食源性致病菌检测方法

Ⅰ 如何实现快速检测及有效控制沙门氏菌

沙门氏菌(Salmonella)是一种革兰氏阴性肠杆菌, 也是肠杆菌科中最主要的食源性致病菌。据有关资料统计由沙门氏菌引起的疾病病例在病原菌食源性疾病病例中所占比例已超过三分之二，2007年发生的“ 花生酱事件”以及 2008 年发生的“ 西红柿 事件”等[1]沙门氏菌中毒事件的发生也使得食品中沙门氏菌的检测受到人们的普遍关注。本文主要是对食品中沙门氏菌的传统检测方法以及后续建立的以分子生物学、免疫学、生物传感器和电化学为基础的快速检测方法进行了系统的综述，旨在为该致病菌的检测方法的研究应用提供一定的参考。
1、 传统的检测方法（国标法）
目前, 我国对食品中沙门氏菌的检测大多采用GB 4789.4-2010《食品微生物学检验 沙门氏菌检验》对食品样品进行检测，这种传统的培养方法可分为前增菌、增菌、分离培养、生化试验和血清学鉴定等步骤进行。虽然传统培养法可靠性高，但是其操作繁琐且耗时费力，并不能满足食品快速检测的要求。
2、分子生物学检测方法
2.1聚合酶链反应技术
PCR技术是一项敏感性高、特异性强且快速准确的微生物检测技术，也被许多学者用于对食品中沙门氏菌进行检测和研究。汪琦等[2]就采用传统培养方法 、BAX(r)方法和PCR 方法 3 种方法对沙门氏菌进行检测。在常规PCR的基础上宋东晓[3]建立了检测食品中沙门氏菌的新的PCR方法——多重PCR。此外其他新的PCR技术也运用于食品中沙门氏菌的检测，钟伟军[4]通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索,建立了检测沙门氏菌的核酸荧光定量PCR方法，此研究为食品中沙门氏菌快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。
2.2核酸探针技术
核酸探针技术是根据核苷酸碱基互补的原理,在已变异的DNA样品中加入用同位素等标记的DNA特异片段，在一定条件下两片段进行杂交从而达到检测DNA的目的。此技术不仅简便、快速而且敏感性高、特异性强，已用于食品中沙门氏菌的检测。Almeida等[5]通过建立一种新颖的肽核酸探针结合荧光原位杂交方法对血液、粪便、水以及婴儿奶粉样品中沙门氏菌进行了检测，准确度高达 100%。
2.3基因芯片技术
基因芯片技术是利用已知核酸序列的探针与靶核苷酸序列杂交，然后通过信号检测对其进行定性与定量分析，在沙门氏菌等各种致病菌的分析检测中有很好的应用前景。饶宝等[6]通过建立检测致病菌的基因芯片检测方法，设计了通用引物和特异性探针: 沙门氏菌探针、大肠杆菌探针和金黄色葡萄球菌探针,实现了同时检测并区分沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的目的。祝儒刚等[7]运用多重 PCR 结合基因芯片技术建立了检测肉及肉制品中的大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌等5种食源性致病菌的快速检验方法。
2.4噬菌体裂解技术
噬菌体有特异性裂解细菌的作用。张碧波等学者利用此技术进行沙门氏菌
快速检测，结果和其他学者相同，据此得出特异性噬菌体可以检测出沙门氏菌，此法方便可行。姜琴等[8]利用噬菌体裂解对150份食品样品进行快速检测，结果说明肠杆菌科噬菌体组合对培养10h的沙门氏菌敏感性和特异性较高，这对实现沙门氏菌实时、快速而准确的检测有重要意义。
2.5环介导等温扩增技术（LAMP）
环介导等温扩增技术是2000年Notomi等开发的一种新的恒温核酸扩增方法,此方法的特点是特异性强、灵敏度高且简单、快速,适合对大规模样品的快速检测[9]。李佳桐[10]通过实验建立了沙门氏菌的LAMP检测方法,并将此方法与常规PCR进行比较,结果显示：LAMP方法对沙门氏菌的检测恒温65℃下只需要40min,只扩增沙门氏菌,不会扩增其他革兰氏阴性菌,最低可检出浓度10cfu/mL,比常规PCR的最低检出浓度高1个数量级,通过添加荧光染料SYBR Green Ⅰ,能够快速简便的观察检测出绿色的阳性结果十分明显的区别于橙色的阴性结果。
