食動物日糧中的應用，均取得了顯著效果。
2、在雞日糧中的應用
肉雞日糧一般以高魚粉、高玉米、高豆粕為主。為減少這些常規原料的使用量，廣泛採用廉價的飼料原料，秦江帆等（1996）在肉雞日糧中提高富含纖維的麥麩比例，添加0、0.05%、0.1%纖維素酶制劑進行試驗，結果表明，添加0.1%纖維素酶組比對照組在1-2、3-6、7-8周三個生長階段日增重分別提高4.31%、4.54%、4.13%，耗料比分別下降1.56%、4.50%、4.3%。徐奇友（1998）在蛋雞日糧中添加0.1%、0.15%、0.5%纖維素酶，結果表明，在1-10月的產蛋期間，產蛋率分別提高0.53%、1.25%、2.88%，酶水平0.15%和0.5%組的破蛋率降低34.49%、16.19%，蛋殼強度分別提高14.71%和8.41%。
3、在豬日糧中的應用
據尹清強等（1992）報道，在基礎日糧中添加0.6%和1.2%纖維素復合酶，結果生長育肥豬增重比對照組分別提高16.84%和21.86%。Wank等（1993）報道，添加纖維素酶，使中性洗滌纖維消化率由30.3%提高到34.1%，酸性洗滌纖維消化率從68.8%提高到73.9%，能量消化率由69.3%提高到71.8%。
五、展望
我國是一個飼料資源十分緊張的國家，土地少、人口多，人畜爭糧的矛盾十分突出。要保持我國飼料工業和畜牧業的持續發展，必須解決好飼料問題，否則將嚴重製約其發展。纖維素是自然界中十分豐富的資源，是800-1200個葡萄糖分子聚合而成。因此，可通過微生物發酵充分利用農副產品下腳料、秸稈、糠生產纖維素酶添加劑，用於提高畜禽生產性能，提高飼料利用率，改善飼料的營養價值，降低飼料成本和提高經濟效益，具有廣闊的開發前景，今後應進一步加強纖維素酶研究和開發工作。主要有如下幾方面：
1、進一步加強纖維素酶的作用機制研究。纖維素酶應用於飼料，作用於動物消化道，其機制尚未清楚。從理論上決定其添加量還很困難，目前只能從實驗結果來決定，受影響因素很多，往往效果不夠理想。對於單用多種原料的纖維素酶最佳添加量也研究不多，這將嚴重製約纖維素酶的推廣應用。
2、目前纖維素酶的產量和活性都不高，成本偏高，今後應加強菌種選育和發酵工藝等基礎研究工作，以提高其產量和活性，特別是要注意利用DNA基因重組技術的應用，來選育出活性高、產酶量大的菌種。
3、加強纖維素酶檢測方法研究。雖然纖維素酶的檢測方法很多，但真正能適合飼料的檢測方法還沒有，這給實際應用工作帶來困難，如無法比較不同廠家的產品質量，確定纖維素酶添加量也很困難，應組織有關力量，制訂出統一的檢測方法標准，供生產中應用。
㈧ 土壤纖維素酶活性的測定方法
2g鮮土，加入100ml血清瓶中，8ml1%羧甲基纖維素，再加入2ml pH5.5的磷酸緩沖液，再加入0.6ml甲苯，72h(37℃)培養過濾，取2ml濾液，加入3ml3.5-二硝基水楊酸，水沸5min，定容到25ml，540nm處比色。
㈨ 酶活測定方法有哪些原則最好是詳細的答案
一、原則
pH值和溫度
體外測定酶活力時選擇的測定條件應盡可能接近酶在動物體內的消化環境。
干擾成分
側定酶活力時應盡可能的去除干擾成分。
底物
在選擇底物時一定要用純度較高的底物，底物的反應濃度也不應太高。
酶樣的稀釋度
稀釋度要適中，過高，酶活力與產物生成量的關系就會超出線性范圍。
其他因素
酶促反應時間、反應體系的離子強度等因素也可以影 響酶活力的測定結果。因此,在酶活力體外測定時需要對這些 因素進行深人研究。
二、酶活測定方法
還原法
酶與底物在特定的條件下反應,酶可以促使底物釋放出還原性的基團。在此反應體系中添加化學試劑 ,酶促反應的產物可與該化學試劑發生反應,生成有色物質。通過在特定的波長下 比色 ,即可求 出還原產物的含量 ,從而計算出酶活力的大小 。
色原底物法
通過底物與特定的可溶性生色基團物質結合,合成人工底物。該底物與酶發生反應後 ,生色基團可被釋放出來 ,用分光光度法即可測定顏色的深淺,在與已知標准酶所做的曲線比較後 ,即可求出待測酶的活力。
粘度法
該法常用於測定纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶 的活力。木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情況下可形成極高的粘度,當酶作用於粘性底物時木聚糖和β-葡聚糖會被切割成較小的分子使其粘度大 為降低。基 於Poiseuille定律我們知道 ,只要測定一定條件下溶劑和樣品溶液的運動粘度,便可計算特性粘數,並以此來判斷酶的活力。
高壓液相色譜法
酶與其底物在特定的條件下充分反應後 ,在一定的色譜條件下從反應體系中提取溶液進行色譜分析,認真記錄保留時間和色譜圖,測量各個樣的峰高和半峰高,計算出酶促反應生成物的含量 ,從而換算出酶活力的數值。
免疫學方法
常用 於酶活性分析的免疫學方法包括:免疫電泳法 、免疫凝膠擴散法。這兩種方法都是根據酶與其抗體之間可發生特定的沉澱反應 ,通過待測酶和標准酶的比較,最終確定酶活力。免疫學方法檢側度非常靈敏,可檢側出經過極度稀釋後樣品中的酶蛋白,但其缺點是不同廠家生產的酶產品需要有不同特定的抗體發生反應。
瓊脂凝膠擴散法
將酶作用的底物與瓊脂混合熔融後 ,倒入培養皿中或載波片上製成瓊脂平板。用打孔器在瓊脂平面上打出一個約4-5mm半徑 的小孔。在點加酶樣並培養24h以後 ,用染色劑顯色或用展開劑展開顯出水解區,利用水解直徑和酶活力關系測定酶活力。