放线菌测量使用什么方法

❶ 跪求 土壤微生物的测定：涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤（详细）

涂布平板法实验器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制 牛肉膏 0.3g
蛋白胨 1g
氯化钠 0.5g
琼脂 2g
自来水 100mL
pH 7.0～7.2 灭菌 1.05kg/cm2，22min
配制具体步骤
1．称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
3．调pH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
4．过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。很多都是不需要过滤的。
5．分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
6．加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。
7．包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8．灭菌
将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
9．搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10．无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。

1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。
2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）
3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。
四、实验方法
1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。
图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。
（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。
（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

❷ 如何对土壤中细菌、放线菌及霉菌数量进行测定，要求设计实验方案！求指点，谢谢啦！

【实验内容及步骤】
一、分离
1. 制备土壤悬液及系列稀释液
称取土壤1g，放入99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－2的土壤悬液。另取装有无菌试管5支，用记号笔编上10－3、10－4、10－5、10－6 、10－7 。在每只试管中用无菌吸管加入4.5ml无菌水。取已稀释成10－2的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－3土壤稀释液。同法依次连续稀释至10-4、10-5、10-6、10-7土壤悬液。
2. 倒平板
将已经配制好的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、薯仔培养基在电热炉上熔化。在无菌工作台的酒精灯旁，将培养基倒入培养皿中，加盖后轻轻摇动使其在培养基上均匀铺开，平置于桌面上，待其凝固后即为平板，注意保证无菌操作。
3. 涂布法分离各类微生物
将0.2ml菌悬液滴在平板表面中央位置，右手拿无菌涂布器平放在平板表面，将菌悬液先沿一条子线轻轻的来回推动，是之均匀分布，然后改变方向沿另一直线来回推动，平板边缘可改变方向用涂布器再涂布几次。
4. 培养（incubation）
28~30C, 24~48hr
5. 观察记录结果、记数（counting plates）：细菌数量=数出的菌落数/稀释度。例如，10-5稀释度时菌落数为125个，则细菌数量=125/10-5=1.25*107个/ml。

这个是大学的实验，用的方法是稀释涂平板计数。

❸ 测定土壤中真菌细菌放线菌数量，怎么测定

实验假设：土壤微生物对淀粉有分解作用(或土壤微生物对淀粉无分解作用)
(2)放入等量淀粉糊，在A烧杯中加入适量土壤浸出液，在B烧杯中加入适量蒸馏水
(4)碘液 斐林试剂
(5)①．与B 1 、B 2 相比，A 1 无蓝色出现，A 2 出现砖红色沉淀(或A 1 、A 2 的颜色分别与B 1 、B2 相同，A 1 出现蓝色，A 2 无砖红色沉淀)
②．A 1 、A 2 的颜色分别与B 1 、B 2 相同，A 1 出现蓝色，A 2 无砖红色沉淀(或与B 1 、B 2 相比，A 1 无蓝色出现，A 2 出现砖红色沉淀)(说明：其他正确答案也可，但实验现象分析必须与实验步骤相一致)

❹ 印片法和插片法用于观察放线菌各有何优点

印片法：主要用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等，方法简便。
插片法：可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。

