液相色譜檢測方法第三版電子版

❶ 液相色譜儀的使用方法以及注意事項有哪些!

高效液相色使用方法：
1)．過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。
2)．對抽濾後的流動相進行超聲脫氣10-20分鍾。
3)．打開HPLC工作站（包括計算機軟體和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統。
4)．進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。
5)．有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊
start，沖洗時速度不要超過10 ml/min.
6)．調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。
7)．設計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，
包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完後，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：
a.進樣前的穩流，一般2-5分鍾；
b.基線歸零；
c.進樣閥的loading-inject轉換；
d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。
8)進樣和進樣後操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完後，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完後，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩餘物。
9)．關機時，先關計算機，再關液相色譜。

❷ 高效液相色譜比例閥堵了，工程師讓用異丙醇沖，想問是沖有問題的通道還是怎麼做，求具體操作步驟

首先說一下原理：異丙醇的粘度比較高。如果是不溶性微粒，或者氣泡之類的東西堵住了管路，異丙醇可以把他們粘下來。
第二，如果是比例閥堵了。建議四個管路都沖，每個管路25%。如果是某一個管路堵了，那就單獨沖洗這一個通道就可以。
第三，沖洗方法：先把色譜柱卸下來，換上兩通。異丙醇對色譜柱有傷害。最好不要過柱子。如果系統中有流動相，先用10%的甲醇水沖洗掉，免得無機鹽遇到異丙醇之後鹽析。然後排氣，慢慢地升高流速。有可能柱壓會很高，要沖一會兒才能提高流速。我不知道工程師是怎麼說的，要多少的流速，沖多久，記得注意壓力變化。如果壓力下降了，那麼可能就是沖開了。

❸ 液相色譜儀的使用步驟

目的：制定規范的高效液相色譜儀操作、維護保養和清潔規程。
范圍：適用於Agilent 1260 HPLC。
責任：色譜檢驗工程師負責本規程執行。
內容：
1 開機
1.1 打開電腦。
1.2 打開液相色譜各個模塊的電源。
1.3 雙擊桌面「儀器—聯機」，進入聯機界面。
1.4 排氣：
1.4.1 手動旋開泵處沖洗閥（逆時針旋轉約1圈）。
1.4.2 右鍵單擊「泵」圖標區域，選擇「方法…」選項，進入泵編輯畫面，設流速：5ml/min（一般為3－5ml/min），點擊「確定」。
1.4.3 右鍵單擊「泵」 圖標，點擊「控制…」選項，選中「ON」，點擊「確定」，則系統開始沖洗，直到管線內（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止，（一般為5分鍾），切換通道繼續沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止。
1.4.4 右鍵單擊「泵」 圖標，點擊「方法…」選項，設流速：0ml/min，手動旋緊沖洗閥。
1.4.5 右鍵單擊「泵」圖標，點擊「方法…」選項，按照方法要求選擇合適比例的流動相，設流速：1.0ml/min。
1.4.6 同理右鍵單擊「柱溫箱」，「檢測器」圖標，點擊「方法…」選項，按照方法的要求設置溫度，波長，點擊「控制」 選項，「ON」打開柱溫箱和檢測器。

2 編輯方法
2.1 點擊「方法」－「編輯完整方法」開始編輯完整方法。
2.2 選中除「數據分析 」外的三項，進入下一選項卡。
2.3 方法信息：在「方法注釋」中加入方法的信息（如：This is for test!）。進入下一選項卡。
2.4 泵參數設定：在「流速」處輸入流量, 如1.0ml/min，停止時間：如10 min（該停止時間僅為做一個樣品需要的時間），按照要求選擇合適比例的流動相配比，如乙腈：水＝75：25，A為水，B為乙腈，則設置B：75％即可。進入下一選項卡。
2.5 自動進樣器參數設定: 選擇「洗針進樣」----可以輸入進樣體積和洗瓶位置，進入下一選項卡。
2.6 柱溫箱參數設定: 在「溫度」下面的空白方框內輸入所需溫度,如：40度。進入下一選項卡。
2.7 UV檢測器參數設定: 在「波長」下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm。點擊確定。
2.8 在「 運行時選項表 」中，選中「 數據採集」，點擊「確定」。
2.9 從「方法」菜單，選中「方法另存為…」，輸入一方法名，如「測試」，點擊「確定。

