微生物菌落总数快速检测方法

A. 微生物快速检测技术

1 即用型纸片法
3M公司的perrifilmTM Plate系列微生物测试片,可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数。由RCP Sci-entific Inc公司开发上市的Regdigel系列,除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门菌、葡萄球菌的产品 ,这两个系列的产品
与传统检测方法之间的相关性非常好。
2、PCR 技术
4 基因探针技术
选择、鉴定用培养基法
在培养基中加入特异性的生化反应底物、抗体、荧光反应
底物、酶反应底物等,可使目标培养物的选择、分离、鉴定一次
性完成。如生物一梅里埃公司的BP + RPF (兔血浆+纤维蛋
白原)培养基,可在24 h内鉴定金黄色葡萄球菌[ 8 ] 。Merk公
司的chro2mocult Coliform Agar培养基上,大肠杆菌为墨绿色
至紫色菌落,沙门菌为淡绿色至蓝绿色菌落。柠檬酸杆菌和
克雷伯杆菌为橙红色至红色菌落, 其他肠道菌为无色菌
落[ 9 ]。
5 ATP生物发光法是近年发展较快的一种用于食品生产加
工设备洁净度检测的快速检测方法。利用ATP生物发光分
析技术和体细胞清除技术,测量细菌ATP和体细胞ATP, 细
菌ATP的量与细菌数成正比,用ATP生物发光分析技术检测
肉类食品细菌污染状况或食品器具的现场卫生学检测,都能
够达到快速适时的目标[
6、 细菌直接计数法
主要包括流式细胞仪( flow cytometry, FCM)和固相细胞
计数( solid phase cytometry, SPC)法。FCM通常以激光作为发
光源,经过聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上,被荧光染
色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。光散射
信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的强度则代表
了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,由此可
通过仪器检测散射光信号和荧光信号来估计微生物的大小、
形状和数量。流式细胞计数具有高度的敏感性,可同时对目
的菌进行定性和定量[ 18 ]。目前已经建立了细菌总数[ 19 ]、致
病性沙门菌、大肠埃希氏菌[ 20 ]等的FCM检验方法。固相细
胞计数可以在单个细胞水平对细菌进行快速检测[ 21 ]。滤过
样品后,存留的微生物在滤膜上进行荧光标记,采用激光扫描
设备自动计数。每个荧光点可直观地由通过计算机驱动的流
动台连接到ChemScan上的落射荧光显微镜来检测,尤其对于
生长缓慢的微生物,检测用时短使该方法明显优于传统平板
计数法

B. 食品卫生微生物检验菌落总数测定

上食品伙伴网查吧，一般不同产品检测有一定的差异但大体方法都是一样的！
.1 食品检样
3.2 培养基
平板计数培养基，无菌生理盐水
3.3 其它
无菌培养皿，无菌移液管，无菌不锈钢勺。
4 流程

5 步骤
5.1 取样、稀释和培养
5.1.1 以无菌操作取检样25g（或ml），放于225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1min，制成1:10的均匀稀释液。
5.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1:100的稀释液。
5.1.3 另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支10ml吸管。
5.1.4 根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
5.1.5 稀释液移入平皿后，将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
5.1.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
5.2 菌落计数方法
作平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平皿平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不要超过24h。
5.3 菌落计数报告方法
5.3.1 平皿菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平皿作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿平均数，其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平皿后乘以2以代表全皿菌落数。

表1 稀释度选择及菌落数报告方式
2、不同稀释度的选择及报告方法
1）首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见实例1）
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如实例2）。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如实例3）。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见实例4）。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见实例5）。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见实例6）。
5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之，（见实例7）。
6）若所有稀释度的均无菌落生长，则以<1乘以稀释倍数报告之。
7）菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。
稀释度选择及菌落总数报告方式
实例不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度 菌落总数 报告方式
10-1 10-2 10-3 菌落数之比 （CFU/mL） （CFU/mL）
1 1365 164 20 — 16400 16000或1.6×104
2 2760 295 46 1.6 37750 38000或3.8×104
3 2890 271 60 2.2 27100 27000或2.7×104
4 150 30 8 2 1500 1500或1.5×104
5 多不可计 1650 513 — 513000 510000或5.1×104
6 27 11 5 — 270 270或2.7×104
7 多不可计 305 12 — 30500 31000或3.1×104
8 0 0 0 — < 1×10 < 1×10