3、免疫学方法
3.1酶联免疫吸附技术
酶联免疫吸附法简称 ELISA， ,此技术敏感性高 ,不需特殊设备 ,结果观察简便，早在1977年就有报道将酶联免疫吸附法用于食品中沙门氏菌的检测。伍燕华等[11]设计捕获抗体和检测抗体，建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法对食品中的沙门氏菌进行检测。张帅等[12]建立双抗夹心ELISA体系，检测模拟污染肉样中沙门氏菌,其检测限为800CFU/g，等均并与其他血清型沙门氏菌、单增李斯特菌等菌均无交叉反应,特异性良好。
3.2免疫荧光标记技术
免疫荧光标记技术是根据抗原抗体的特异性反应，将荧光素标记在已知抗原(或抗体)上,与特异抗体(或抗原)结合后产生荧光，可用来定位抗原或抗体、并通过定量分析，确定测定含量。叶明强[13]基于纳米免疫磁珠富集,免疫量子点标记,建立了一种食品中沙门氏菌的含量进行快速检测的方法，研究出了一种新型的免疫荧光食源性致病菌检测技术。
3.3斑点免疫金渗滤法
免疫胶体金技术是以胶体金作为标记物结合免疫原理的一种应用于抗原抗体的新型技术，该技术运用最广泛的就是斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。孔繁德等及曹春梅等都利用此技术对沙门氏菌的快速检测进行了研究，曹春梅等[14]是利用斑点免疫金渗滤法对沙门氏菌O9抗原进行了研究，结果表明此法简单、快速，适合推广运用；孔繁德等[15]是通过建立直接检测沙门氏菌的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒对该菌进行了研究。
3.4免疫磁性分离技术
免疫磁珠分离技术是将特定病原体的单抗或多抗与磁珠微球偶联，并通过抗原抗体反应形成磁珠，在外加磁场作用下磁珠会发生定向移动，从而达到分离目标病原体的作用。食品样品中致病菌含量很少，常规的方法是很难从中分离出来的，借助免疫磁性分离技术可以达到快速分离的目的。王海明等[16]应用磁免疫技术建立快速检测食源性沙门氏菌的方法，结果表明此方法能对食品基质中的目标菌进行快速有效的富集,其检测限<10cfu/25g,检测周期约为40小时。胡霏[17]也通过实验针对鼠伤寒沙门氏菌建立免疫磁分离技术结合荧光层析技术的快速检测方法。
4、生物传感器技术
生物传感器是利用一些生物活性物质如酶 、多酶体系 、抗体等做为敏感器件，然后配以适当的信号传导器所构成的分析检测的工具。我国学者已采用此法对沙门氏菌的抗原、抗体的免疫吸附进行检测，并已用于快速检测食品中致病的沙门氏菌，而仅需 1h 完成，达到了快速的检测目的。宁毅[18]在对碳纳米管性质研究的基础上,结合分子探针构建了碳纳米管生物传感器，并将其用于沙门氏菌的检测，结果显示所构建的传感器灵敏度高、特异性强、稳定性好。
5、电阻抗技术
电阻抗法是近年发展起来的一项生物学技术，因为具有检测速度快、灵敏度高、准确性好等优点，目前此法已用于食品中沙门氏菌检测检验并已通过美国公职分析化学协会(AOAC)认可。陈广全等[19]建立了电阻抗法快速检测食品中沙门氏菌的方法，并将其与常规培养法进行比较，对食品中的沙门氏菌属进行检测,结果表明电阻抗法比传统培养法更加快速、可靠。
6、总结
综上所述，沙门氏菌检验技术正从传统的培养方法向分子检测方法改进，并向仪器化、标准化、自动化方向发展，并且食品安全、致病菌等问题对人类健康以及生活环境都造成了严重威胁，加强沙门氏菌检测势在必行。目前沙门氏菌快速检测技术大多具有检测迅速、灵敏度高、特异性强等特点，此外这些方法还具有各自的优点和局限性，在未来发展过程中需要我们不断改进和创新，建立更成熟可靠、方便快捷的沙门氏菌快速检测技术。