3 單次採集
3.1 從「運行控制」菜單中，選擇「樣品信息」選項，選擇合適的路徑，在「數據文件」中選擇 「前綴/計數器」，輸入樣品瓶的位置，點擊「確定」。
3.2 基線平穩後約10分鍾，從「運行控制」菜單中選擇「運行方法」。

4 多次數據採集
4.1 按照步驟2 編輯完整方法。
4.2 點擊「序列」－「序列表」，輸入「樣品瓶」「樣品名稱」，「進樣次數」，選擇合適的「做樣方法」
4.3 點擊「序列」－「序列參數」，選擇序列數據的保存路徑（序列會自動生成以「序列名稱－時間」為名稱的文件夾保存數據），數據建議以選擇 「前綴/計數器」保存。
4.4 從「序列」菜單，選中「序列另存為…」，輸入一序列名，如「測試」，點擊「確定。
4.5 從「運行控制」菜單中選擇「運行序列」。

5 數據分析（離線狀態使用）
5.1 雙擊「儀器 —離線」圖標 進入的離線畫面。
5.2 從「視圖」菜單中，點擊「數據分析」進入數據分析畫面。
5.3 從「文件」菜單選擇「調用信號」，選中您的數據文件名。點擊「 確定」，則數據被調出。（如預建立標准曲線，應先打開濃度較低的標樣圖譜。）
5.4 做譜圖優化：從「圖形」菜單中選擇「信號選項」。從「范圍」 中選擇「滿量程」 或「自動量程」 及合適的時間范圍或選擇「自定義量程」 調整。反復進行，直到圖的比例合適為止。點擊「 確定」。

6 積分:
6.1 從「積分」菜單中選擇「積分事件」選項，選擇合適的「斜率靈敏度」，「峰寬」，「最小峰面積」，「最小峰高」。點擊 ，自動載入積分參數。
6.2 點擊左邊「√」圖標，將積分參數存入方法並退出「積分事件」。
6.3 如積分結果不理想，則修改相應的積分參數，直到滿意為止。

7 標准曲線
7.1 點擊「校正」－「校正設置」，輸入「含量單位」。
7.2 點擊「校正」－「新建校正表」，點擊確定。輸入「化合物名稱」和「含量」，點擊「確定」，按照提示刪除其他組分。
7.3 至此完成單級校正，如要增加校正級別，應從「文件」菜單選擇「調用信號」，選中您的數據文件名（第二個標樣），點擊「校正」－「添加級別」，點擊確定，輸入「含量」，依次增加校正級別。

8 列印報告
8.1 從「報告」菜單中選擇「設定報告」選項，點擊「定量結果」框中「定量」右側的黑三角，選中「外標法」，其它選項不變，點擊「 確定」。
8.2 從「報告」菜單中選擇「列印報告」，則報告結果將列印到屏幕上，如想輸出到列印機上，則點擊「報告」 底部的「列印」鈕。
8.3 點擊「文件」－「另存為」－「方法」，把數據分析方法保存，下次分析可直接在「文件」－「調用」－「方法」下，將該方法調出使用。（調用的方法中含有積分方法，標准曲線方法和列印報告方法）

9 關機
9.1 關機前，先關紫外燈，用相應的溶劑（甲醇或乙腈）充分沖洗系統大約30分鍾。（色譜柱最終應保存在甲醇或乙腈中）
9.2 退出化學工作站，依提示關泵，及其它窗口，關閉計算機。
9.3 關閉Agilent 1260各模塊電源開關。

10 其它注意事項
10.1 當樣品運行時，切勿打開自動進樣器前遮蓋，否則進樣過程停止。
10.2 系統發生漏液時，機器會檢測到並停止進樣，狀態指示燈為紅色。檢查擦乾並安置好漏液處，擦乾漏液感測器，單擊ON按鈕，系統重新初始化。
10.3 注意紫外燈使用壽命，切勿來回開關紫外燈。