C. 微生物检测菌落总数一般需要什么仪器

一、菌落总数介绍：
菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法
菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：
GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》
SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》
三、说明
（一）样品的处理和稀释：
1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。
用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。
在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。
5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。
（二）倾注培养
1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
2．倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。
倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应

D. 微生物检验菌落总数计算方法是什么

7.1
菌落总数的计算方法
7.1.1
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平
均值乘以相应稀释倍数，作为每 g（mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
（1）

式中：
N——样品中菌落数；
∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
。
d——稀释因子（第一稀释度）
若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可
7.1.3
记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计
7.1.4
算。
7.1.5
若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在 30 CFU～300 CFU 之间，
其中一部分小于 30 CFU 或大于 300
7.1.6
CFU 时，则以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
这里有个例子参考一下以上是<食品安全国家标准食品微生物学检验 菌落总数测定>中的计算方法。

E. 微生物快速检测方法（比如应用显色培养基）有哪些求强人

菌落总数检测：10版国标：48小时能出。直接平板法。
大肠菌群，大肠杆菌，肠杆菌科：10版国标24小时能出。平板法或3M纸片法。
霉菌酵母：3M纸片法。比国标快。
沙门氏菌：VIDS方法，48小时出结果，阳性菌需要进一步确定，时间延长48小时。
金黄色葡萄球菌：平板法，48小时能出结果，阳性菌需要进一步鉴定时间延长48小时。
其他：志贺，李斯特，溶血，副弧，弯曲...之类按国标都有自己的时间，不过可以上VITEK.TWO，时间较短，72-96小时能出结果。成本较贵。

F. 微生物中勺子的菌落总数怎么检测

• 1.1 固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,
  8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式
  均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

• 1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶
  (瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。

• 1.3 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液
  的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其
  GB4789.2—2016
  3
  混合均匀,制成1∶100的样品匀液。

• 1.4 按6.1.3 操作,制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1 次1 mL 无菌吸管或
  吸头。

• 1.5 根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在
  进行10倍递增稀释时,吸取1mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取
  1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

• 1.6 及时将15mL~20mL冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱
  中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。

• 2 培养

• 2.1 待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ℃±1培养48h±2h。水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h。

• 2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层
  琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按6.2.1条件进行培养。

• 3 菌落计数

• 3.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以
  菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。

• 3.2 选取菌落数在30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU
  的平板记录具体菌落数,大于300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的
  平均数。

• 3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释
  度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以
  2,代表一个平板菌落数。

• 3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

具体步骤你可以参考 GB 4789.2-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定

G. 菌落总数的检验方法

菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：
GB4789.2-2010 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》

H. 能不能介绍几种微生物快速检测仪2小时内出结果的有没有主要是检测菌落总数、大肠菌群、致病菌.

这个要求目前没有能达到的,菌落总数、大肠菌群且不说,致病菌的检测用vitek II 也需要前增菌、纯化,机器检测时间取决于你纯化的纯度.
不过,科研方面已经有人在搞利用机器识微生物“相貌”特征的研究,据我看到的文献,也需要增菌,不然很容易被忽略掉.

I. 菌落总数如何检验啊

菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每mL（或每克）原始样品中所含细菌菌落总数。菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每mL（或每克）原始样品中所含细菌菌落总数。

基本操作一般包括：样品的稀释——倾注平皿——培养48小时——计数报告。检验方法可参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验
菌落总数测定》，SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》。