Ⅱ 食源性致病菌名词解释

食源性致病菌是可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌。致病性细菌直接或间接污染食品及水源，人经口感染可导致肠道传染病的发生及食物中毒以及畜禽传染病的流行。食源性致病菌是导致食品安全问题的重要来源。常见食品致病菌主要有痢疾杆菌，致病性大肠杆菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、炭疽杆菌、鼻疽杆菌、结核菌、布氏杆菌、猪丹毒杆菌等。

Ⅲ 食源性致病菌实验室管理内容包括哪些

菌落总数、大肠菌群可以在生物安全一级实验室检验，致病菌必须在生物安全二级实验室才能检验！

Ⅳ 沙门氏病菌是什么

沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌。

沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种（或菌株）。按其抗原成分，可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌组。

其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等。

除伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引起人类的疾病外，大多数仅能目引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病，但有时也可污染人类的食物而引起食物中毒。

(4)食源性致病菌检测方法扩展阅读：

沙门氏菌病

1，肠热症：是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。

典型伤寒病的病程较长。细菌到达小肠后，穿过肠粘膜上皮细胞侵入肠壁淋巴组织，经淋巴管至肠系膜淋巴结及其他淋巴组织并在其中繁殖，经胸导管进入血流，引起第一次菌血症。此时相当病程的第1周，称前驱期。病人有发热、全身不适、乏力等。

细菌随血流至骨髓、肝、脾、肾、胆囊、皮肤等并在其中繁殖，被脏器中吞噬细胞吞噬的细菌再次进入血流，引起第二次菌血症。此期症状明显，相当于病程的第2～3周，病人持续高热，相对缓脉，肝脾肿大及全身中毒症状，部分病例皮肤出现玫瑰疹。

存于胆囊中的细菌随胆汁排至肠道，一部分随粪便排出体外。部分菌可再次侵入肠壁淋巴组织，出现超敏反应，引起局部坏死和溃疡，严重者发生肠出血和肠穿孔。肾脏中的细菌可随尿排出。第4周进入恢复期，患者逐渐康复。

典型伤寒的病程约3～4周。病愈后部分患者可自粪便或尿液继续排菌3周至3个月，称恢复期带菌者。约有3%的伤寒患者成为慢性带菌者。副伤寒病与伤寒病症状相似，但较轻，病程较短，约1～3周即愈。

2，急性肠炎(食物中毒):是最常见的沙门氏杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等引起。系因食入未煮熟的病畜病禽的肉类、蛋类而发病。潜伏期短，4～24小时，主要症状为发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻。细菌通常不侵入血流，病程较短，2～4天内可完全恢复。

3，败血症：常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。病菌进入肠道后，迅速侵入血流，导致组织器官感染，如脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、肾盂肾炎、心内膜炎等。出现高热、寒战、厌食、贫血等。在发热期，血培养阳性率高。

Ⅳ 食源性致病菌的快速检测方法有哪些

检测致病菌大概有如下几种方法。
1 传统生物学方法，按照标准检测，最麻烦，最传统，但是最经典，可作为其他方法之验证。
2 显色培养基方法，用国外进口显色培养基检测，比较方便，目前最流行，使用简单，也不贵。
3 胶体金试纸条检测，购买国外进口试纸条，现场检测，这种方法10分钟可以检测到结果。但是检测灵敏度偏低。
4 ELISA，酶联免疫实验。目前只有国外进口，欧美四家大公司垄断了全球95%以上的市场，一个96孔试剂盒，售价高达5000-6000元，非常无奈，但是是国外最流行的快速筛选技术，检测灵敏度、检测周期都比较理想，不过国内现在有公司专业在做这方面的试剂盒了，估计价格很快会降下来，可能是将来主流的检测技术了，部分已经写进国标了。
5 IC-PCR，免疫捕捉PCR，用抗体特异性识别捕捉，之后再PCR扩增。最大的优势是，病原经过抗体识别、PCR检测双重检测，可一次鉴定到种，检测灵敏度可以达到十的两次方，不用核酸提取，所有反应在一个PCR管里进行，减少了病原的损失，缺点是检测时间大致在4个小时，是一张理想的验证手段。
6 Direct-PCR，增菌后直接PCR，比较简单的验证手段，增菌后直接扩增，受PCR检测体系的现实，灵敏度偏低，但是取决于样品中的菌含量。
7 Nested-PCR，两对引物巢式PCR。两对引物两次扩增，最大的优势是检测准确性、灵敏度可绝对保障，劣势是检测时间较长。
8膜过滤PCR，利用病原富集装置，富集之后检测，最笨的一种方法，但是是最实用的，病原经过微孔滤膜过滤后，可高效富集病原 ，之后去检测，大大提高检测灵敏度。
9 BIO-PCR，培养增菌后PCR扩增，这个技术只能做研究用了，就是分离培养后，用PCR检测，乏善可陈。
10 IMS-PCR，免疫磁珠PCR，用免疫磁珠捕捉，之后进行PCR，用磁珠富集样品中的病原，之后直接PCR扩增，非常实用的方法，主要是可以富集病原。
11 BAX快速检测系统，按照系统说明书操作。贵族实验室用的东西，灵敏度和其成本、假阳性一样出色。
12 RiboPrinter快速检测系统，按照系统说明书操作。同上，大同小异。

