‘壹’ 将目的基因导入受体细胞的方法有哪些
常用方法:基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌,枯草杆菌,土壤农杆菌,酵母菌和动植物细胞等。其中,对于细菌或植物细胞,常用质粒作为载体将目的基因导入细胞内;动物细胞则用显微注射的方法将目的基因导入动物受精卵的雄性原核中。
过程:用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞,主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如,如果运载体是质粒,受体细胞是细菌,一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后,就可以随着受体细胞的繁殖而复制,由于细菌的繁殖速度非常快,在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
‘贰’ 基因克隆的方法主要有哪几种,简述各种方法的原理和用途
基因克隆的方法主要有:平板划线克隆法、液体克隆法、PCR扩增克隆法和基因重组克隆技术。下面详细介绍各种方法的原理和用途:
平板划线克隆法:
原理是通过将微生物细胞在固体培养基表面划线分离,通过单菌落的形成来实现基因的克隆。这种方法适用于微生物的基因克隆。操作简便,能够直观观察克隆效果。
用途:主要用于微生物学领域,如细菌、真菌等基因的克隆和分离。特别适用于从复杂的微生物群体中分离出特定的菌株或基因。
液体克隆法:
原理是在液体培养基中通过细胞的增殖来实现基因的克隆。通过细胞在液体环境中的增殖,达到大量复制基因的目的。
用途:适用于大规模生产细胞系或需要培养细胞以进行进一步研究的场合,如蛋白质表达等。同时,也可用于从细胞中提取特定基因或进行基因功能研究。
PCR扩增克隆法:
原理是利用聚合酶链式反应技术,通过特定的引物对目标基因进行选择性扩增,从而实现基因的克隆。PCR技术具有高灵敏度和特异性,能在短时间内大量扩增目标基因。
用途:广泛应用于分子生物学研究,用于从复杂的基因组中扩增特定的基因片段,如基因诊断、法医鉴定、疾病研究等。此外,PCR技术也常用于基因工程中的基因表达调控研究。
基因重组克隆技术:
原理是通过将目的基因与载体结合,然后导入受体细胞中进行扩增和表达。这种技术可以实现跨物种的基因克隆和基因功能研究。
用途:广泛应用于基因工程领域,如转基因动植物制备、基因治疗、药物研发等。基因重组克隆技术是实现基因功能研究和应用的重要手段。
总之,以上四种基因克隆方法各具特色,根据研究目的和对象的不同选择合适的方法至关重要。随着技术的不断进步,这些方法在生命科学和基础研究领域将发挥更加重要的作用。