制備薄層色譜常用的方法

❶ 薄層色譜法的操作

除另有規定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡後，倒入塗布器中，在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布（厚度為0.2～0.3mm），取下塗好薄層的玻板，置水平台上於室溫下晾乾，後在110℃烘30分鍾，即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。
手工制板一般分不含粘合劑的軟板和含粘合劑的硬板倆種。
常用吸附劑的基本情況：顆粒的大小，太大洗脫劑流速快分離效果不好，太細溶液流速太慢。一般說來吸附性強的顆粒稍大，吸附性弱的顆粒稍小。氧化鋁一般在100-150目。氧化鋁分為鹼性氧化鋁，適用於碳氫化合物、生物鹼及鹼性化合物的分離，一般適用於PH為9-10的環境。中性氧化鋁適用於醛、酮、醌、酯等PH約為7.5的中性物質的分離。酸性氧化鋁適用於PH4~4.5的酸性有機酸類的分離。氧化鋁、硅膠根據活性分為五個級，一級活性最高，五級最低。
黏合劑及添加劑：為了使固定相（吸附劑）牢固地附著在載板上以增加薄層的機械強度，有利於操作，需要時在吸附劑中加入合適的黏合劑：有時為了特殊的分離或檢出需要，要在固定相中加入某些添加劑。
薄層板的活化：硅膠板於105-110℃烘30分鍾，氧化鋁板於150-160℃烘4小時，可得活性的薄層板。 除另有規定外，用點樣器點樣於薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
點樣直徑不超過5mm，點樣距離一般為1~1.5cm即可。
樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將呈空心環——環形色譜效應。因此配製樣品溶液時應選擇對組分溶解度相對較小的溶劑。
點樣方式有點狀點樣和帶狀點樣。
展開劑也稱溶劑系統，流動性或洗脫劑，是在平面色譜中用作流動相的液體。展開劑的主要任務是溶解被分離的物質，在吸附劑薄層上轉移被分離物質，使各組分的Rf值在0.2~0.8之間並對被分離物質要有適當的選擇性。作為展開劑的溶劑應滿足以下要求：適當的純度、適當的穩定性、低黏度 、線性分配等溫線、很低或很高的蒸氣壓以及盡可能低的毒性。
展開方式總的來講平面色譜的展開有線性、環形及向心3種幾何形式。
A 單次展開 用同一種展開劑一個方向展開一次，這種方式在平面色譜中應用最為廣泛。（垂直上行展開，垂直下行展開，一向水平展開，對向水平展開）
B 多次展開 單向對此展開，用相同的展開劑沿同一方向進行相同距離的重復展開，直至分離滿意，廣泛應用於薄層色譜法
C 雙向展開 用於成分較多、性質比較接近的難分離組分的分離。
薄層展開室需預先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂的蓋，使系統平衡或按正文規定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封室蓋，待展開至規定距離（一般為10～15cm），取出薄層板，晾乾，按各品種項下的規定檢測。
影響展開的因素
A 相對濕度的影響
B溶劑蒸汽的影響（a 展開室的飽和b預吸附）
C 溫度的影響
D 展距的影響與分離度僅正比與展距的平方根。 A 光學檢出法
a自然光（400~800nm）
b紫外光（254nm或365nm）
c熒光一些化合物吸收了較短波長的光，在瞬間發射出比照射光波長更長的光，而在紙或薄層上顯出不同顏色的熒光斑點（靈敏度高、專屬性高）
B 蒸汽顯色法
多數有機化合物吸附碘蒸氣後顯示不同程度的黃褐色斑點，這種反應有可逆及不可逆兩種情況，前者在離開碘蒸氣後，黃褐色斑點逐漸消退，並且不會改變化合物的性質，且靈敏度也很高，故是定位時常用的方法；後者是由於化合物被碘蒸氣氧化、脫氫增強了共軛體系，因此在紫外光下可以發出強烈而穩定的熒光，對定性及定量都非常有利，但是制備薄層時要注意被分離的化合物是否改變了原來的性質。
C 物理顯色法
用紫外照射分離後的紙或薄層後，使化合物產生光加成，光分解、光氧化還原及光異構等光化學反應，導致物質結構發生某些變化，如形成熒光發射功能團。發生熒光增強或淬滅及熒光物質的激發或發射波長發生移動等現象，從而提高了分析的靈敏度和選擇性。
D 試劑顯色法
廣泛應用的定位方法。用於紙色譜的顯色劑一般都適用於薄層色譜，還有防腐劑的顯色劑不適合用於紙色譜及含有有機黏合劑薄層的顯色，又時噴顯色劑後續加熱，這也不是用於紙色譜。
顯色方法a噴霧顯色：顯色劑溶液以氣溶膠的形式均勻的噴灑在紙和薄層。b 浸漬顯色：揮去展開劑的薄層板，垂直的插入盛有展開劑的浸漬槽中，設定浸板及抽出速度和規定在顯色劑中浸漬的時間。
顯色試劑
a 通用顯色劑硫酸溶液（硫酸：水 1：1，硫酸：乙醇1：1）、0.5%碘的氯仿溶液、中性0.05%高錳酸鉀溶液、鹼性高錳酸鉀溶液（還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色斑點）
b 專屬顯色劑
⑸測定比移值
在一定的色譜條件下，特定化合物的Rf值是一個常數，因此有可能根據化合物的Rf值鑒定化合物。
⑹ 薄層掃描
薄層掃描法指用一定波長的光照射在經薄層層析後的層析板上，對具有吸收或能產生熒光的層析斑點進行掃描，用反射法或透射法測定吸收的強度，以檢測層析譜。對於中成葯復方制劑，亦可用相應的原葯材按需要組合作陰、陽對照，然後比較其薄層掃描圖譜加以鑒別。使用儀器為薄層掃描儀。
如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量，則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法，除另有規定外，可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明，結合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果的因素很多，故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的情況下，將供試品與對照品在同一塊薄層上展開後掃描，進行比較並計算定量，以減少誤差。各種供試品，只有得到分離度和重現性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結果。