❹ 求安捷倫1260液相色譜 工作站的詳細操作方法

一、開機：

1、打開電腦；

2、打開液相色譜各個模塊的電源；

3、雙擊桌面「LC1260(Online)」，進入聯機界面；

二、排氣：

1、手動旋開泵處沖洗閥（逆時針旋轉約1圈）

2、右鍵單擊「Pump」圖標區域，選擇「Method」選項，進入泵編輯畫面，設流速：5ml/min，點擊「確定」；

3、右鍵單擊「Pump」 圖標區域，點擊「Control」選項，選中「ON」，點擊「確定」，則系統開始沖洗，直到

管線內（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止（一般為5分鍾），切換通道繼續沖洗，直到所有要用通道

無氣泡為止；

4、右鍵單擊「Pump」 圖標，點擊「Method」選項，設流速：0ml/min，手動旋緊沖洗閥；

5、右鍵單擊「Pump」圖標，點擊「Method」選項，按照方法要求選擇合適比例的流動相，設流速：1.0ml/min；（不一定是1）；

6、同理右鍵單擊「Column Comp」，「DAD」圖標，點擊「Method」選項，按照；

7、方法的要求設置溫度，波長，點擊「控制」 選項，「ON」打開柱溫箱和檢測器；

三、編輯方法：

1、點擊「Method」—— 「Edit EntireMethod」開始編輯完整方法；

2、選中除「Data Analysis 」外的三項，進入下一選項卡，選擇「Als」（自動進樣），點擊「OK」，進入下一選項；

3、選擇「Method」菜單下「Method Information」選項，在「Method Comments」中加入方法的信息（如：

This is for test!），選擇「OK」，進入下一選項；

4、泵參數設定：右鍵單擊「Pump」圖標，點擊「Method…」選項，設置「Flow」：如1.0ml/min；「Stop

Time」：如10 min（該停止時間僅為做一個樣品需要的時間），按照要求選擇合適比例的流動相配

比，選擇「OK」，進入下一選項；

5、自動進樣器參數設定：右鍵單擊「Sampler」圖標，點擊「Method」選項，選擇「Injection volume」，輸

入進樣體積，選擇「OK」，進入下一選項；

6、柱溫箱參數設定：右鍵單擊「Column Comp」，點擊「Method」選項，設置「Left」溫度（可設置溫度范

圍：低於室溫10℃-80℃），一般「Left」和「Right」溫度一致，選擇「Combined」綁定即可，「Stop

Time」選擇「As Pump /Injector」，選擇「OK」，進入下一選項；

7、UV檢測器參數設定: 右擊「DAD」 ，點擊「Method…」選項，下方的空白處輸入所需的檢測波長（可

根據需要選擇多個波長，最多可選8個波長）；「Stop Time」選擇「As Pump /Injector」；「Spectrum」

——「Store」選項下，根據需要選擇 「None」或「All（全波長掃描）」等選項，選擇「OK」，進入下一選

項；

8、編輯方法完畢，從「Method」菜單中，選中「Save Method As」，輸入一方法名，選擇「OK」，保存方

法成功。

9、單針進樣

10、從「Run Control」菜單中，選擇「Sample Information」選項，輸入「Operator Name」；在「Data File」中

選擇「Path」和 「Prefix/Counter（文件命名）」設置「Prefix（一般設置為年月日）」和「Counter」；輸

入「Location（樣品位置）」和「Sample Name」，選擇「OK」，進入下一選項；

11、基線平穩後選擇「Run Control」中的「Run Method」選項，開始進樣。

四、序列進樣：

1、選擇「Sequence」菜單下「 Sequence Table」選項，在「Confiqure Table」中選擇需要選項，一般

為「Vial(樣品瓶)」，「Sample Name(樣品名稱)」，「Method Name(方法名稱)」，「Inj/Vial（進樣次

數）」，「Sample Type（樣品類型）」，「Datafile（文件名）」和「Inj Volume（進樣體積）」；

2、點擊「Inset」生成一行，設置上述參數，選中該行，點擊「Copy」和「Paste」復制後修改相應參數，即

生成序列表，選擇「OK」，進入下一選項；

3、點擊「Sequence」菜單下「 Sequence Parameters」選項，選擇序列數據的「Path」（序列會自動生成

以「序列名稱－時間」為名稱的文件夾保存數據），數據建議選擇 「Prefix/Counter」保存；

在「Shutdown」選項下選中「Post-Sequence Command/Macro」，根據需要選擇「PUMPALL OFF（序列

結束後關閉泵）」」 「LAMPALL OFF（序列結束後關閉紫外燈）」」 「STANDBY（序列結束後關閉紫外燈

和泵）」，選擇「OK」，進入下一選項；（註：若「Path」中默認保存於C盤，則可點擊「View」，選

擇「Preferences」，根據需要添加相應的「SequenceTemplates」「Data」「Master Methods」保存路徑）

4、從「Sequence」菜單，選中「Save Sequence Template As」，輸入一序列名，選擇「OK」，即可；

5、基線平穩後選擇「Run Control」中的「Run Sequence」選項，開始序列進樣。

（註：若中途停止運行，則選擇「Run Control」中的「Stop Run/Inject/ Sequence」可保留圖譜信息，若選

擇Abort，則所有圖譜信息都丟失）

五、數據分析（離線狀態使用）：

1、雙擊「LC1260（Offline）」圖標進入的離線畫面

2、從「View」菜單中，點擊「Data Analysis」進入數據分析畫面

3、從「File」菜單選擇「Load Signal」，選中所需的數據文件名，點擊「OK」，則數據被調出。

4、譜圖優化：從「Graphics」菜單中選擇「Signal Options」。從「范圍」 中選擇「Full」或「Use Ranges」 選擇

所需「Time Range」和「Response Range」，選擇「OK」；從「Integration」中選擇「Integration Events」，調