❺ 放线菌的生长曲线怎么测定

由于放线菌是丝状细菌，好氧，在摇床液体培养过程容易形成菌丝球，而呈不均匀分布，所以不能用单细胞细菌的测OD值的方法绘生长曲线。

可直接测细胞干重。即设多个三角瓶，装量一样如250毫升三角瓶装20毫升，每个时间高三个平行。每隔一小时取样测放线菌细胞干重。

可用过滤法也可以用离心法，无菌水清洗再离心。重复两次。之后于摄氏105度干燥一小时或以上，重量不再改变为止。然后以细胞干重为Y轴，培养时间为X轴绘曲线。

可测蛋白含量。用凯氏定氮法检测菌丝含氮量，折算成蛋白含量。菌丝收集与处理同上。

供参考。

❻ 几种观察放线菌方法的优缺点分别是什么

1、印片法：主要用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等,方法简便。

2、插片法：可观察到放线菌自然生长状态下的特征,而且便于观察不同生长期的形态。

3、水封片：比较普通的方法,操做简单.水封片发是插片法的延伸。

4、玻璃纸法：又助于观察基内菌丝、气生菌丝和弯曲状或螺旋状的孢子丝.观察棘孢小单孢菌时注意把视野调暗。

❼ 用来测定细菌生长量的直接计数法和间接计数法一般采用什么具体的方法

显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方 法。 直接计数法中常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待 测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1- 3-1)。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微 生物总数。直接计数法所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数 的同时能观察到所研究微生物的形态特征，其缺点是难以计数微小的 细菌。这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。 间接计数法最常用的是稀释平板计 数法，它是根据微生物的培养特征而设计 的计数方法。这种方法在样品中含菌数较 少的情形下，也可以完成计数。 应用稀释平板计数法计数时，需要 将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽 量使样品中的微生物细胞分散开。再取一 定稀释度、一定量的稀释液接种到平板 中，使其均匀分布于平板中的培养基内； 或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至 45℃左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培 养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养后， 就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样 的一个菌落就代表着一个微生物个体。统 计培养基中出现的菌落数，即可推算出检 测样品中的活菌数。 FOR EXAMPLE:] 土壤中好气性细菌的计数 土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的，这些数量众多的 微生物对提高土壤肥力有重要作用。因此，测定土壤中的含菌量可以 作为判定土壤肥力的一个重要指标。 材料器具 土壤样品；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录二)、无菌水；培养皿、 移液管、天平、锥形瓶、试管、酒精灯、恒温培养箱、摇床等。 活动程序 1.制备土壤稀释液 取土壤表层5～10 cm 处的土样。准确称取1 g 土样，放入盛有 99 mL 无菌水的锥形瓶(250 mL，放有小玻璃珠)中，用手或摇床振荡 20 min，即制成102 倍的稀释液。 用1 mL无菌移液管，吸取10 2倍稀释液0.5 mL，移入装有4.5 mL 无菌水的试管中，配制成103 倍稀释液。 用同样的方法可制成稀释倍数为104、105、106 的系列稀释菌液 (图1-3-2)。 图 移液时，要将移液管插入液面，吹吸3 次，每次吸上的液面要高 于前一次，让菌液混合均匀并减少稀释中的误差。每配一个稀释度要 换用一支移液管。 2.取样及倒平板 将无菌培养皿编号，依次为104、105、106，每一号码设置三个 重复。 用无菌移液管三支，分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释 液各0.2 mL，注入到相应编号的培养皿中(每个稀释倍数各三个培养皿)。 将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化，待冷却至45～50 ℃左 右，倾入到无菌培养皿中，每皿约15 mL，轻轻转动培养皿，使土壤 稀释液与培养基混合均匀。 3.培养 将上述接种好的平板培养基冷却后，倒置放入28～30 ℃的恒温 培养箱中培养24～36 h，直至长出菌落为止。 4. 观察记录 将实验中得到的菌落数填入表1-3-1。 结果分析 1.选取具有合适菌落数的稀释倍数并计数。 在计算结果时，从接种的3 个稀释度中选择一个合适稀释倍数， 统计出菌落数(图1-3-3)。选择的原则是： 过 (1) 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～300 个菌落为 宜。霉菌以每个培养皿内有10～100 个菌落为宜。 (2) 同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不太悬殊。 2.将统计出的菌落数按下列公式计算，得出每克样品菌数。 每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数

❽ 放线菌的检测方法

首先取定量复合肥（一般是1克）然后根据放线菌的含量用无菌水稀释到一定倍数，滴到显微镜专用计数玻片上，计数。在放线菌专用培养基上进行画线分离培养，形成菌落后，可以知道放线菌所含比例，及大致含量，也可以进行纯化培养！但技术性较强！

❾ 有一土壤样品,要测定每克土壤中细菌、放线菌和真菌的活菌数,用什么方法最好

在高氏培养基中培养放线菌培养2-3天能够长出菌落。
取9套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10-3、10-4、10-5）、组别、姓名、操作日期等。每个稀释度做三个培养皿。然后在每皿中倒入已溶化并冷至50℃左右的高氏一号培养基15~20ml左右，待冷凝成平板。

❿ 进行菌种质量检测的常用方法有哪些

1、直接观察。对引进菌种观察包装是否合乎要求，棉塞有无松动，试管、玻璃瓶和塑料袋有无破损，棉塞和管、瓶或袋中有无病虫侵染，菌丝色泽是否正常，有无发生变化。然后在瓶塞边作深吸气，闻其是否具备特有的香味。原种和栽培种可取出小块菌丝体观察其颜色和均匀度，并用手指捏料块检验含水量是否符合标准。

2、显微镜检验。若菌丝透明，呈分枝状、有横隔、锁状联合明显，再加上具有不同品种固有的特征，则可认为是合格菌种。

3、观察菌丝长速。将供测的菌种接入新配制的试管斜面培养基上，置于最适宜的温、湿度条件下进行培养，如果菌丝生长迅速、整齐浓密、健壮有力，则表明是优良菌种，否则即是劣质菌种。

优质菌种的标准

食用菌的种类虽然繁多，但从总体上看，每一个优良菌种均有＂纯、正、壮、润、香＂的共性。其标准是：

1、菌种的纯度要高，不能有杂菌感染，也不能有其他类似的菌种。

2、菌丝色泽要纯正，多数种类的菌丝应纯白、有光泽，原种、栽培种菌丝应连结成块，无老化变色现象。

3、菌丝要粗壮，分枝多而密，接种到培养基吃料块，生长旺盛。

4、培养体要湿润，与试管（瓶）壁紧贴而不干缩，含水适宜。

5、具有每品种特有的清香味，不可有霉、腐气味。