❷ 制備色譜如何用

yun0145(站內聯系TA)那位高手幫幫忙！！！whate0545(站內聯系TA)制備薄層色譜使用薄層色譜板進行制備分離，從混合物中提取所需要的單體。與常用的柱色譜相比，具有簡單、快速與節省溶劑與人力的優點，是實驗室比較常用的制備方法之一，比較常用的是制備薄層板色譜、制備離心薄層色譜、制備干柱薄層色譜三個類別。
1、 制備薄層板色譜
制備板：一般使用200X200mm的薄層色譜板，吸附劑厚度最好為0.5~1mm，一般不超過2m，平均1mm厚需要的硅膠量為15~20g。為了得到低成本、鋪層均勻的高質量制備薄層板，建議使用上海科哲公司的TD-II型全自動制備薄層鋪板機。
點樣：制備薄層分離的樣品量大，一般採用條帶點樣、不使用圓點點樣；一般1mm厚的硅膠最大約100mg，樣品濃度不宜太稀，應在2~10%為宜。為了得到均勻而規則的點樣結果，建議使用上海科哲公司的SP-3型電動薄層條帶點樣器。同時展開劑的用量比較大，點樣位置要比較高
展開：薄層色譜層析缸要充分飽和，如制備板數量較多，請選用上海科哲公司的制備薄層板架；
顯色：一般使用紫外燈或碘蒸汽等非破壞方式顯色，或在板邊緣進行化學試劑顯色；
回收：將檢測到的樣品連同硅膠一齊刮下，防入砂芯漏斗，使用適當溶劑將組分洗脫，將洗脫溶劑蒸干即可。一般希望洗脫溶劑沸點較低，不與組分發生反應。
制備薄層板色譜優點是使用最為方便、便宜、節省人力，缺點是分離時間較長。
2、 制備離心薄層色譜
與普通制備板有三個不同點：
首先：色譜板是圓的，是徑向色譜，分離能力優於方板；
其次：洗脫液的流動不靠毛細現象，靠離心力，減少了分離時間與脫尾，分離效能很高；
最後：洗脫液是連續流動的，可以非常容易的形成梯度，並且不需要刮下吸附層，這樣可以使色譜板可以反復使用；
所以，制備離心薄層色譜的分離效能與分離速度要遠高於制備薄層板色譜，建議採用上海公司科哲公司的KH-CTLC型制備離心薄層色譜儀。
3、制備干柱薄層色譜
可以看作棒狀的薄層色譜，優點是簡單易行，快速經濟、制備量大。缺點是必須使用可透紫外的管材，而且在收集樣品時要割斷管材，使費用略高。上海科哲公司提供專用的薄層色譜柱。本方法與真空系統聯用，構成減壓真空色譜，性能會得到進一步提升。
這三種不同的方法在不同場合都擁有自己的優勢，總的來講，制備薄層板色譜適用於制備量較小、分離程度較好的場合；制備離心薄層色譜適用於制備量中等，分離程度較差的場合；制備干柱薄層色譜用於大量樣品制備的場合。三種設備如果互相聯用，分離效率會進一步提高。這三種設備也可與柱色譜聯用yun0145(站內聯系TA)非常感謝，很有用。wszyq1985(站內聯系TA)樣品量大的話，可以用硅膠住層析；如果樣兩很少，則制備色譜user53900(站內聯系TA):)制備薄層色譜，說起來是相當的簡單，呵呵我說說我自己的經驗
我上個項目就是提純分離，考慮到這個制備薄層，結果就用了，但是薄層的最大的缺點就是重復性太小了。我上一批能用薄層制備出來，但是，下次作的制備薄層分離的就不好，因為它的影響因素太多了，比如說溫度和濕度，人為的配比，都有一定的誤差，說的最直接的就是這一批下來的板子，這快分離所得到的結果，但是下一塊就不行，我有過這也的經歷。呵呵，日本那邊用這個方法的多，但是要有心理准備