Ⅵ 沙门氏菌很可怕吗，它是什么东西

沙门氏菌很可怕，它是一种常见的食源性致病菌。沙门氏菌会发病的病原体隶属肠杆菌科，按其抗原成分，可分为甲、乙、丙、丁、戊这五种基本菌组。沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引发的对人类、家畜以及野生禽兽不同形式的总称。感染沙门氏菌的人或携菌者的粪便不小心污染食品的话，可使人发生食物中毒。对于沙门氏菌要进行有效的预防，餐前、便后、接触食物前，触摸过动物或生蛋后应仔细洗净双手。及时扑灭并阻隔苍蝇等病媒，如遇被苍蝇沾染、过期或腐败的不洁食物均应马上丢弃，禁忌食用。处理生食和熟食的砧板要彼此分开。而食物要熟透再吃，尤其是鸡蛋与家禽这个类别。非现做现吃的食物裹以保鲜膜仔细包覆后，放进冰箱冷藏保存，再次食用前应加热至煮熟。

Ⅶ 1、为什么金黄色葡萄球菌等食源性致病菌的国家检测标准中,常采用生理生化方法

采用生理生化方法是因为便宜、简单啊。例如常见食品指标菌落总数，反映的是一定量的样本中微生物的个数，如果采用生物方法，则只需要采样并涂抹培养基，在一定温度条件下培养一段时间，就能用肉眼数出菌落总数的指标，而菌落总数就能代表样品中微生物的个数。这项检测并需要太长的操作时间，也不需要太多的检测成本。而使用物理化学的方法检测则非常困难，且目前没有可行的方法，即便是有估计也很贵。
而您所说的金黄色葡萄球菌也是一样的，采用生物法检测，只需要将菌落养出来，金黄色葡萄球菌的菌落特征是非常明显的，肉眼就能判断。而要采用化学方法，则必须检测金黄色葡萄球菌产生的毒素，而这些毒素通常都是极其微量的，要检测出来则需出动非常精密的仪器。这便意味着高昂的成本和极大的检测不确定性（因为再高端的仪器也有误差，对痕量待测物误差会更大，而且部分反应还可能有假阳性）。
所以对于食品中的生物指标，国标常采用生化方法，主要还是因为方便和便宜。如果采用物理、化学方法，可能很多检测站就没有检测的条件了，过于昂贵且效果一般。
如有用请采纳。

Ⅷ 致病菌限量标准gb29921

一、正面回答
GB29921属于通用标准，适用于预包装食品。非预包装食品的生产经营者应当严格生产经营过程卫生管理，尽可能降低致病菌污染风险。罐头食品应达到商业无菌要求，不适用于该标准。
二、详情分析
GB29921中规定了肉制品、水产制品、即食蛋制品、粮食制品、即食豆类制品、巧克力类及可可制品、即食果蔬制品、饮料、冷冻饮品、即食调味品和坚果籽实制品11类食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌5种致病菌的限量，同时对检测方法也作出了规定。
三、食品中的致病菌有哪些
1、沙门氏菌，沙门氏菌是细菌性食物中毒的主要致病菌，GB29921对所有食品设置了沙门氏菌限量规定；
2、单核细胞增生李斯特氏菌，单核细胞增生李斯特氏菌也是重要的食源性致病菌；
3、大肠埃希氏菌，GB29921规定了熟牛肉制品和生食生肉制品、生食果蔬制品中大肠埃希氏菌的限量；
4、副溶血性弧菌，GB29921也规定了水产制品、水产调味品中副溶血性弧菌限量。