整「Area Reject」和「Height Reject」刪除雜峰；點擊「Set Integration」圖標，可選擇性消除不需要的積

分，若想消除該操作，則選擇「Method Manual Events」上排左起第5個圖標進行移除操作即可，點擊

左邊「√」圖標，將積分參數存入方法並退出「Integration Events」。

（註：「Set Integration」圖標為）

六、標准曲線繪制：

1、選擇「Calibration」菜單下「New Calibration Table」，選擇「Automatic Setup」中「Level（即標曲中對應

的點，第一個點即為1）」和「Defanlt Amount（標准品對應點的濃度）」，選擇「OK」；

2、通過選擇「Calibration」菜單下的「Add Level」選項依次添加各點參數，若為外標法，在「ISTD」項下

選「NO」，若為內標法則選「Yes」；「#」項下對應標准品和內標無的數字的應統一；若想更改標准曲線中

的對應點；

3、選擇「Calibration」菜單下的「Recalibrate」項的「Mode」選項，選擇「Average」則表示取當前點與標曲

中對應點的平均值替代標曲中原對應點，若選擇「Replace」則表示將當前點取代標曲中對應點；

（註：修改「Defanlt Amount」中濃度單位的方法：選擇「Calibration」項下「Calibration Setting」，修

改「Amount Units」，設置濃度單位；選擇「Calibration」項下「Calibration Setting」，修改「Default

CalibrationCurve」，選擇合適的曲線類型-Type，是否過原點-Origin和各點對於標准曲線的比重-

Weight，通常選Equal）

4、調出樣品譜圖，點擊需要計算濃度的色譜峰，選擇「Report」 菜單中的「Specify Report」，選

擇「Report style」為「Detail」，點擊「OK」後選擇「列印預覽」圖標，在報告中即可體現計算結果。

七、 圖譜重疊設置：

1、選擇「File」菜單下「Overlay Signal」選項，選擇任意需要重疊的圖譜；

2、在「Signal」選項下，選擇「3D Signal Overlay」圖標（緊鄰圖譜上方左起第四個圖標），在彈出

的「Adjust Signal OverlayOptions」對話框中調節交錯時間和高度；若想移除重疊譜圖，點擊第六個圖

標。

八、信噪比等參數計算：

1、選擇「Report」菜單中的「System Suitability」項下的「Edit Noise Range」選項，設置時間范圍（超過

1min）；

2、選擇「Report」 菜單中的「Specify Report」，選擇「Report style」為「Perfomance+Noise」，點

擊「OK」後，即可預覽信噪比參數；

3、選擇「Report」 菜單中的「Specify Report」，選擇「Report style」為「Extended Perfomance」，點

擊「OK」後，即可預覽對稱性、拖尾因子等所有參數。

九、程序運行時檢測出峰情況：

選擇「File」菜單下的「Snapshot」選項即可。

十、列印報告：

1、從「Report」菜單中選擇「Report Mode」，選擇「Use Classic Reporting」；

2、從「Report」菜單中選擇「列印報告」，則報告結果將被列印。

十一、關機：

1、沖洗色譜柱和系統後，退出化學工作站及其它窗口，關閉計算機；

2、關閉Agilent 1260各模塊電源開關。

(4)液相色譜檢測方法第三版電子版擴展閱讀

定義：液相色譜是一類分離與分析技術，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如

紙、薄板和填充床等。在色譜技術發展的過程中．為了區分各種方法，根據固定相的形式產生

了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

基本原理：使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由

於被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到

不同的峰信號，最後通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。高效液相色譜作為一

種重要的分析方法，廣泛地應用於化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色

譜沒有本質的差別，它的特點是採用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適於

分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。

高效液相色譜系統主要由流動相儲液瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成，其整體

組成類似於氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。高效液相色譜的輸液泵要求

輸液量恆定平穩，進樣系統要求進樣便利、切換嚴密。同時，由於液體流動相黏度遠遠高於氣體，

為了減低柱壓，高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小於氣相色譜柱。

❺ 高效液相色譜分析法的原理是什麼

它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內，在柱內各成分被分離後，依次進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。

❻ 液相色譜工作原理

系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式列印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點。
1．進樣系統
液相色譜儀
一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恆定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