❸ 薄層色譜基本操作有哪幾個關鍵技術 各項操作應該注意什麼

薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬於固－液吸附色譜。是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼備了柱色譜和紙色譜的優點。一方面適用於小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在製作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精製樣品。故此法特別適用於揮發性較小或在較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進行化學反應時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。

薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10×3cm左右）上均勻的塗一層吸附劑或支持劑，帶乾燥、活化後將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加於離薄層板一端約1cm處的起點線上，涼干或吹乾後置薄層板於盛有展開劑的展開槽內，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，乾燥後噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。
注意事項：
1鋪制薄層板：鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發後，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據經驗來定，與空氣濕度有關，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板塗層的厚度，進一步影響上樣量。塗層薄，點樣易過載；塗層厚，顯色不那麼明顯。通常，板的質量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配製和展開系統的飽和。 2點樣：盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹乾或放入乾燥器里晾乾。 薄層色譜用於定量時，點樣是最主要的誤差來源。 供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點樣的同時，樣品在原點就可是成環形展開，原點直徑的擴散促進了這種展開，Kaiser稱之為「上樣環形色譜效應」。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環。這種效應對隨後的先行展開造成很不利的影響。 供試液的溶劑在原點的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點吸收大氣中的水分（特別在高濕度環境）對色譜的影響也不可低估。因此點樣時的同步乾燥或繼後乾燥以除去原點殘存的溶劑是需要的。但應盡可能避免高溫加熱，如用吹風筒加熱，樣品變為固態後，部分或全部強烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進了硅膠的有催化作用的活性表面故態化學反應，導致樣品的變性（尤其熱不穩定物質），至少移動相在展開時對這部分樣品的溶解速度比移動速度慢得多而形成拖尾（斑點拖尾的原因之一）。
3 展開劑配製 選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配製展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例准確度對不同的分析任務有不同的要求，盡量達到實驗室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應使用1ml的單標移液管，移液管應符合計量認證要求，盡管多數時候這不是必須的。 4 展開系統的飽和 一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平台，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，並使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防止邊沿效應，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動作應該盡量輕、快。 5 溫濕度的控制 溫濕度對薄層影響都很大。不凍結的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計主要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應根據實際情況確定。溫度控制使用空調器或冰櫃，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應濃度的硫酸。 6 TLC通用顯色方法 通用顯色方法主要有： 1、紫外照射法：方便、不破壞樣品； 2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高於該兩法單獨使用； 3、熒光試劑：製造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質被鑒別，有熒光物質更明顯； 4、硫酸溶劑：對絕大多數有機物有效，但有破壞性。

❹ 儀器分析——薄層色譜法

薄層色譜法，系將供試品溶液點樣於薄層板上，經展開、檢視後所得的色譜圖，與適宜的塌亮對照物按同法所得的色譜對比，用於葯品的鑒別或雜質檢查的方法。

1.儀器與材料

（1）薄層板

自製薄層板玻板要求光滑、平整，洗凈後不附水珠，晾乾。最常用的固定相有硅膠G、硅膠GF254、硅膠H和硅膠HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小，一般要求直徑為5～40μm.

薄層塗布，一般可分為無黏合劑和含黏合劑兩種；前者系將固定相直接塗布於玻板上，後者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用10%～15％煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加熱4小時），混勻後加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0.2%～0.5％）適量調成糊狀，均勻塗布於玻板上。使用塗布器塗布應能使固定相在玻板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。

市售薄層板分普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板、聚醯胺薄膜和鋁基片薄層板等。

（2）點樣器同紙色譜法項下。

（3）展開容器應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，並有嚴密的蓋子，底部應平整光滑，或有雙槽。

（4）顯色劑見各品種項下規定。可採用噴霧顯色、浸漬顯色或置碘蒸氣中顯色，檢出斑點。

（5）顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的玻璃缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的乾燥器代替。

（6）檢視裝置為裝有可見光、短波紫外光（254nm）、長波紫外光（365nm）光源及相應濾片的暗箱，可附加攝像設備供拍攝圖像用，暗箱內光源應有足夠的光照度。

2.操作方法

（1）薄層板制備

自製薄層板除另有規定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡後，倒入塗布器中，在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布（厚度為0.2～0.3mm），取下塗好薄層的玻板，置水平台上於室溫下晾乾後，在110℃活化30分鍾，即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。

市售薄層板臨用前一般應在110℃活化30分鍾。聚醯胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據需要剪裁，但須注意剪裁後的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在貯放期間被空氣中雜質污染，使用前可用適宜的溶劑在展開容器中上行展開預洗，110℃活化後，放乾燥器中備用。

（2）點樣除另有規定外，用點樣器點樣於薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑為2～4mm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜，一般為1.0～2.0cm。點樣時必須注意勿損傷薄層板表面。

（3）展開展開缸如需預先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，並在壁上貼兩條與缸團戚寬一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封頂蓋，使系統平衡或按各品種正文規定操作。［醫學教育 網搜集整理］

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封頂蓋，待展開至規定距離（一般為10～15cm），取出薄層板，晾乾，按各品種項下的規定檢測。

展開可以向一個方向進行，即單向展開；也可以進行雙向展開，即先向一個方向展開，取出，待展開劑完全揮發後，將薄層板轉動90°，再用原展開劑或另一種展開劑進行展開；亦可多次展開。

（4）顯色與檢視熒光薄層板可用熒光猝滅法；普通薄層板，如有色物質可直接檢視；無色物質可用物理或化學方法檢視。物理方法是檢出斑點的熒光顏色及強度；化學方法一般用化學試劑顯色後，立即覆蓋同樣大小的玻板，檢視。

3.系統適用仔輪性試驗來源：www.examda.com

按各品種項下要求對檢測方法進行系統適用性試驗，檢測斑點的檢測靈敏度、比移值（Rf）和分離效能應符合規定。

（1）檢測靈敏度系指雜質檢查時，採用對照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對照溶液在規定的色譜條件下，在同一塊薄層板上點樣、展開、檢視，前者應顯示清晰的斑點。

（2）比移值（Rf）系指從基線至展開斑點中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比率。

可用計算供試品溶液主斑點與對照品溶液主斑點的比移值進行比較，或用比移值來說明主斑點或雜質斑點的位置。

（3）分離效能鑒別時，對照品與結構相似的葯物對照品製成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點。雜質檢查時，雜質對照品用供試品自身稀釋對照溶液或同品種對照品溶液溶解製成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點，或待測成分與相鄰的雜質斑點應清晰分離。

4．測定法來源：考試大

（1）鑒別可採用與同濃度的對照品溶液，在同一塊薄層板上點樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點的顏色（或熒光）與位置（Rf）應與對照品溶液的主斑點一致，而且主斑點的大小與顏色的深淺也應大致相同。或採用供試品溶液與對照品溶液等體積混合，醫學 教育 網搜集整理 應顯示單一、緊密的斑點；或選用與供試品化學結構相似的葯物對照品與供試品溶液的主斑點比較，兩者Rf應不同；或將上述兩種溶液等體積混合，應顯示兩個清晰分離的斑點。

（2）雜質檢查可採用雜質對照品法、供試品溶液的自身稀釋對照法或雜質對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法並用。供試品溶液除主斑點外的其他斑點應與相應的對照品溶液或系列對照品溶液的主斑點比較，或與供試品溶液的自身稀釋對照溶液或系列自身稀釋對照溶液的主斑點比較，不得更深。

通常應規定雜質的斑點數和單一雜質量，當採用系列自身稀釋對照溶液時，也可規定估計的雜質總量。