2．輸液系統
該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X10Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高解析度、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存器和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質（即使僅有一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。
3.分離系統
該系統包括色譜柱、連接管和恆溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內徑為2～5mm，由"優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）．固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點，加之其表面經過機械塗漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學法偶聯各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素（PSA）後，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。 另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、緻密狀態，極易降低渦流擴散效應。基質粒度小，微孔淺，樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高解析度是有益的。根據柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數N就越大。這也進一步證明基質粒度小，會提高解析度的道理。 再者，高效液相色譜的恆溫器可使溫度從室溫調到60C，通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。
液相色譜儀常見故障處理
1、氣泡溢出
流動相內有氣泡,關閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產生的氣泡。原因過濾器長期沉浸於乙酸銨等緩沖液內,過濾器內部由於黴菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡於5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鍾即可;亦可將過濾器浸泡於5%硝酸溶液中12～36小時,輕輕震盪幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續將過濾器浸泡於5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內部的黴菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。
2、柱壓高原因
(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積於柱內; (2)樣品污染沉積。處理對於第一種情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降後,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降後,用常溫純水沖洗,之後用純甲醇沖洗柱子30分鍾;對於第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然後換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然後用純水沖洗,最後甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鍾以上。
3、既無壓力指示,又無液體流過
(1)泵密封墊圈磨損; (2)大量氣泡進入泵體。處理對於第一種情況,更換密封墊圈;對於第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
4、壓力波動大,流量不穩定
原因系統中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
5、出峰不佳,峰分叉
(1)色譜柱被污染; (2)柱頭填料塌陷。處理對於第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然後換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然後用純水沖洗,最後甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鍾以上。如沖洗後依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對於第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鍾以上。
6、峰面積重復性不佳
(1)進樣閥漏液; (2)加樣針不到位。 (3)液量不足. 處理對於第一種情況更換進樣閥墊圈;對於第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液後須快速、平穩地從LOAD狀態轉換到INJECT狀態,以保證進樣量的准確。日常工作中,液相色譜儀的保養非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統和高壓泵中,儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器並更換溶液,每次用完色譜儀後緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質,完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用於不同分析目的的色譜柱不要混用等。